Ｒａｆ－１蛋白激酶及ＶＥＧＦ在大腸腺癌中的表達及臨床意義

摘 要 目的：研究大腸腺癌、大腸腺瘤和癌旁正常組織中Raf-1蛋白激酶和VEGF的表達及其臨床意義。方法：收集72例大腸腺癌患者的手術切除標本共112份，其中取自癌組織72份，癌旁正常組織40份，收集40例大腸腺瘤患者的腸鏡下切除標本，采用免疫組化法檢測其Raf-1蛋白激酶及VEGF的表達。結果：72例大腸腺癌組織中，Raf-1蛋白激酶的陽性表達率為29.17%，VEGF的陽性表達率為41.67%，40例大腸腺瘤組織中，Raf-1蛋白激酶陽性表達率為12.50%，VEGF陽性表達率為22.50%，40例癌旁正常組織中，Raf-1蛋白激酶陽性表達率為2.50%，VEGF陽性表達率為10.00%，大腸腺癌Raf-1蛋白激酶及VEGF的陽性表達率均顯著高于大腸腺瘤組織和癌旁正常組織(P<0.05)；大腸腺癌中Raf-1蛋白激酶的表達與患者的年齡、性別、病灶大小、分化程度、有無淋巴結轉移、病灶浸潤深度及Dukes分期均無關(P>0.05)；大腸腺癌中VEGF的表達與患者的年齡、性別、病灶大小、分化程度均無關(P>0.05)，但與腫瘤有無淋巴結轉移、病灶浸潤深度及Dukes分期均密切相關(P<0.05)。結論：Raf-1蛋白激酶及VEGF對大腸腺癌的發生、發展具有一定的促進作用，但Raf-1蛋白激酶在判斷大腸腺癌浸潤轉移方面的意義尚不肯定。VEGF 與大腸腺癌的血管生成密切相關，對大腸腺癌的生長和浸潤轉移具有肯定的促進作用。

關鍵詞 Raf-1蛋白激酶 VEGF 大腸腺癌 大腸腺瘤

中圖分類號：R57

文獻標識碼：B

文章編號：1006-1533(2009)02-0073-03

大腸癌是胃腸道常見惡性腫瘤，半數以上來自腺瘤癌變，從形態學上可見到細胞增生、腺瘤形成及癌變各階段相應的染色體改變，現已證實其發生、發展是一個多步驟、多階段及多基因參與的異質性疾病^[1]。本研究采用免疫組化方法，檢測并初步分析Raf-1蛋白激酶及VEGF在大腸腺癌、癌旁正常組織、大腸腺瘤中的表達及其臨床意義，以探討Raf-1蛋白激酶及VEGF的表達在大腸腺癌發生、發展中的作用及與大腸腺癌臨床病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集無錫第四人民醫院2006年1月1日至12月31日腫瘤外科住院患者行手術治療的72例大腸腺癌患者的切除標本共112份，其中癌組織72份，非癌腸組織40份(距癌腫邊緣5 cm以外取材)，其中男性46例，女性26例，年齡36~70歲。參照1990年世界衛生組織推薦的分化分級標準，低分化腺癌32例，中、高分化腺癌40例；有淋巴結轉移29例，無淋巴結轉移43例；并根據患者臨床資料及病理資料判斷術后Dukes分期：A期19例，B期24例，C期24例，D期5例。所有病例術前均未進行放療及化療。另收集同期無錫第四人民醫院消化內鏡室對住院及門診患者進行腸鏡下大腸息肉樣病灶高頻電切除術所得標本且經病理診斷明確為腺瘤者40例，其中男性24例，女性16例，年齡31~68歲。

1.2 免疫組化檢測

鼠抗人VEGF單克隆抗體工作液(JH121)購自福州邁新生物技術開發有限公司。鼠抗人Raf-1單克隆抗體濃縮液(PS338[DPR/2/2A/3A])購自Lab Vision公司。實驗步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 陽性結果判定

