兩種檢驗水質總大腸菌群方法的比較研究

劉書花

摘 要:總大腸菌群是評價水環境質量的重要衛生指示菌之一,水質總大腸菌群的監測檢驗對保障人體健康和維護良好的生態環境有著重要的意義。選擇山東省內有代表性的210份不同水質分別用多管發酵法和紙片法進行檢驗比較,經過分析,發現紙片法比多管發酵法更適合于日常水質環境的監測檢驗。

關鍵詞:總大腸菌群;多管發酵法;紙片法;比較研究

中圖分類號:X83

文獻標識碼: A

文章編號:1005-569X(2009)06-0027-02

1引言

總大腸菌群是評價水環境質量的重要衛生指示菌之一,水質總大腸菌群的監測檢驗對保障人體健康和維護良好的生態環境有著重要的意義。按照國家標準,對于水質總大腸菌群的檢驗,常采用傳統的多管發酵法[ 1,2 ]。但傳統方法實驗前要配制大量的初發酵、復發酵以及選擇性培養基,操作繁瑣, 費時費力,而且,當需要檢驗的樣品量特別大時,來不及做到快速及時的檢測,不利于水質環境的日常監測和監督管理。

用紙片法進行檢測,可以避免繁瑣的前期準備工作,提高工作效率。但是紙片法目前還未納入國家標準方法,對于其檢驗的精確性等問題,有待進行試驗考證和分析評價。為此,我們選擇山東省內有代表性的210份不同水質,分別用多管發酵法和紙片法進行比較檢驗,發現兩法的檢測結果是一致的。而且紙片法更容易觀察結果,具有簡便、快速、省時省力等優點。因此,我們認為應該用紙片法來代替發酵法應用于水質日常監測檢驗工作中。

2 材料與方法

2.1樣品來源

本項實驗用無菌廣口瓶盛裝采集水樣,共采集山東省內7個不同地市的210份地下水、地表水和污水水樣進行檢測,分別代表不同水質。

2.2 材料與試劑

乳糖膽鹽發酵培養基(批號081215)、營養瓊脂(批號080102)、EMB瓊脂(批號070713)、乳糖復發酵培養基(批號071012)均為北京陸橋公司產品,按使用說明配制備用。

總大腸菌群檢測紙片由山東省疾病控制中心提供。

2.3 實驗原理、方法

2.3.1 多管發酵法

多管發酵法是根據總大腸菌群應具有的生物特性,如革蘭氏陰性無芽胞,在37 ℃,24 h 內能發酵乳糖并產酸產氣,能在選擇性培養基上產生典型菌落。實驗前要配制大量的初發酵、復發酵及選擇性培養基。多管發酵法按照國家標準GB/T5750.12-2006以及《水和廢水監測分析方法》(第四版)進行操作檢驗,即乳糖膽鹽發酵試驗(初發酵) 、平板分離培養、乳糖發酵證實試驗(復發酵)。

2.3.2 紙片法

紙片法快速檢測大腸菌群的原理[ 3 ]是利用紙片上的營養,使大腸菌群迅速生長繁殖,進一步分解乳糖產生酸,酸又能使溴甲酚紫指示劑由淡天藍色轉變成黃色,在黃色區域生長的大腸菌群所產生的脫氫酶使紙片上的基質分解脫氫,脫下氫轉給受體氯化三苯四氮唑( TTC),此時TTC接受氫之后,由無色變成還原后不溶于水的紅色物質———三苯甲胺。紙片法檢驗步驟與多管發酵法基本類似,采取與多管發酵法相同的接種量。

3 結果

3.1實驗結果觀察比較

對所采集的水樣進行檢驗,多管發酵初發酵試驗若試管同時產酸產氣,則為陽性管,需繼續進行下一步的平板分離培養和乳糖復發酵證實試驗。但是,對于比較臟的環境水樣,總大腸菌群污染嚴重時,雙料初發酵試驗試管會全部變黃,并且顏色非常渾濁,很難觀察到試管中小倒管內的產氣情況,給試驗結果的判斷帶來困難。而使用紙片法檢驗則避免了這一問題。根據紙片檢驗法的結果判定標準[ 4,5 ],只要紙片上出現紅色斑點且周圍變黃色,即為陽性結果,反之,即為陰性。

3.2不同水質陽性檢出(管)張數比較

210份檢樣以24 h的結果判定,比較紙片法和多管酵法對于3種水質檢測的陽性管(張)數。在表1中可以看出,對于3種不同水質,紙片法比多管發酵法的陽性檢出率要高,這是因為紙片法更容易觀察結果,避免了漏檢的情況。

3.32種檢測方法的符合率比較

210份檢樣以24 h的結果判定,表2中列出了2 種方法對210份樣品檢測結果,紙片法檢出162 份,檢出率為77.14%,發酵法檢出156份,檢出率為74.28 %,經統計學處理, 差異無統計學意義(χ2 =0.125,P > 0.05),說明紙片法檢測與國家標準方法的符合率很好。

4 結論

大腸菌群作為衡量水環境質量的兩個主要衛生指標之一,按照國家標準檢驗方法,常采用傳統的多管發酵法檢驗。但傳統發酵法操作繁瑣,檢驗前需要配置大量的培養基,不利于水環境質量的日常檢測和監督管理。而紙片法避免了繁瑣的前期準備工作,同時更容易觀察結果,具有簡便、快速、省時省力等優點。因此,我們認為應該用紙片法代替發酵法應用于水質日常監測檢驗工作中。

參考文獻:

[1] GB/T5750.12-2006.生活飲用水標準檢驗方法微生物指標[S].2006.

[2] 國家環保總局. 水和廢水監測分析方法(第4 版)[M ].北京:中國環境科學出版社, 2002.

[3] 陳家濤. 紙片法快速檢測礦泉水大腸菌群與發酵法的對比[J].長春大學學報,2008,(10): 82~84.

[4] 闞方琦,馬樂好,王方木,等.液體飲品大腸菌群紙片法檢測效果評價[J].預防醫學論壇,2008, 14(1):24~34.

[5]井良義,楊艷麗,劉軍.大腸菌群快檢紙片質量鑒定標準研究[J].中國公共衛生,2002,18(1):98.