ＨＰＶ－ＤＮＡ１６、１８檢測(cè)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用

黃美瓊　李北坤　陸翠群

【摘要】 目的 探討高危型人乳頭瘤狀病毒(HPV)DNA16、18檢測(cè)在宮頸病變篩查的臨床價(jià)值。方法 對(duì)婦科門(mén)診875例慢性宮頸炎患者均采用HC₂方法檢測(cè)HPV-DNA16、18，同時(shí)進(jìn)行陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查，以病理學(xué)診斷為金標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果 875例婦女患者，HPV 16、18陽(yáng)性者有259例，占29.6%。經(jīng)陰道鏡下定位活檢病理確診患者中HPV16、18陽(yáng)性率分別為慢性宮頸炎15.5%(80/515),宮頸濕疣38.7%(74/191),宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ型61.9%(39/63),CINⅡ型58.7%(44/75),CINⅢ型62.5%(15/24)，宮頸癌100%(7/7)。CINⅠHPV感染率高于CINⅡ(P<0.05),具有顯著性差異。結(jié)論 HC₂-HPV-DNA檢測(cè)為一種先進(jìn)有效的宮頸病變的篩查方法,具有積極的意義。

【關(guān)鍵詞】高危型人乳頭瘤狀病毒；宮頸病變；第二代雜交捕獲試驗(yàn)

Application of human pappilomavirus16,18 testing in cervical lesions

HUANG Mei-qiong，LI Bei-kun，LU Cui-qun.Ying de City Womeny and Childrens Hospital and Health Institute，Guangdong 513000，China

【Abstract】 Objective Discussion of the high-risk human papillomavirus(HPV)DNA16,18 detection in cervical lesions the clinical value of screening.Methods 875 cases of gynecologic patient are used in patients with chronic cervicitis HC₂used to detect HPV-DNA16,18 and Colposcopy biopsy histopathological examinati-on,With pathological diagnosis for the gold standard.Results In 875 cases of women patients,HPV 16,18 have positive 259 cases,accounting for 29.6%.By biopsy under colposcopy patients diagnosed HPV16,18 positive rate,chronic cervicitis was 15.5%(80/515),Cervical condyloma was 38.7%(74/191),CINⅠ61.9%(39/63),CINⅡ58.7%(44/75),CINⅢ62.5%(15/42),cervical cancer was 100%(7/7).CINⅠHPV inf-ection rate is higher than CINⅡ(P<0.05).Conclusion HC₂-HPV-DNA testing is an advanced and effective screening method of cervical lesions,with a considerable positive significance.

【Key words】High-risk human papillomavirus； Cervical lesions； Hybrid capture 2 test

高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染已公認(rèn)為引起宮頸癌及癌前病變的主要原因。99.7%的宮頸癌患者的宮頸病變組織中可檢測(cè)到HPV-DNA的存在。由于宮頸癌存在一個(gè)較長(zhǎng)的、可逆轉(zhuǎn)的癌前病變期，對(duì)宮頸癌癌前病變的早期診斷和治療，可預(yù)防宮頸浸潤(rùn)癌的發(fā)生?，F(xiàn)將本院對(duì)有癥狀的慢性宮頸炎患者采用第二代雜交捕獲試驗(yàn)(HC₂)進(jìn)行高危型HPV-DNA16、18檢測(cè)，同時(shí)行陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查，并作一回顧性分析，報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 2007年1月至2008年12月在本院婦科門(mén)診就診有白帶異常、接觸性出血史的慢性宮頸炎患者或疑有宮頸病變者共875例， 知情同意行HC₂-HPV-DNA 檢測(cè)及陰道鏡下定位活檢。均有3年以上性生活史、目前無(wú)妊娠、無(wú)宮頸手術(shù)史及盆腔放化療史者。年齡19~75歲，平均36.8歲。

