超高效液相色譜-申聯(lián)質(zhì)譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈的殘留置

摘要：建立了用超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法。用甲醇一鹽酸溶液提取試樣中的多菌靈和噻菌靈，經(jīng)固相萃取凈化，以ACQUITY UPLCBEH C18柱分離、串聯(lián)質(zhì)譜測定。多菌靈和噻菌靈的最低檢出限均為1.0 μg/kg；多菌靈回收率為92.8％～103.2％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.57％～5.01％；噻菌靈回收率為90.9％～102.5％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.44％～4.97％。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜；蒜苔；多菌靈；噻菌靈；殘留

中圖分類號：X836.02 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001－4942(2010)04－0089－03

蒜苔是我國人民喜食的一種蔬菜，隨著蔬菜保鮮技術(shù)的應(yīng)用，蒜苔可儲存半年以上而保持品質(zhì)基本不變。多菌靈和噻菌靈是蒜苔儲存中經(jīng)常使用的保鮮劑，經(jīng)噴霧或浸蘸后的蒜苔，不但可以延長儲存時間，還可保鮮、保綠。我國對多菌靈和噻菌靈在蔬菜中的殘留有明確的限量要求，報道的多菌靈和噻菌靈的殘留檢測方法主要有：分光光度法、液相色譜法、離子交換色譜等。采用液相色譜－質(zhì)譜技術(shù)同時測定多菌靈和噻菌靈殘留的方法未見報道。本文介紹了超高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法，操作步驟簡單，定性、定量準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，可以滿足儲藏蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的檢測要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

甲醇：色譜純；乙酸銨：分析純；冰乙酸：優(yōu)級純；超純水：18.2 MΩ；鹽酸：優(yōu)級純；2.0％甲酸(分析純)溶液；甲醇一氨水：含5.0％氨水；多菌靈、噻菌靈標(biāo)樣：99.0％，購自國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)；多菌靈、噻菌靈標(biāo)樣溶液：分別稱取10.0mg多菌靈和噻菌靈標(biāo)樣，加入0.1 mol/L鹽酸0.5 ml溶解，用甲醇定容于同一只100 ml容量瓶中，此溶液中多菌靈、噻菌靈濃度均為100 wg/ml，作為貯備標(biāo)準(zhǔn)液，于4℃避光存儲。

1.2 儀器

超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：WatersQuattro Premier XE，配有ESCI復(fù)合電離源；色譜柱：ACQUITY UPLCBEH C18.50 mm×2.1mm(i，d)，1.7μm；Oasisa MCX固相萃取柱：Waters公司，60 mg/3ml；0.22μm有機(jī)樣品過濾器；食品粉碎機(jī)；均質(zhì)機(jī)；離心機(jī)；氮吹儀。

1.3 試驗條件

1.3.1 色譜操作條件流動相：A相為甲醇；B相為0.1％甲酸水溶液。梯度洗脫：0～0.5 min，10％A；0.5～4.0 min，10％A線性變化至60％A；4.0～5.0 min，60％A線性變化至90％A；5.0～5.1 min，90％A線性變化至10％A；5.1～7.0min，10％A。流速：0.30 mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10 μl。

1.3.2 質(zhì)譜檢測條件ESI正離子檢測模式：毛細(xì)管電壓為3.2 kV；錐孔電壓見表1；離子源溫度為110℃；脫溶劑氣溫度為400℃。

脫溶劑氣(N2)流量t600 L/h；錐孔氣(N2)流量：50 L/h；碰撞室壓力：0.36 Pa。

質(zhì)譜分辨率：單位質(zhì)量分辨；掃描模式：MRM(多反應(yīng)監(jiān)測)。

多菌靈、噻菌靈定性、定量離子見表1。

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線將多菌靈、噻菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液依次稀釋成濃度為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣測定，以定量離子色譜圖中的峰面積定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取5.00 g(精確至0.01 g)充分粉碎并混勻的蒜苔試樣勻漿，置于50ml聚丙烯離心管中，移入甲醇10 ml、0.1 mol/L鹽酸溶液5 ml，20 000 r/min均質(zhì)2 min，超聲波提取15 min，4 000 r/min離心5 min。全部提取液和固形物通過墊有雙層濾紙和5g助濾劑Celite 545的布氏漏斗過濾，濾餅用20ml甲醇分3次洗滌，濾液全部轉(zhuǎn)移至50 ml容量瓶中，用1+1(體積比)的甲醇水溶液定容至刻度，搖勻備用。準(zhǔn)確移取此溶液20 ml于100 ml分液漏斗中，分別用20、10ml正已烷萃取2次，棄去正己烷相，甲醇－水相備用。

