枸杞多糖與丹參酮延緩小鼠皮膚衰老的實驗研究

梁　杰　李　響

【摘要】 目的 比較枸杞多糖與丹參酮對衰老小鼠皮膚的抗衰老作用。方法 60只雌性昆明種小鼠，隨機分為4組(n=15)：正常對照組皮下注射生理鹽水；其余3組每日頸背部皮下注射 D-半乳糖［1000 mg/(kg?d)］ 造成小鼠衰老模型，同時各組分別灌胃生理鹽水(衰老模型組)、枸杞多糖［200 mg/(kg?d)］、丹參酮［1 500 mg/(kg?d)］。42 d后，測定小鼠背部皮膚組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力、過氧化脂質代謝產物丙二醛(MDA)含量和皮膚羥脯氨酸(Hyp)含量。結果 枸杞多糖可使衰老模型小鼠皮膚中MDA含量顯著降低,較丹參酮組明顯； 但SOD活力顯著升高,不及丹參酮組改變顯著；枸杞多糖和丹參酮均可使羥脯氨酸含量升高，且效果相當。結論 枸杞多糖與丹參酮都有顯著的抗小鼠皮膚衰老作用，枸杞多糖清除皮膚中脂質過氧化代謝產物方面較丹參酮明顯,而提高皮膚抗氧化酶活力則不及丹參酮顯著，在增強成纖維細胞活性方面兩者效果相當。

【關鍵詞】皮膚衰老；枸杞多糖；丹參酮

Experimental research on the skin aging function of tanshinoneand lycium barbarum polysaccharides

LIANG Jie，LI Xiang.Department of Plastic Surgery，Affiliated Hospital of Guangdong Medical College,Zhanjiang,Guangdong 524001，China

【Abstract】 Objective To compare the anti-aging effects of Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone on the skin of D-galactose-induced mice aging model．Methods 60 female mice were randomly divided into 4 groups (n=15):Mice in normal control group received subcutaneous injection of normal saline and mice in the other 3 groups received cervicodorsal injection of D-galactose［1000 mg/(kg1?d)］ for 42 d to establish subacute aging model.The experimental groups included agingmodel group (without further treatment)，Lycium barbarum polysaccharides ［200 mg／(kg?d)group，Tanshinone ［1 500 mg／(kg?d)］ group．Forty two days later，the dorsal skin samples were collected to determine SOD activities、MDA and hydroxyproline contents． Results The effect of Lycium barbarum polysaccharides isbetter than Tanshinone significantly in decrease the content of MDA，but in increase the SOD activity Tanshinone have better effection.Both of them can increaseing the hydroxyproline contents，but these is no different.Conclusion Both Lycium barbarum polysaccharides and Tanshinone have noticeable anti-skin aging effects，Lycium barbarum polysaccharides is better than Tanshinone in clearing skin lipid peroxidation metabolites aspects，but Tanshinone have better effection in enhancing Oxidase activity，they have no different effection in enhanceing fibroblasts.

【Key words】Skin aging；Lycium barbarum polysaccharides；Tanshinone

當今社會由于老齡化的加速到來以及人們對美的強烈追求，希望借助醫學手段延緩衰老，永保青春。枸杞為茄科植物枸杞成熟果實，明朝李時珍在《本草綱目》中記載：枸杞有“久服，堅筋骨，輕身不老，……，令人長壽” 等功效。枸杞多糖(lycium barbarumpoysaccharides，LBP) 是枸杞子的主要活性成分之一，有抗氧化延緩皮膚衰老的作用。丹參酮是唇形科植物(salvia miltorrhiza Bge)的有效成分，有明顯抗衰老作用［1］。筆者在D-半乳糖所致小鼠衰老模型基礎上分別灌服枸杞多糖或丹參酮，比較二者對衰老小鼠皮膚中某些抗衰老指標的影響。

1 材料與方法

1.1 動物 3月齡清潔級雌性昆明種小鼠60只，平均體質量(25±2) g購自廣東醫學院實驗動

物中心，隨機分為4組，正常對照組、D-半乳糖衰老模型組、枸杞多糖組、丹參酮組，每組15只。

1.2 方法

1.2.1 實驗步驟 灌胃、皮下注射均按無菌操作進行。42 d 后，小鼠斷頸處死，背部皮膚取下后迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚抗衰老指標用。正常對照組：每日頸背部皮下注射生理鹽水0．2 ml，同時灌服生理鹽水(0．1 ml /10 g)；D-半乳糖(衰老模型)組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg?d）］，同時灌服生理鹽水(0.1 ml / 10 g)；枸杞多糖組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［(1000 mg/（kg?d)］，同時灌服枸杞多糖［200 mg/（kg? d)］； 丹參酮組：每日頸背部皮下注射D-半乳糖［1000 mg/（kg?d)］，同時灌服丹參酮 ［1 500 mg/（kg?d)］。

1.2.2 10%皮膚勻漿的制備 取脫毛后背部皮膚組織0.5 g左右，經預冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍重量預冷生理鹽水，先取2/3量倒入裝有組織塊燒杯中，剪碎組織塊后倒入勻漿管中，將剩余1/3生理鹽水沖洗燒杯壁，一起倒入勻漿器中進行勻漿，上下轉動研磨數10次(10~15 min)，充分研磨，使組織漿液化。再將制備好的10%勻漿用低溫低速離心機以轉速3000轉/min離心15 min，取上清液備用。