免疫組化染色陽性信號呈棕黃或棕褐色。Raf-1蛋白激酶表達按所購試劑說明書要求以人扁桃體組織切片為陽性對照片，顯微鏡下觀察腫瘤細胞胞核出現棕黃色顆粒為陽性，陰性對照用磷酸鹽緩沖液替代第一抗體所得組織切片表現為標準。VEGF以細胞膜或胞漿內有棕黃色顆粒為陽性，高倍鏡下(400倍)對每張切片隨機選擇5個視野，計數200個細胞/視野，共計1 000個，陽性細胞率≤10%計為陰性表達，陽性細胞率>10%為陽性表達。

1.4 統計學處理

實驗數據應用SPSS 10.0統計軟件包進行分析，不同組織間Raf-1蛋白激酶和VEGF表達差異及Raf-1蛋白激酶和VEGF表達與大腸癌臨床病理參數間關系采用卡方檢驗及Fisher精確概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 大腸腺癌、大腸腺瘤及癌旁正常組織中的Raf-1蛋白激酶和VEGF表達

72例大腸腺癌組織中，Raf-1蛋白激酶陽性表達率為29.17%(21/72)，VEGF陽性表達率為41.67%(30/72)，40例大腸腺瘤組織中，Raf-1蛋白激酶陽性表達率為12.50%(5/40)，VEGF陽性表達率為22.50%(9/40)。40例癌旁正常組織中，Raf-1蛋白激酶陽性表達率為2.50%(1/40)，VEGF陽性表達率為10.00%(4/40)。大腸腺癌與大腸腺瘤、大腸腺癌與癌旁正常組織中的Raf-1蛋白激酶和VEGF的陽性表達率比較均有統計學差異(P<0.05)。大腸腺瘤與癌旁正常組織中的Raf-1蛋白激酶和VEGF的陽性表達無統計學差異(P>0.05)。

2.2 Raf-1蛋白激酶和VEGF表達與大腸腺癌不同臨床病理參數的關系

Raf-1蛋白激酶在大腸腺癌中表達與患者的年齡、性別、病灶大小、分化程度、有無淋巴結轉移、病灶浸潤深度是否突破漿膜層及Dukes分期(比較A+B期和C+D期)均無統計學差異(P>0.05)；VEGF在大腸腺癌中表達與患者的年齡、性別、病灶大小、分化程度均無統計學差異(P>0.05)，但與大腸腺癌病灶有無淋巴結轉移、病灶浸潤深度是否突破漿膜層及Dukes分期(比較A+B期和C+D期)均有顯著性差異(P<0.05)。見表1。

3 討論

大腸癌的組織發生有以下兩種方式：1)從腺瘤演變為癌，即腺瘤-癌順序。2)從正常黏膜或炎癥黏膜發展為癌，即de novo癌。近年來大量的流行病學、病理學和遺傳學等研究也均支持大腸腺瘤是大腸癌的主要癌前狀態的觀點，目前認為，80%以上的大腸癌系由大腸腺瘤演變而來^[2]。因此，腺瘤惡變在大腸癌的發生中有重要意義。在大腸腺瘤惡變的過程中，RAS基因、APC基因、DCC基因、MCC基因和P53基因的突變起較關鍵的作用，而Raf蛋白激酶作為RAS基因的下游效應分子，通過MAPKs途徑，在大腸腺瘤癌變的過程中起了重要的促進作用。

Sun Y等 ^[3]研究認為，在大腸癌形成過程中，Raf-1蛋白激酶表達增高，MAPKs通路持續激活，抑制了大腸癌SW480和Colo-205細胞的P21WAF1和P27KIP1等抑癌基因的表達，并促進細胞周期由G1/G0到S期(DNA合成期)轉化，導致未修復的受損基因和癌基因大量合成、聚集，刺激腸黏膜細胞異型增生而導致大腸腺瘤和大腸癌形成。

在本研究中，大腸腺癌及大腸腺瘤組織中Raf-1蛋白激酶的表達均高于癌旁正常組織，且大腸腺癌組織中Raf-1蛋白激酶的表達明顯高于大腸腺瘤組織，提示其高活性表達可能與刺激腸黏膜上皮腺瘤形成，并最終導致腺瘤惡變有關。但研究提示，Raf-1蛋白激酶在大腸腺癌組織中的表達與Dukes 分期、病灶浸潤深度及淋巴結轉移關系不大。

