２０種中草藥提取物對一株柑橘采后致腐真菌的抑制作用

胡　梅　陳根強　杜根平

摘要:為進一步研發安全、高效的柑橘防腐保鮮劑提供一定的理論依據。采用濾紙片法和生長速率法,利用20種中草藥的乙醇提取物對一株柑橘采后致腐真菌P01進行抑菌試驗。結果表明,用濾紙片法進行抑菌作用測定,發現射干、苦參、厚樸、丁香、木香、連翹、肉桂的乙醇提取物對P01具有一定的抑制作用。用生長速率法,以提取物質量濃度15 mg/mL對初次篩選出的7種中草藥提取物進一步進行抑菌試驗,發現丁香、射干、厚樸、肉桂、苦參、木香的乙醇提取物抑菌率都在50%以上,效果最好的是丁香乙醇浸提物,抑菌率達到90.00%,其次是射干乙醇浸提物,其抑菌率達81.25%。

關鍵詞:中草藥提取物;柑橘;致腐真菌;抑菌作用

中圖分類號:S666文獻標識碼:A文章編號:1006-6500(2009)02-0056-03

Inhibition of 20 Kinds of Chinese Herbs Extracts Against a Rot-causing Fungus in Postharvest Citrus Fruits

HU Mei,CHEN Gen-qiang,DU Gen-ping

(College of Forestry,Henan University of Science and Technology,Luoyang,Henan471003,China)

Abstract:The aim of test was to provide basis for researching safe and concentrated preservatives of citrus fruits. The inhibition of alcohol extracts from 20 kinds Chinese herbs againast a rot-causing fungus in postharvest citrus fruits were tested through filter paper method and plate growth rate method. In the test of filter paper method, alcohol extracts of Rhizoma belamcandae, Sophora flavescens Ait, Citrus grandis Tomentosa, Flos caryophyllata, Aucklandia lappa, Forsythia suspense,Cinnamomi cassiae Presl, expressed inhibition against P01. In the test of plate growth rate method with alcohol extracts at 15 mg/mL, the inhibitory rates of alcohol extracts from Flos caryophyllata, Rhizoma belamcandae, Citrus grandis Tomentosa, Cinnamomi cassiae Presl, Sophora flavescens Ait, Aucklandia lappa were over 50%. The inhibitory rates of alcohol extracts from Flos caryophyllata and Rhizoma belamcandae were 90.00% and 81.25% ,respectively.

Key words: Chinese herb extract;citrus;rot-causing fungus;inhibition

柑橘是世界產量最多的水果,也是我國主要的水果之一[1]。柑橘采后在貯藏運輸的過程中,常常由于病原菌的侵染而造成腐爛,輕則影響果實的食用品質和商品價值,重則造成大量爛果,導致嚴重的經濟損失[2]。目前,柑橘防腐多采用化學防腐劑,如多菌靈、甲基托布津等,這些化學物質雖然能夠殺死病原菌,達到防腐保鮮的目的,但是對人體健康卻有一定的不利影響,甚至出現致癌、致畸、致突變等潛在危害。因此,從20世紀80年代人們就開始尋找新的、更安全有效的方法來控制水果采后病害[3]。

中草藥作為我國的寶貴遺產其抑菌作用早已廣泛應用于醫藥行業,很多研究已證實了中草藥的殺菌成分對果蔬防腐保鮮的效果[3]。而且植物源防腐劑具有高效、低毒、易降解、不污染環境等優點,已成為傳統化學防腐劑的有效替代[4]。本試驗利用20種中草藥的乙醇提取物對一株柑橘采后致病菌進行了抑菌試驗,以期為進一步研發安全、高效的柑橘防腐保鮮劑提供一定的理論依據。

1材料和方法

1.1材 料

1.1.1供試菌株供試菌株由柑橘采后一腐爛病果上分離純化得到,經鑒定為意大利青霉(PeniciLLium italicum Wehmer),編號為P01。

1.1.2供試中草藥供試的20種中草藥均購于河南洛陽張仲景大藥房。20種中草藥及利用部位分別是:大黃(根)、丁香(花蕾)、木香(根)、柴胡(根)、艾葉(葉)、連翹(果實)、白頭翁(根)、虎杖(莖)、五味子(果實)、厚樸(果皮)、金銀花(花蕾)、射干(根)、黃芩(根)、苦參(根)、蛇床子(種子)、細辛(全草)、蒲公英(全草)、辛夷(花蕾)、甘草(根)、肉桂(樹皮)。

1.1.3供試培養基供試培養基為PDA培養基。

1.2方 法

1.2.1中草藥提取物的制備將干燥的中草藥材料粉碎,過0.45 mm篩,稱取15.0 g,浸于50 mL 80%的乙醇中,28 ℃,80 r/min振蕩提取48 h,再在28 ℃下靜置提取5 d,3層紗布過濾,取濾液旋轉蒸發(50 ℃)至稀膏狀,殘余物溶于10 mL 80%乙醇中,搖勻,得中草藥提取母液,放入4 ℃冰箱中保存備用[5,6]。

