石斛治療實驗性大鼠萎縮性胃炎的醫學研究

【摘要】目的探討石斛治療慢性萎縮性胃炎(CAG)的療效及其機制。方法用氨水、乙醇和去氧膽酸鈉灌胃法，制成大鼠CAG模型。造模后治療組以石斛治療5周，觀察血胃泌素（GAS）、生長抑素（SS）和胃黏膜前列腺素E2（PGE₂）的變化情況，并與模型組和對照組比較。結果石斛治療組治療前SS 、GAS和PGE2分別為7.95±2.14 ng/L，216.13±77.21 ng/L，1435.10±200.53 pg/mp，均較對照組低（P＜0.01），治療后分別為9.58±1.01 ng/L，328.53±84.74 ng/L，1715.66±125.49 pg/mp；治療后除SS外，各觀察指標水平均較治療前高（P＜0.01），與對照組比較差異不大(P＞0.05)。結論石斛可使GAS和 PGE₂增多，對CAG有良好的治療作用。

【關鍵詞】萎縮性胃炎;石斛;大鼠

文章編號：1003-1383(2009)01-0001-03 中圖分類號：R 573.32；R285.6 文獻標識碼：A

材料與方法

1.動物及分組采用2 m±2 d齡，體重200±10 g，一級質量標準的雌性遠交系Wistar大鼠，由廣西醫科大學實驗動物研究所提供。購回后采用架式籠養，室溫為20±2℃，濕度50%～60%，光照明暗各12 h交替，單獨空調。先在動物室飼養4 d后隨機分為對照組、模型組、石斛治療組3組，分籠喂養，每組一籠，每籠25只。

2.實驗用藥物及試制氨水：中國瓶窯醫藥化工試制廠，批號20060431，現用現配成濃度0.1%氨水；乙醇：純度＞99.5%，宜興市鈕家化工助劑廠，批號20060113，現用現配成60%乙醇溶液；去氧膽酸鈉：Serva公司生產，上海化學試制采購供應站進口分裝經銷，批號2005618，現用現配成20 mmol/L溶液；石斛煎劑：石斛300 g加水2000 ml于陶瓷皿慢火煎60分鐘，過濾備用。

3.實驗方法①對照組：不造模，灌服生理鹽水；②模型組和石斛治療組：用0.1%氨水作為飲用水自由飲用；20 mmol的去氧膽酸鈉溶液每日灌胃一次，每次2 ml；60%的乙醇每周空腹灌胃2次，每次2 ml。上述三因素共處理16周建立鼠CAG模型；對照組用生理鹽水灌胃， 每只5 ml，每日1次， 連續5周。實驗進行至16周(治療前)每組取11只大鼠處死；取標本備檢，對照組鼠胃病檢無明確病態表現，模型組和石斛治療組鼠胃病檢均符合慢性萎縮性胃炎表現，表示造模成功。③模型組停止造模，灌服生理鹽水，石斛治療組也停止造模，每日每只大鼠灌服石斛水煎劑5 ml，連續5周。

4.標本及化驗試制胃泌素（GAS）酶聯免疫試劑盒，美國Lifkey公司生產；生長抑素（SS）、胃黏膜前列腺素E2（PGE2）放免試劑盒，第二軍醫大學神經生物學教研室提供。

5.檢測方法①血清GAS含量檢測:采用ELISA法，將受實驗的大鼠斷頭處死，取頸動脈血5 ml(分為2管，各2.5 ml，另一管加1 g/l肝素25 μl抗凝和抑肽酶1250 U用作血漿SS檢測)，將1管1500 r/min離心5 rain取10 μl血清，分別加入包被好抗原的96孔酶標板的孔板中，每孔中加入GAS抗體50 μl和POD(緩沖液)50 μl，輕輕混勻30 s，封住蓋板，室溫孵育45 min，棄除混合物，PBS洗滌5次，甩盡板內液體，用吸水紙拍干，加入100 μl的TMB(酶底物)，輕輕混勻10 s，室溫孵育20 min，加入100 μl終止液，混勻30 s后，在酶標儀450 nm波長下，測A值，計算血清中GAS含量。

②血漿SS含量檢測：采用RIA法，將加入肝素和抑肽酶的全血離心，取血漿。在試管上分別標上管號，標準品管中各加入100 μl不同濃度的標準品，實驗管中各加入300 μl待測血漿；所有管中分別加入SS抗血清100 μl和緩沖液200 μl，4℃孵育24 h后，分別加入125I AVP 100 μl混勻，再次4℃孵育24 h，加分離劑500 μl，混勻，室溫放置45 min后，4000 r/min離心，20 min，棄上清液，上放免計數儀測定cpm值，由放免數據處理系統繪制標準曲線并計算SS含量。

③胃黏膜前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的測定方法：取出鼠胃，迅速刮取胃黏膜，于液氮中速凍，稱重后，放入勻漿器中，加無水乙醇 0.4 ml，輕研磨后，再加入生理鹽水 1.6 ml，研磨制成勻漿，離心10 min(3500 r/rain)，取上清液，放-30℃冰箱保存備檢。

6.統計學處理計量資料用均數±標準差（-±s）表示，運用SPSS12.0統計軟件包進行檢驗，三組資料比較用F檢驗，兩兩比較用LSD檢驗，P＜0.05為差異有顯著性意義。