1.2 檢查方法

1.2.1 高危型HPV-DNA16、18檢測(cè) 采集HC₂-HPV標(biāo)本前3 d停止陰道用藥或沖洗，窺陰器暴露宮頸，采用美國(guó)Digene公司生產(chǎn)的HPV專(zhuān)用毛刷，毛刷頭全部伸入宮頸內(nèi)，逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)3圈，停留10 s取出后連帶毛刷全部放進(jìn)有專(zhuān)用保存液的小瓶?jī)?nèi)，蓋好蓋子，標(biāo)記好送檢驗(yàn)室檢測(cè)。通過(guò)基因捕獲技術(shù)檢測(cè)已知致癌型HPV-DNA 16、18。診斷陽(yáng)性指標(biāo)為HPV DNA≥1.0 pg/ml。

1.2.2 陰道鏡下官頸活檢 對(duì)所有HC₂-HPV-DNA檢查患者使用深圳金科威公司的SLG-2000型電子陰道鏡，有專(zhuān)門(mén)婦產(chǎn)科主治醫(yī)師進(jìn)行陰道鏡下活檢組織病理學(xué)檢查，如鏡下未發(fā)現(xiàn)明顯異?；驁D像不滿意者，則常規(guī)行3、 6、 9、 12點(diǎn)作4個(gè)點(diǎn)活檢或頸管搔刮，其組織分瓶送病理科作病理檢查。

2 結(jié)果

2.1 陰道鏡下定位活檢病理檢查結(jié)果 875例患者均行陰道鏡檢查，定位活檢病理確診慢性宮頸炎515例，宮頸濕疣191例；CINⅠ63例，CINⅡ75例，CINⅢ24例，宮頸癌7例，見(jiàn)表1。

2.2 高危型HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果 875例患者中，高危型HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性者共259例，陽(yáng)性率29.6%(263/875)。經(jīng)陰道鏡下定位活檢病理確診患者中高危型HPV-DNA 陽(yáng)性率分別為慢性宮頸炎15.5%(80/515),宮頸濕疣38.7%(74/191),宮頸上皮內(nèi)瘤變CINⅠ61.9%(39/63),CINⅡ58.7%(44/75),CINⅢ62.5%(15/24)，宮頸癌100%(7/7)。CINⅠHPV感染率高于CINⅡ(P<0.05),具有顯著性差異。

3 討論

HPV是一組雙股DNA病毒，HPV是公認(rèn)的宮頸癌的致病因素，在已確認(rèn)的宮頸癌病例中大約90%~100%可檢測(cè)到HPV-DNA^[1]，DNA序列分析發(fā)現(xiàn)HPV有200多個(gè)基因型,其中與宮頸癌的發(fā)病關(guān)系最密切的是癌基因E6、E7及其編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物^[2],HPV感染細(xì)胞并最終導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的主要機(jī)制是通過(guò)其E6、E7基因組整合于宿主細(xì)胞的DNA中，最終導(dǎo)致宿主細(xì)胞腫瘤抑制蛋白的產(chǎn)生及下調(diào)(主要是腫瘤抑制蛋白p53和視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤基因產(chǎn)物PRB)。高危型HPV感染宿主細(xì)胞后，能夠影響其蛋白質(zhì)的功能和細(xì)胞基因產(chǎn)物的表達(dá)；高危型HPV的E6和E7蛋白同宿主細(xì)胞的p53以及PRB具有高度的親和力,能影響其功能及基因的穩(wěn)定性，最終引起細(xì)胞癌變^[2]。