取一支MCX固相萃取柱，用5ml甲醇、5 ml水活化，將正己烷萃取后的溶液10 ml通過小柱，依次用2.0％甲酸溶液5 ml、甲醇5 ml淋洗固相萃取柱，棄去流出液后抽干小柱。用5 ml甲醇－氨水洗脫，收集全部流出液于10 rnl刻度試管中，在氮吹儀上緩慢吹至近干，加入1.00 ml甲醇－0.1％甲酸溶液(體積比1：9)，漩渦混合1 min，搖勻。過0.22μm有機(jī)樣品過濾器后進(jìn)樣測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

試樣中多菌靈和噻菌靈常采用反相色譜分離，由于要采用正離子模式檢測，必須使用酸性流動相，以保證兩組分充分電離。試驗了甲醇+0.1％甲酸溶液以及甲醇+乙酸銨溶液等流動相。經(jīng)比較，使用含有甲酸溶液的流動相，兩組分均以陽離子形式存在，保留時間較短，難以分離；使用甲醇+20 mmoL/L乙酸銨溶液為流動相，采用梯度洗脫方式分離試樣中的多菌靈和噻菌靈，兩組分保留時間適中，峰形良好。

2.2 質(zhì)譜條件的選擇

用流動注射法(HA)對1 mg/L多菌靈、噻菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)行質(zhì)譜分析，通過母離子掃描和子離子掃描，確定了多菌靈、噻菌靈的監(jiān)測離子，并優(yōu)化了毛細(xì)管電壓、離子源溫度、脫溶劑氣溫度和脫溶劑氣流量、錐孔氣流量、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)。

2.3 提取凈化方法

試樣采用甲醇一鹽酸溶液提取，目的是將多菌靈和噻菌靈轉(zhuǎn)化為鹽酸鹽，以保證較好的提取效果。由于甲醇的存在，蒜苔中的脂溶性色素也被部分提取出來，用正己烷萃取2次，可有效去除絕大部分脂溶性色素，多菌靈和噻菌靈由于成為陽離子而保留在甲醇一水相中。采用兼有陽離子交換和反相機(jī)理的MCX固相萃取柱再次凈化，可以選擇性地保留多菌靈和噻菌靈陽離子，而有效去除其它的雜質(zhì)。經(jīng)加標(biāo)回收試驗證實，基本無基質(zhì)效應(yīng)，凈化效果顯著。

2.4 線性范圍和檢出限

配制系列濃度的多菌靈、噻菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣測定，以多菌靈(噻菌靈)的峰面積(Y)對其濃度(x，ng/m1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為Y=1529.4X+416.18(多菌靈)，Y=1386.5X+354.21(噻菌靈)；R2分別為0.9982(多菌靈)、0.9991(噻菌靈)。結(jié)果表明，在1.0～100.0 ng/ml范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，符合定量要求。

在本試驗選定的最佳檢測條件下，當(dāng)空白試樣中多菌靈/噻菌靈的添加量為1.0 μg/kg時，定量離子色譜峰的信噪比s/n≥10，由此確定方法的最低檢出限為1.0μg/kg。

2. 5方法精密度與回收率

向不含多菌靈、噻菌靈的蒜苔試樣中添加1.0、5，0、10.0μg/kg 3個濃度水平的多菌靈和噻菌靈標(biāo)樣溶液，分別進(jìn)行6次平行測定。結(jié)果多菌靈回收率為92.8％～103.2％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.57％～5.01％；噻菌靈回收率為90.9％～102.5％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.44％～4.97％。

3 結(jié)論

建立了固相萃取凈化、超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用測定蒜苔中多菌靈和噻菌靈殘留量的方法，應(yīng)用該方法測定了30批市售蒜苔樣品，結(jié)果有9批樣品檢出噻菌靈殘留，1批檢出多菌靈殘留，檢出量在12.4～148 μg/kg之間。應(yīng)用結(jié)果表明，該方法測定蒜苔中的多菌靈、噻菌靈殘留，操作簡單，凈化效果明顯，定性、定量準(zhǔn)確，靈敏度高，尤其在低殘留量樣品的定性、定量檢測中，優(yōu)勢明顯。