VEGF在體內有誘導血管生長、內皮細胞增殖、遷移、增強血管通透性的作用。在腫瘤形成過程中，VEGF直接作用于血管內皮細胞膜上的Ⅲ型酪氨酸激酶受體，能增加微血管特別是毛細血管和小靜脈的通透性，促進血漿纖維素外滲，為血管形成過程中的細胞遷移提供一個纖維網絡，從而有利于腫瘤細胞的微轉移^[4]。纖維蛋白原和血漿纖維連接蛋白在腫瘤間質中積聚，高度特異地選擇性誘導血管內皮細胞有絲分裂，刺激內皮細胞增殖，誘發組織因子、膠原酶產生，從而誘發新生血管形成和腫瘤生長^[5，6]。豐富的新生血管形成不僅增加了腫瘤細胞進入血液循環的機會，而且腫瘤細胞還可以侵入與毛細血管伴行的鄰近淋巴管，或通過淋巴靜脈連接進入淋巴管，促進淋巴轉移。VEGF與淋巴內皮細胞上的受體Fit-4結合后，可通過MEK/ERK和PI3-激酶/Akt途徑引起發育中的淋巴管內皮細胞增生、遷移及抑制內皮細胞凋亡，從而發揮促淋巴管新生的作用^[7，8]。

本研究發現，VEGF在大腸腺癌及大腸腺瘤組織中的表達均較癌旁正常組織明顯增高，且在大腸腺癌組織中VEGF表達明顯高于大腸腺瘤組織，VEGF的表達與大腸腺癌Dukes分期、淋巴結轉移、病灶浸潤深度密切相關，與劉強等^[9～11]近年來報道的大腸癌組織中VEGF的表達情況一致。研究表明，VEGF 與新生血管形成有關，通過促進新生血管形成而促進大腸癌的生長和浸潤、轉移，VEGF 可成為反映大腸癌生物學行為的客觀指標。

參考文獻

1 錢禮.錢禮腹部外科學[M].第一版.北京：人民衛生出版社，2006：480-482.

2 項平.大腸腫瘤基礎與臨床進展[M].第一版.上海：上海科學技術出版社，2007：31-32.

3 SunY，Sinicrope FA. Selective inhibitors of MEK1/ERK44/42 and P38 mitogen-activated protein kinases potentiate apoptosis induction by sulindac sulfide in human colon carcinoma cells[J]. Mol Cancer Ther，2005，4(1)：51-59.

4 Katoh Y，Katoh M. Comparative integromics on VEGF family members[J].Int J Oncol，2006，28(6)：1585-1589.

5 Jung YD，Kim MS，Shin BA，et al.EGCG，a major component of green tea，inhibits tumour growth by inhibiting VEGF induction in human colon carcinoma cells[J].Br J Cancer，2001，84(6)：844-850.

6 Witte D，Thomas A，Ali N，et al. Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-3 (VEGFR-3) and its ligand VEGF-C in human colorectal adenocarcinoma[J].Anticancer Res，2002，22(3)：1463-1466.

7 Su JL，Yang PC，Shih JY，et al. The VEGF-C/Flt-4 axis promotes invasion and metastasis of cancer cells[J].Cancer Cell，2006，9(3)：209-213.

8 Zeng Y，Opeskin K，Baldwin ME，et al. Expression of vascular endothelial growth factor receptor-3 by lymphatic endothelial cells is associated with lymph node metastasis in prostate cancer[J].Clin Cancer Res，2004，10(8)：5137-5144.

9 劉強，陳衛昌，傅建新，等.大腸癌組織中血管生成與凋亡、增殖的關系[J].中華消化雜志，2004，24(7)：418-421.

10 鄭豐平，袁世珍，王俊雅，等. P53、血管內皮生長因子蛋白表達與結腸癌血管生成的關系[J].中華消化雜志，2001，21(12)：749-750.

11 雷雯，周錫庚，郁寶銘，等.血管內皮生長因子和血管生成與大腸癌發展的關系[J].中華消化雜志，2001，21(8)：455-457.

(收稿日期：2008-10-24)