母體血漿中RASSF1A基因的胎盤表觀遺傳標記的定量與應用

王騰

本文于2010年5月發表在《產前診斷》上。孕婦血液中循環著的無細胞胎兒DNA是非侵入性產前診斷的重點研究對象。由于RASSF1A基因在胎盤中高甲基化，在母體血液細胞中低甲基化，可以利用甲基化敏感限制性酶特異性消化低甲基化的背景序列，保留完整的高甲基化序列，得到含量較高的高甲基化RASSF1A基因用于檢測無細胞胎兒DNA。

血液樣本來自：20名普通女性、80名孕婦，其中包括妊娠早期20名、妊娠中期20名、妊娠晚期20名與患先兆子癇20名。先兆子癇病例根據臨床癥狀分為緩和與嚴重。抽提出DNA后用Hinp II與HhaI消化低甲基化DNA。以β-肌動蛋白基因為內參，用熒光定量PCR檢測。

酶消化之前，可以檢測到，隨著孕期的發展，母體血漿中RASSF1A增多。而較之對應時期的正常妊娠，先兆子癇RASSF1A的量顯著增多。對妊娠早期、中期、晚期、先兆子癇，RASSF1A含量（平均值）具體分別是：3356copies／ml（范圍1156～5010）、3810copies／ml（范圍1519～6215）、5287copies／ml（范圍：1256～10210）、23732copies／ml（范圍：10056～45121）。酶消化之后，77名孕婦仍能檢測到RASSF1A的存在，而普通女性則檢測不到。3個妊娠不同時期的RASSF1A含量與先兆子癇的RASSF1A含量間均有顯著差異（P＜0.01）。妊娠晚期含量相比妊娠早期與妊娠中期有顯著提高（P＜0.01），妊娠早期與妊娠中期沒有顯著差異（P＞0.05）。較緩和的先兆子癇與較嚴重的先兆子癇有顯著差異（P＜0.01）。對妊娠早期、中期、晚期、較緩和的先兆子癇、較嚴重的先兆子癇，RASSF1A含量（平均值）具體分別是：46copies／ml（范圍0～149）、96copies／ml（范圍 36～251）、527copies／ml（范 圍：258～958）、1672copies／ml（范 圍：1027～2410）、2346copies／ml（范圍：1250～-3625）。

由于酶消化后還能在3個妊娠不同時期的絕大多數樣本中檢測到RASSF1A的存在，而在普通女性中檢測不到，可以證明母體血漿中高甲基化的RASSF1A是胎兒／胎盤來源。研究還提示先兆子癇的嚴重程度可能與RASSF1A含量有關。