1.2.3 皮膚SOD活力測定 參照南京建成生物工程公司SOD試劑盒說明書方法測定SOD活力，單位以U/ ml表示。

1.2.4 皮膚MDA含量測定 硫代巴比妥酸（TBA）法測定MDA含量［2］。

組織中MDA (μmol/g) = (測定管吸光度-測定空白管吸光度)/(標準管吸光度-標準空白管吸光度)×標準品濃度(10 μmol/L)/蛋白含量(g / L)

1.2.5 皮膚羥脯氨酸含量測定參見文獻［3］。

1.3 統計學方法 采用SPSS 11.0統計分析軟件，計量資料均以均數±標準差x±s表示，多個樣本均數的比較用方差齊性檢驗，當總體方差齊同時選擇LDS法分析；方差不齊時選擇Dunnet C法分析。P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

小鼠皮膚SOD活力及MDA含量檢測結果見表1。小鼠皮下注射D-半乳糖42 d后皮膚SOD活力較正常對照組顯著降低(P<0.01)，MDA含量較正常對照組顯著升高(P<0.01)，提示造模成功；與半乳糖組相比，枸杞多糖組和丹參酮組小鼠皮膚組織勻漿中SOD含量均明顯升高，丹參酮組升高尤為明顯(P<0.01)，超過正常組水平，提示丹參酮可明顯增強皮膚抗氧化和清除自由基的能力，其作用較枸杞多糖顯著；兩組小鼠皮膚組織勻漿中MDA含量較D-半乳糖組顯著降低，且枸杞多糖組降低較丹參酮組更為顯著(P<0.01)，提示枸杞多糖清除過氧化脂質(LPO)能力較VE更強；兩組小鼠皮膚組織勻漿中Hyp含量均明顯升高，且兩組之間沒有統計學意義(P>0.05)，說明枸杞多糖和丹參酮均能增強成纖維細胞活性，促進皮膚膠原蛋白合成。

3 討論

皮膚是最早反應機體衰老的組織，已經引起眾多學者對皮膚皺紋、彈性及營養變化等的防治研究［4］，因此預防和延緩皮膚衰老已成為醫學和美容的研究熱點［5］。本實驗結果證實，枸杞多糖和丹參酮均有顯著的抗皮膚衰老作用，但枸杞多糖提高D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮膚中SOD活力作用不及丹參酮顯著。SOD作為體內天然的抗氧化酶之一，有清除自由基的作用，其活力的提高有益于機體抗氧化能力的［6，7］，其機制可能為丹參酮有明顯擴張小血管、抑制血小板聚集、降低血粘度、改善微循環的作用,從而使毛細血管網開放,血流加速,動脈血氧分壓和血氧飽和度升高,組織新陳代謝增強,ATP合成增加,促進抗氧化酶類合成,皮膚中SOD活力增強,提高細胞清除H₂O₂和-O₂能力,保護細胞免受自由基損傷,而延緩衰老進程；丹參酮又有Ca²⁺拮抗劑作用,可阻止Ca²⁺進入細胞內,抑制黃嘌呤脫氫酶向黃嘌呤氧化酶轉變,減少自由基產生；另外,丹參酮又有輕微雌激素作用,對皮膚衰老亦有改善作用。枸杞多糖降低D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮膚中MDA含量作用卻較丹參酮顯著，其機制可能為枸杞多糖有很強的抗氧化作用，能保護細胞內抗氧化酶類活性，從而阻止多價不飽和脂肪酸的過氧化反應，抑制過氧化脂質生成，維持生物膜正常脂質結構和生理功能而發揮抗衰老作用。枸杞多糖和丹參酮均可使成纖維細胞活性增強,膠原蛋白合成增加,而延緩衰老進程。總之，枸杞多糖和丹參酮均有顯著抗皮膚衰老作用,但二者側重點不同。

參考文獻

［1］ 王紅麗,吳鐵,陳墾，等．丹參酮抗D-半乳糖所致小鼠皮膚衰老作用.中國醫院藥學雜志，2005，25(2):130-132.

［2］ 梁杰,張陳威,李建赤,等．小鼠皮膚超氧化物歧化酶活性與枸杞多糖的干預．中國組織工程研究與臨床康復，2007,11(36):7207-7210.

［3］ 徐叔云,陳修.藥理實驗方法學.人民衛生出版社,2002：1464.

［4］ Li SP，Zhang GH，Zeng Q，et al．Hypoglycemic activity polysacohadde，with antioxidation，isolated from cultured Cordyceps mycelia．Phytomedicine,2006，13(6)：428-433.PMID:16716913.

［5］ Kagan VE，Kisin ER，Kawai K，et al.Toward mechanism-based antioxidant interventions:lessons from natural antioxidants.Ann N Y Acad Sci,2002,959:188-198.PMID:11976196.

［6］ Lin AD，Mannikarottu A，Kogan BA，et al．Effect of bilateral in vivo ischemia/ reperfusion on the activities of superoxide dismutase and catalase:response to a standardized grape suspension．Mol Cell Biochem，2007，296(1-2):11-16.PMID:17203243.

［7］ Li XM，Shi YH，Wang F，et al．In vitro free radical scavenging activities and effect of synthetic oligosaccharides on antioxidant enzymes and lipid peroxidation in aged mice．J Pharm Biomed Anal，2007,43(1):364-370.PMID:16876976.