PPAR－γ在侵襲性垂體瘤中的表達

婁金峰 牛光明 婁季宇 蘇芳忠 陶勝忠 張鵬遠 尹先印 宋 樂

鄭州大學第二附屬醫院 1）神經外科 2）神經內科 鄭州 450014

垂體腺瘤在組織學上是一種顱內良性腫瘤，但在生物學行為上可分為侵襲性生長和膨脹性生長兩類［1］。過氧化物酶增值因子激活物受體（PPAR－γ）是核受體超家族的成員之一［2］，可誘導多種腫瘤細胞分化，并抑制其惡性增值，可導致腫瘤細胞的凋亡［3］。目前認為PPAR－γ在腫瘤的生長、分化和侵襲中發揮重要作用。我們采用RT－PCR方法檢測［4］并探討PPAR－γ表達在侵襲性垂體腺瘤的發生與發展中的作用和作為預測生物學行為標志物的價值，并進一步預測其在垂體腺瘤預后和治療中的相關作用［5］。

1 材料和方法

1.1 材料 標本取自2009－01～2010－07鄭州大學第一、第二附屬醫院神經外科手術切除并經病理學證實的垂體腺瘤標本42例。男22例，女20例。年齡17～63歲，平均45.6歲。依據內分泌學檢查：無功能腺瘤9例，生長激素腺瘤6例，催乳素腺瘤27例。本研究所有標本均為首次發現，未接受放化療，MR掃描均為大腺瘤（直徑＞1cm）且有完整臨床資料并依據Wilson改良Hardy分類系統分級分期標準分組：侵襲性垂體腺瘤組18例，非侵襲性垂體腺瘤組24例。腫瘤侵襲性的判定標準［6］：（1）Hardy－Knosp［7］分級分期，III級或以上及C－E期認為是侵襲性垂體腺瘤；（2）鞍底硬膜和鄰近骨質經病理證實有腫瘤細胞；（3）影像學檢查見腫瘤包繞雙側頸內動脈。凡符合上述3項中的任何一項者均歸為侵襲性組，余為陰性對照組。

1.2 試劑和方法

1.2.1 試劑及儀器來源：RT－PCR檢測試劑盒（上海禾尤蒙生物科技有限公司），Taq DNA聚合酶（北京全式金生物技術有限公司），dNTP（上海普羅麥格公司），DNA Marker I（北京全式金生物技術有限公司），RT－PCR儀（珠海黑馬醫學儀器有限公司），引物均為北京賽百盛基因技術有限公司提供。1.2.2 PPAR－γ表達活性檢測：PPAR－γ表達使用 RT－PCR技術方法，腫瘤標本經液氮冷凍處理后，放置－80℃超低溫冰箱保存。按說明書操作，經過RNA提取，然后加入反轉錄試劑并PCR擴增后，循環反應條件：94℃預變性5min，94℃30s；55℃35s；72℃90s；27個循環；72℃延伸10min終止反應。然后采用2%瓊脂糖凝膠電泳后觀察。

1.2.3 結果判定：陽性結果判定：PPAR－γ目的基因 RTPCR產物凝膠電泳后在紫外燈下出現476bp的熒光條帶。采用凝膠圖像分析儀對RT－PCR結果進行圖像分析，Bandscan5.0計算條帶的積分光密度（Integrated optical density，IA），IA＝平均吸光度＊面積，目的條帶的相對表達強度用目的片段（IA）／內對照（IA）的相對比值來表示。由內參β－actin作陽性對照。

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0軟件進行統計分析。兩樣本率的比較用χ2檢驗；計量資料采用t檢驗、校正的t檢驗或Fisher確切概率法，結果判斷以α＝0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在42例垂體腺瘤中，PPAR－γ陽性表達22例，陰性表達20例，總陽性率52.4%。在侵襲組中，PPAR－γ陽性表達13例，陰性表達5例，陽性率72.2%；在非侵襲性組中，PPAR－γ陽性表達9例，陰性表達15例，陽性率37.5%。侵襲組與非侵襲組間在PPAR－γ表達陽性率上有顯著差異（P＝0.044，P＜0.05）。侵襲性垂體腺瘤 PPAR－γ表達水平為（0.972±0.103），非侵襲性垂體腺瘤 PPAR－γ表達水平為（0.121±0.013），二者間有顯著統計學差異（t＝163.61，P＜0.05）。在無功能腺瘤中，侵襲組（0.937±0.091）與非侵襲組（0.189±0.016）間PPAR－γ基因表達水平存在顯著差異（t＝88.54，P＜0.05）；在生長激素腺瘤中，侵襲組（0.413±0.055）與非侵襲組（0.307±0.032）間 PPAR－γ基因表達水平無明顯差異（t＝2.45，P＞0.01）；在催乳素腺瘤中，侵襲組（0.930±0.087）與非侵襲組（0.064±0.011）間 PPAR－γ基因表達水平存在顯著差異（t＝20.56，P＜0.05）。電泳圖片如下（圖1）。

圖1 PPAR－γ在侵襲性垂體腺瘤和非侵襲性垂體腺瘤中的表達 M：Marker I

表1 PPAR－γ基因在垂體腺瘤中的表達

3 討論

Hardy等依據蝶鞍及其周圍骨性結構和腦組織變化以及CT和MRI結果將垂體腺瘤分為局限型和侵襲型，即腺瘤直徑＜2.5cm，有分泌癥狀無視力及視野改變者為局限型；腺瘤直徑＞2.5cm，有鞍底破壞，視力及視野改變以及顱高壓癥狀者為侵襲型［8］。近些年對侵襲型垂體腺瘤生物學行為的分子研究日益增多，致力于尋找高增生性、侵襲性的物質依據，以便早期干預，阻止其臨床復發。

有研究證明：垂體腺瘤組織中存在PPAR－γ的高表達［9-12］，但在侵襲性垂體腺瘤與非侵襲性垂體腺瘤之間PPAR－γ的分布是否存在差異，國內外相關的報道大部分是基于蛋白水平的表達［13－14］，關于其分子水平的表達，報道較少。本研究發現，侵襲性腺瘤組的PPAR－γ表達水平明顯高于非侵襲性腺瘤組，并觀察了在不同性別、年齡、大小的垂體腺瘤中PPAR－γ基因的表達情況。垂體腺瘤可能通過某些尚不明確的機制發揮促進PPAR－γ表達的作用，從而促進了侵襲性腺瘤與非侵襲性腺瘤之間PPAR－γ表達水平的差異，這方面的研究有待于進一步擴大樣本量及更為深入的探討。

本研究還發現，在無功能及催乳素性侵襲性垂體腺瘤中PPAR－γ表達水平明顯高于相應非侵襲組腺瘤，其為什么只在這兩種類型垂體瘤中高表達——有待更進一步的研究，這樣有可能使得PPAR－γ成為無功能及催乳素侵襲性垂體腺瘤治療的新靶點。

綜上所述，在侵襲性垂體腺瘤中，PPAR－γ均呈現一定程度的表達，說明其與垂體腺瘤的侵襲性有一定的關聯，但對其作用機制及生物學效應尚未完全清楚，需要進一步探討。

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