近年來(lái)宮頸癌的發(fā)病率呈年輕化的上升趨勢(shì),我國(guó)每年約有2~3萬(wàn)婦女死于宮頸癌。生殖道感染高危型HPV是婦女宮頸癌和子宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)高發(fā)的主要危險(xiǎn)因素。國(guó)外許多關(guān)于HPV感染與宮頸癌危險(xiǎn)性關(guān)系的病例-對(duì)照研究,結(jié)果均顯示HPV感染與宮頸癌有明顯的相關(guān)性,HPV感染陽(yáng)性率50%~90%左右。在宮頸癌癌前病變和宮頸癌中，以HPV16型最常見(jiàn)，其次為HPV18型^[3]。年輕而性活躍的女性HPV感染率最高，感染高峰年齡為18~30歲，30歲以下女性多屬于一過(guò)性感染。當(dāng)機(jī)體感染HPV，病毒基因可整合至宮頸細(xì)胞中，機(jī)體免疫系統(tǒng)可識(shí)別感染細(xì)胞并加以清除。80.0%HPV感染在8~12個(gè)月后可以自然清除，隨年齡增長(zhǎng)，HPV感染率下降，持續(xù)感染率增加。從本文資料中可以看出35~50歲女性持續(xù)感染HPV，是宮頸癌好發(fā)的高危人群,CINⅢ和宮頸癌患者無(wú)一例年齡在50歲以上，從而也提示宮頸癌目前年輕化趨勢(shì)。而生殖道HPV感染與宮頸癌的關(guān)系最早由德國(guó)病毒學(xué)家ZurHaus-en提出^[3-5]，通過(guò)研究，明確高危型HPV持續(xù)感染為宮頸癌癌前病變和浸潤(rùn)性宮頸癌發(fā)生的必要條件。子宮頸癌HPV感染國(guó)外報(bào)道陽(yáng)性率50%~90%左右，其中HPV16型占40%~80%左右，18型占10%~30%左右。李潔等^[6]報(bào)道我國(guó)14省市815例子宮頸癌組織HPV總檢出率53.5%，其中HPV16和58型檢出率最高，分別是31.9%和7.6%，HPV11和18型的檢出率分別是2.3%和1.O%。本實(shí)驗(yàn)資料顯示HPV16、18在慢性宮頸炎組、宮頸濕疣組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組和宮頸鱗癌組中的感染率分別為15.5%、38.7%、61.9%、58.7%、62.5%和100%。隨著宮頸上皮病變的加重，HPV16、18陽(yáng)性率逐漸升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，CINⅠ~Ⅱ組、CINIlI組和宮頸鱗癌組的HPV16、18的陽(yáng)性率均顯著高于宮頸炎組。CINⅢ組和宮頸鱗癌組的HPV16、18的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明子宮頸鱗癌和CIN與HPV16、18的關(guān)系密切，子宮頸鱗癌發(fā)展必然經(jīng)過(guò)CIN階段，兩者感染率的相似性也表明了CIN發(fā)展成鱗癌過(guò)程的延續(xù)性和繼承性。從感染HPV后導(dǎo)致細(xì)胞分化失調(diào)致重度不典型增生，最后發(fā)展成官頸浸潤(rùn)癌，約需15年^[7],對(duì)于有3年性生活以上的女性，有必要行宮頸防癌篩查。

雜交捕獲HPV-DNA分析法是由Digene公司推出的HPV-DNA檢測(cè)系統(tǒng),基本原理是應(yīng)用高效的液相RNA:DNA雜交方法捕獲樣品中的HPV-DNA,采用堿性磷酸酶標(biāo)記抗RNA：DNA抗體-化學(xué)發(fā)光信號(hào)顯示系統(tǒng)。HC₂檢測(cè)結(jié)果敏感性高，其檢測(cè)低限為HPV-DNA 0.2~1.0 ng/L^[8]。該檢測(cè)方法顯著提高了識(shí)別高危病變的靈敏度和特異度,大大降低了假陰性率，可用于人群篩查操作簡(jiǎn)易，其檢測(cè)HPV-DNA對(duì)CINⅡ以上病變的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為97.8%、95.3%、10.9%和100%。因此,HC₂-HPV-DNA檢測(cè)值得臨床作為宮頸癌初篩的一種手段，結(jié)合細(xì)胞學(xué)、陰道鏡下活檢，早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變及早期浸潤(rùn)癌，以及時(shí)治療，提高患者生活質(zhì)量。

參 考 文 獻(xiàn)

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