腦出血患者IL-10的表達及其臨床意義

[摘要] 目的 觀察腦出血患者IL-10蛋白的表達情況，探討IL-10蛋白在腦出血患者中表達特點與腦出血時間的關系和意義。方法 應用免疫組化方法檢測65例腦出血患者出血灶周圍腦組織IL-10蛋白的表達。結果 65例腦出血灶周邊腦組織標本中，IL-10蛋白陽性表達率為89.2%(58/65)，10例正常腦組織中IL-10蛋白陽性表達率為20.0%(2/10)，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。IL-10蛋白在腦出血后不同時間陽性表達率分別為:出血后<24h 89.4%(42/47)，出血后>24h 88.9%(16/18)，出血組之間比較無差異(P>0.05)。結論 IL-10可減輕腦水腫并能減輕血腫周圍炎癥反應、增加周圍神經(jīng)細胞數(shù)，提示IL-10對腦出血有神經(jīng)保護作用。

[關鍵詞] IL-10蛋白; 腦出血; 免疫組化

[中圖分類號] R743.34 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2010)05-110-02

The Expression of IL-10 in Intracerebral Hemorrhage and Its Significance

YANG Yanli1 WEI Maofu2 LIU Jingwen2

1.Department of Medicine 2.Department of Pathology，Humen Hospital，Dongguan 523900，China

[Abstract] ObjectiveTo investigate the expression of IL-10 in intracerebral hemorrhage(IHC)and find out its significance and its correlationwith the time of intracerebral hemorrhage. MethodsThe expressionof IL-10 were assessed by immunohistochemistry staining. ResultsIn 65 cease of intracerebral hemorrhage positive expression rates of IL-10 was 89.2%(58/65)and 20.0%(2/10)in normal brain tissues. The positive rate was significantly higher in intracerebral hemorrhage than in normal brain tissues(P<0.05). IL-10 positive expression rates were 89.4%(42/47)in 24h，and 88.9%(16/18)after 24h of intracerebral hemorrhage. IL-10 expression was irrelated with time of operation after intracerebral hemorrhage(P>0.05). ConclusionInterleukin-10 has protective efects on nervous system in intracerebral hemorrhage.

[Key wolds]IL-10; Intracerebral hemorrhage; Immunohistochemistry

白細胞介素-10(IL-10)是由單核巨噬細胞、淋巴細胞等產生的具有廣泛生物活性的細胞因子，具有很強的免疫抑制及抗炎作用。近年來，國內外研究發(fā)現(xiàn)急性腦出血后血液及腦脊液中白細胞介素-10濃度明顯升高[1，2]，提示白細胞介素10在急性腦出血的發(fā)生、發(fā)展中具有一定的作用。我們采用免疫組織化學技術對65例腦出血患者和10例正常腦組織中IL-10表達的情況進行研究，探討IL-10在腦出血灶周圍的表達特點及意義。

1 材料和方法

1.1 標本來源

收集陜西省延安市人民醫(yī)院和延安大學附屬醫(yī)院2003年1月～2006年12月期間進行手術清除血腫的腦出血患者65例，男28例，女37例，年齡25～83歲，平均48.6歲。手術時機:發(fā)病24h內手術者47例，24h后手術者18例，正常腦組織10例取自同期住院進行顱內減壓的患者。所有病人入院時均行頭顱影像學檢查進行證實。

1.2 試劑及免疫組化染色方法

鼠抗人IL-10單克隆抗體、抗體稀釋液及試劑盒均購自基因公司。其稀釋度為1∶50。所有標本均用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，按二步法進行免疫組化染色，染色前標本切片進行抗原修復處理，一抗在室溫孵育1h，二抗在室溫下孵育0.5h，DAB顯色，蘇木素復染。用已知陽性的對照片作IL-10抗體的陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 判斷標準

所有免疫組化片子用奧林帕斯BX50顯微鏡進行定性和半定量評估。請三個高職稱病理醫(yī)生在不知道臨床信息的情況下獨立地對所有免疫組化片子進行評估。陽性判斷標準為胞質出現(xiàn)了黃色或棕黃色顆粒狀，并用陽性片作為對照。每張切片隨機選擇10個視野，40×10高倍顯微鏡下觀察計數(shù)。參照文獻[3]方法根據(jù)染色的強度及陽性細胞的數(shù)量分別計分:A:染色強度:不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分;B:陽性細胞所占百分率:<5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。根據(jù)染色強度與陽性細胞數(shù)得分之積分為4級，即(-)為0分，弱陽性(+)為1～2分，陽性(++)為3～4分，強陽性(+++ )為5～6分。將A×B作為其染色的計數(shù)，只有A×B>3 分才算免疫反應陽性，并按乘積分數(shù)將染色結果分為4 個等級:-(0～2 分)、+(3～5 分)、+ +(6～8分)和+ + +(9～12分)。