結果

各組大鼠治療前后各觀察指標變化情況，石斛組治療前后GAS和PGE2均有下降（P＜0.01），SS治療后較治療前有上升，但無統計學意義（P＞0.05），模型組治療前后GAS和PGE2均有下降但無統計學意義（P＞0.05），對照組治療前后SS、GAS和PGE2變化不大（P＞0.05），GAS和PGE2石斛組治療后與模型組治療后和對照組治療后比較均有顯著性差異（P＜0.01），見表1。SS石斛組治療后與對照組治療后比較差異無顯著性（P＞0.05）。

討論

胃黏膜是前列腺素的主要合成場所之一，其中PGE2是其重要的一種，后者有很強的抑制胃酸胃蛋白酶原分泌、刺激黏液和碳酸氫鹽分泌、增加黏膜血流和促使上皮再生等作用，又有增強黏膜抵抗力的作用(細胞保護作用)。PGE2的細胞保護作用與改善胃黏膜血流有關。 PGE2可保持胃黏膜微血管的完整性，減少血管充血，使完好的胃小凹細胞快速移行，修復破壞了的上皮。PGE2對胃黏膜損傷有較好的保護作用，而提高胃黏膜保護能力又具有一定的防治胃癌前病變和胃癌的作用，大量的研究表明，對胃黏膜的保護作用是通過提高內源性PGE2的含量來實現的。GAS是胃酸分泌的主要調節激素，其分子量2100，是含有17個氨基酸的多肽，GAS分泌受胃內pH、進食、胃內壓變化、SS和其他胃腸激素及交感神經興奮等諸多因素的影響，同時GAS分泌又可引起近端胃舒張、胃竇收縮的作用。而SS是一種對外分泌、內分泌、旁分泌及自分泌均起作用的調節肽，對消化系統的生物學作用主要是抑制胃泌素等各種胃腸激素的分泌，亦可抑制胃腸運動和黏膜細胞的增生，減少胃腸道壁血流量，抑制胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌。GAS可直接刺激SS分泌，而SS又可抑制GAS的分泌，二者間具有獨特的區域性調節作用。近年來對GAS、SS和PGE2在模型動物或患者外周血中含量水平高低有不同的認識，不但其研究結果報道不一致，而且對其在外周血中的含量變化與CAG的關系也有不同的認識。我們的研究結果表明，CAG大鼠SS、GAS和PGE2水平均有下降(P＜0.01)；而且從模型組實驗結果來看，由于不給予治療藥物，結果大鼠仍維持CAG的病理狀態。

CAG是消化系統常見病，其胃黏膜上皮遭到反復損害后導致固有腺體的減少或消失。CAG屬中醫的“胃痛”、“痞滿”范疇，由于其發病日久，多種致病因素長期損害，病變漸呈復雜化；或因飲食、情志、勞倦、外邪等因素影響反復發作，故常兼見脾陽虛或胃陰虧之證，或有兼熱夾濕；而氣滯血瘀、熱郁濕阻又可蘊結成毒。這些總的形成了CAG的本虛標實、虛實夾雜的病機，因此，對CAG的治療要針對病因，且標本同治。本實驗用單味中藥石斛制成水煎劑對CAG大鼠進行實驗性治療。其具有益氣健脾、理氣活血，兼以補脾陽益胃陰、清胃熱祛瘀毒等功效，從而標本兼治，虛實共調，恰中CAG的病機。從現代藥理學分析，本方諸藥有調節免疫功能、改善胃黏膜血液循環、清除自由基及抑制組織細胞癌變的作用。本實驗可以證實，石斛具有使CAG大鼠前列腺素和胃泌素明顯增高之功效。由此可以推測石斛對慢性萎縮性胃炎有修復和促進其康復之功效。

參考文獻

［1］Machida-Montani A，Sasazuki S，et al.Atrophic Gastritis，Helicobacter pylori，and Colorectal Cancer Risk： A Case-Control Study［J］.Helicobacter，2007；12(4)：328-332.

［2］Liu WL，Chen SJ，Chen Y，et al.Protective effects of heat shock protein70 induced by geranylgeranylacetone in atrophic gastritis in rats［J］.Acta Pharmacol Sin，2007，28(7)：1001-1006.

［3］Kodama M，Murakami K，Sato R，et al.Helicobacter pylori-infected animal models are extremely suitable for the investigation of gastric carcinogenesis［J］.World J Gastroenterol，2005，11(45)：7063-7071.

［4］Campana D，Nori F，Pagotto U，et al.Plasma acylated ghrelin levels are higher in patients with chronic atrophic gastritis［J］.Clin Endocrinol (Oxf)，2007 Jul 5；［Epub ahead of print］.

［5］Cindoruk M，Yetkin I，Deger SM，et al.Influence of H pylori on plasma ghrelin in patients without atrophic gastritis［J］.World J Gastroenterol，2007，13(10)：1595-1598.

［6］黃妙珍，陳芝蕓，嚴茂祥，等.補氣養陰解毒方對慢性萎縮性胃炎大鼠表皮生長因子和生長抑素的影響［J］.浙江中醫雜志，20038：314-316.

［7］王茜，龔其海，關芹，等.石斛生物總堿對原代皮層神經元氧糖剝奪的保護作用［J］.中國藥理通報，2006，23（4）：44.

(收稿日期：2008-12-05修回日期：2009-01-23)

(編輯：潘明志英文審校：鐘京梓)