1.2.2中草藥提取物對P01抑制作用的初步測定(濾紙片法)吸取1 mL供試菌孢子懸液(2.50×104個/mL)于PDA平板上,用無菌涂布棒涂抹均勻。然后放入直徑為6 mm的含藥濾紙片(將無菌濾紙片在各種中草藥提取液中浸泡2 h),每皿放1片。對照為80%的乙醇浸泡過的濾紙片,重復6次。于26 ℃恒溫培養箱內培養3 d后用十字交叉法測量抑菌圈直徑大小,計算抑菌圈寬度[5]。

抑菌圈寬度(mm)=(抑菌圈直徑-濾紙片直徑)/ 2

1.2.3中草藥提取物對P01抑菌作用的再次測定(生長速率法)將1.2.2方法篩選出的幾種具有抑菌活性的中草藥提取液各準確吸取1 mL,與99 mL冷卻至50 ℃左右的PDA培養基混合均勻,制成1%的含藥培養基(培養基含藥量為15 mg/mL),同時為了防止細菌污染,培養基中還加入了5 mg/mL的鏈霉素1 mL。取含藥培養基100 mL均勻倒入6個培養皿(Φ9 cm)中制成平板,在每個平板中央接直徑0.4 cm的P01菌片1片,以加1 mL 80%乙醇和1 mL鏈霉素(5 mg/mL)的PDA培養基作對照。置于26 ℃恒溫培養箱內培養3 d,用十字交叉法測量菌落直徑大小,并計算抑菌率[7]。

1.3數據處理分析

差異顯著性分析采用DPS(Data Processing System)統計軟件LSD法進行。

2結果與分析

2.1中草藥提取物對P01抑制作用的初步測定

以P01為供試菌,采用濾紙片法,對20種中草藥的乙醇浸提物進行了抑菌作用試驗,結果見表1。

由表1可以看出,以上20種中草藥乙醇提取物中,射干、苦參、厚樸、丁香、木香、連翹、肉桂7種中草藥的乙醇提取物對P01菌絲的生長具有一定的抑制作用,表現為:射干>苦參>肉桂>厚樸>丁香>木香>連翹。而含其它13種中草藥乙醇提取物的濾紙片周圍均未出現抑菌圈,說明這些中草藥乙醇提取物對P01沒有抑制作用或抑制作用不強。

2.2中草藥提取物對P01的抑制作用的再次測定(生長率法)

對前面篩選出的具有一定抑菌作用的7種中草藥乙醇提取液,用生長速率法又進一步進行了抑菌作用測定,結果見表2。

由表2可以看出,與對照比較,以上幾種中草藥乙醇提取液對P01菌絲的生長具有不同的抑制作用,表現為:丁香>射干>厚樸>肉桂>苦參>木香>連翹。其中丁香的抑制效果最好,抑菌率達到90.00%,其次是射干,抑菌率為81.25%,厚樸、肉桂、苦參、木香的抑菌率也在50%～70%之間,說明這6種中草藥的乙醇提取物對P01的抑菌效果較好,尤其是丁香和射干。

從試驗結果來看,用濾紙片法和生長速率法得到的結果不盡相同,分析其原因,可能主要是因為提取物的濃度不同,濾紙片法所用的直徑6 mm的濾紙片浸入中草藥提取物中,所吸取的藥液量雖不能確定,但畢竟有限,而有些中草藥提取物可能在其濃度較低時抑菌效果并不好,例如丁香,在用濾紙片法試驗時抑菌效果并不突出,但在生長速率法試驗時,在提取物濃度為15 mg/mL時,抑菌效果最好,可能就是此原因。

3結論與討論

⑴ 用濾紙片法進行抑菌作用測定,發現射干、苦參、厚樸、丁香、木香、連翹、肉桂的乙醇提取物對一株柑橘采后致腐菌P01具有一定的抑制作用。用生長速率法,以提取物質量濃度15 mg/mL進行抑菌試驗,發現丁香、射干、厚樸、肉桂、苦參、木香的乙醇提取物抑菌率都在50%以上,其中最好的是丁香乙醇浸提物,其抑菌率達到90.00%,其次是射干乙醇浸提物,其抑菌率達81.25%。

⑵ 我國具有豐富的中草藥資源,在本試驗中,僅選用了20種中草藥,通過簡易提取方式得到其粗提物,對柑橘采后的一種致腐菌進行了抑菌作用試驗,因此,可能還會有抑菌效果更好的中草藥未被采用,有待于進一步去探索。

⑶ 目前,中草藥提取物用于柑橘防腐保鮮方面的研究報道還較少,應該進一步加強這方面的研究。本試驗中發現的兩種中草藥乙醇提物的作用方式、作用機理以及在活體上的防腐效果還有待于進一步研究。

參考文獻:

[1] 王士剛.柑橘貯藏保鮮技術[J].湖北農業科學,1989(10):33-34.

[2] 鄧雨艷,曾凱芳.柑橘果實采后侵染性病害防治技術研究進展[J].食品科技,2008(4):211-214.

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[6] 黃奔立,朱華,顧艷,等. 中草藥對5種蔬菜病菌的抑制作用[J]. 揚州大學學報:農業與生命科學版,2006,27(3):84-86.

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