1.4 統(tǒng)計學方法

統(tǒng)計學處理應用SPSS10.0軟件進行χ2檢驗和Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

IL-10主要表達于胞質中;出血灶邊緣及壞死區(qū)表達明顯增多。65例腦出血灶周腦組織IL-10表達的陽性率為89.2%(58/65);10例正常腦組織IL-10蛋白表達20.0%(2/10)，二者比較有顯著性差異(P<0.01);IL-10在腦出血24h內陽性表達率為89.4%(42/47)，超過24h陽性表達率為88.9%(16/18)，出血后不同時間陽性表達率比較，兩者無差異(P>0.05)。見表1。

3 討論

白細胞介素-10(IL-10)在1989年由DNAX研究所首次在小鼠的輔助性T2細胞培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，1990年Moore將其命名為白細胞介素-10。白細胞介素-10的生物學活性很廣泛，在機體中具有很強的免疫抑制和抗炎癥作用，其作用包括抑制輔助性T1細胞類淋巴因子、TNF-α、IL-1β、IL-2和IFN等的合成及其活性，抑制輔助性T0細胞向輔助性Tl細胞轉化[4]，抑制單核細胞依賴性輔助性Tl細胞增生，抑制單核組織細胞表面MHC-Ⅱ的表達，減低單核組織細胞的抗原提呈能力，阻止抗原特異性的單核巨噬細胞因子的產生，抑制NK細胞的活性，抑制T細胞凋亡和反應性氮氧化物的產生;促使單核組織細胞以外的依賴性T細胞增殖和成熟，激活肥大細胞(mast cell)和其干細胞增殖，激活抗原特異性B細胞增殖，并分化為能產生抗體的漿細胞，以及抑制促炎癥細胞因子(IL-1，TNF-α，IL-6)、NO和MHC-II的表達，并抑制炎癥細胞因子的遷移[4]，從而發(fā)揮抗炎作用。有人研究發(fā)現(xiàn)從側腦室或尾靜脈注入白細胞介素-10能明顯縮小大鼠的腦梗死面積、減輕缺血對大鼠大腦的損傷，對缺血性腦損傷的預后有較好的改善作用[5]。本研究表明IL-10可減輕腦水腫并能減輕血腫周圍炎癥反應，增加周圍神經(jīng)細胞數(shù)，提示IL-10對腦出血有神經(jīng)保護作用。適當?shù)目寡捉橘|治療有助于控制炎癥，恢復內環(huán)境穩(wěn)定，如果抗炎介質治療過量，也可產生免疫功能抑制和感染的易感性，白細胞介素-10水平越高免疫抑制就越嚴重。

[參考文獻]

[1] NicamhllaoibhR，HeenanM，ClearyI，et al. A1tered expression of mRNAs for apoptosis limed ulating proteins in a low level muhidrugr- esistant variant of a human IIlI1g carcinoma cell line that also expresses mdrl mRNA[J]. Int J Cancer，1999，82:368-376.

[2] Zhou YZ，Chen HZ，Yang QY，et al. Study on the establishment and mechanism of cisplatin resitant human ovarian cancer cell subline[J]. National Medical Journal of China，1996，76:680-683.

[3] Liu WH，Kaur M，Wang G，et al. Inverse PCR-based RFLP scanning identifies low-level mutation signatures in colon cell and turmors[J]. Cancer Res 2004，64:2544-2551.

[4] DU C，F(xiàn)ang M，LI Y，et al. Smac，a mitochondral protein that promotes cytochrome C-dependent Caspase activation by eliminating Lap inhibi- tion[J]. Cell，2000，102:33-42.

[5] Grilli M，Barbieri I，Basudev H，et al. Interleukin-10 modulates neuronal thre-Shold of vulnerability to ischemic damage[J]. Eur J Neurosci，2000， 12(7):2265-2272.

(收稿日期:2009-11-23)