冷鮮牛肉中蜂房哈夫尼亞菌(Hafnia alvei)的分離與鑒定

張旭東,閆超杰,孫 劍,姚 佳,蘇明明,王植朔,盧行安

(1.錦州出入境檢驗檢疫局,遼寧錦州 121013;2.遼寧出入境檢驗檢疫局,遼寧大連 116001)

蜂房哈夫尼亞菌(Hafnia alvei)是革蘭陰性兼性厭氧桿菌,存在于人和動物的糞便、自然界水和土壤中,是腸桿菌科哈夫尼亞屬唯一的一種細菌。該菌屬于條件致病菌,在特定的條件下可引起多種腸道感染疾病,同時與傷口感染、化膿、腹瀉等多種疾病有關[1]。蜂房哈夫尼亞菌在腐肉中的分離幾率很高,該菌的存在是造成肉制品腐敗變質,影響風味和保存時間的因素之一。蜂房哈夫尼亞菌喜好厭氧潮濕的環境,真空包裝的冷藏環境是其適合的生長環境,在開始階段,蜂房哈夫尼亞菌存在于肉及肉制品的比例是比較低的,但是經過冷藏儲存,溫度達到它能生長的最低溫度4℃左右之后,其他非低溫耐受細菌的生長受到損害抑制,而蜂房哈夫尼亞菌仍能正常生長繁殖,其數量便急速增加,影響肉制品的風味和品質。本文從真空包裝的出口冷鮮牛肉沙門氏菌檢驗過程中分離出1株可疑菌,通過對其形態特征、生理生化特性的觀察和檢測,同時結合BBL Crystal半自動微生物檢測儀進行鑒定,結果為蜂房哈夫尼亞菌。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種來源 冷鮮真空包裝牛肉,錦州綠源肉業公司提供。

1.1.2 培養基與試劑 緩沖蛋白凍水(BPW)、SC增菌液、TTB增菌液、DHL瓊脂、BS瓊脂、TSI(三鐵糖)瓊脂、EH瓊脂、科瑪嘉顯色平板、沙門菌生化試劑套裝,北京陸橋技術有限責任公司;BBL Crystal半自動檢測革蘭陰性菌試劑盒,BD公司。

1.1.3 儀器 電熱恒溫培養箱、BBL Crystal半自動微生物檢測儀、數碼熒光生物顯微鏡。

1.2 方法[2-3]

1.2.1 取樣 在無菌環境中,打開冷鮮牛肉包裝,用已滅菌的剪刀、鑷子在牛肉的表層和里層肌肉進行取樣,取樣時避開脂肪組織。取樣點要全面有代表性,取冷鮮牛肉100 g左右混勻作為樣品備用。

1.2.2 增菌培養 取冷鮮牛肉樣品25 g放入225 mL BPW增菌液中進行初步增菌,(36±1)℃培養8～18 h,轉移培養物10 mL至100 mL SC增菌液,(36±1)℃培養20 h進行2次增菌培養,同時轉移培養物10 mL至100 mL TTB增菌液(42±1)℃培養20 h。

1.2.3 分離培養 取增菌液1接種環,三段畫線法涂布BS、HE、科瑪嘉顯色平板進行菌落分離培養。平板(36±1)℃培養24～48 h。

2 結果與分析

2.1 菌落觀察

觀察BS、HE、科瑪嘉顯色平板培養后分離出的單個菌落的特征,選擇HE平板上灰黑色至灰綠色、圓形、濕潤、光滑的菌落和科瑪嘉顯色平板上的灰白色、濕潤、光滑的菌落,挑選可疑菌落底層穿刺斜面劃線接種TSI,TSI經24 h培養結果為斜面紅色不產酸,底層黃色產酸,不產氣,H2S陰性。染色鏡檢為革蘭陰性無芽胞、桿狀細菌,見圖1。

圖1 蜂房哈夫尼亞菌革蘭染色結果和瓊脂上的菌落特征Fig.1 The result of Gram stain and the conlony characteristics on agar of H.alvei

2.2 Crystal微生物半自動檢測儀輔助鑒定

取三糖鐵培養物接種革蘭陰性腸桿菌科發酵生化鑒定試劑盒,用Crystal微生物半自動檢測儀輔助檢測鑒定,鑒定結果為蜂房哈夫尼亞菌,見表1。

2.3 生化鑒定

結合伯杰細菌鑒定手冊選擇典型試驗做生化試驗進行確認[4],結果見表2。

表1 微生物半自動檢測儀鑒定結果Table 1 The identification result ofBBL Crystal

續表

表2 蜂房哈夫尼亞菌生化鑒定結果Table 2 The physiological and biochemical characteristics ofHafnia alvei

3 結論與討論

本文綜合形態鑒定、生化試驗和BBL半自動微生物檢測儀的檢測結果,判定從冷鮮牛肉中分離出的可疑菌為蜂房哈夫尼亞菌。該菌屬于條件致病菌,在特定條件下可引起多種腸道疾病,在生活中就有該菌引起腹瀉等疾病的病例[5]。此外,

該菌還可以引起禽畜肉的腐爛變質,對冷鮮保存的禽畜肉的質量風味造成影響。因此,為了保證肉類品質并預防該菌對人類健康的潛在危害,肉品加工生產企業應定期對該菌進行嚴密監控,各有關檢驗機構在冷鮮肉的檢驗過程中也應提高警惕,加大蜂房哈夫尼亞菌的檢驗力度。

[1] R.Podschun,A.Fischer,U.Ullmann.Characterisation ofHafnia alveiisolates from human clinical extra-intestinal specimens：haemagglutintns,serum resistance and siderophore synthesis[J].The Pathollgical Society of Great Britain and Ireland,2001,50：208-214.

[2] 劉秀梅,郭云昌,劉桂華,等.食品衛生微生物學檢驗沙門氏菌檢驗GB/T4789.4-2008[S],2008.

[3] 曹際娟,盧行安,鄭秋月,等.食品微生物學與現代檢測技術[M].大連：遼寧師范大學出版社,2006：41-60.

[4] R.E.布坎南,N.E.吉本斯.伯杰細菌鑒定手冊(第8版)[M].北京：科學出版社,1984：388.

[5] M.John Albert,Khorshed Alam,Moyenul Islam,et al.Hafnia alvei,a Probable Cause of Diarrhea in Humans[J].Infection and Immunity,Apr.,1991,59(4)：1507-1513.