銀翹散對流感病毒ＦＭ１感染胸腺缺陷小鼠血清中ＩＦＮ－γ、ＩｇＧ含量的影響

朱露莎　畢明剛　季宇彬

摘 要：目的：觀察銀翹散（YQS）對流感病毒感染胸腺缺陷小鼠細胞因子的影響。方法：以流感病毒亞洲甲型鼠肺適應株（FM1）感染小鼠為模型，采用銀翹散灌胃治療。用ELISA法分別檢測感染后第1、3、5、7天小鼠血清中IFN-γ、IgG的含量。結果：銀翹散各給藥組IFN-γ的含量明顯降低，與病毒感染模型組比較差異有顯著性意義（P<0.01），銀翹散各治療組與感染模型組的IgG含量，差異不是十分顯著（P>0.05）。結論：銀翹散可以降低血清中IFN-γ，說明銀翹散可以降低炎性因子的表達，從而減少炎性損傷。IgG含量與感染模型組差異不是十分顯著，有可能因為在病毒感染早期，機體只能產生低水平低親和力的抗體。

關鍵詞：銀翹散；流感病毒；細胞因子

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）02-0013-03

銀翹散(YQS)由連翹、銀花、苦桔梗、薄荷、竹葉、生甘草、芥穗、淡豆豉、牛蒡子9味中藥組成，為治療溫病之首方，是辛涼清解的代表方劑，以其治療風溫、溫熱病以及某些雜病（屬于邪在衛分、上焦）而聞名，并一直沿用至今。現代臨床上用于治療流行性感冒、急性扁桃腺炎、咽喉炎、肺炎、皰疹、麻疹、流行性腮腺炎等病毒性感染疾病［1］。本實驗觀察了該藥對流感病毒感染胸腺缺陷小鼠血清中IFN-γ、TNF-α、TGF-β1及IgG含量的影響，從分子水平探討該藥治療病毒性呼吸道感染的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物及毒株

銀翹解毒口服液：批號070301，河北華威制藥有限公司。病毒唑：批號070609，天津藥業集團新鄭股份有限公司。病毒：流感病毒亞洲甲型鼠肺適應株（FM1），由中國中醫科學院中藥研究所提供，雞胚傳代后，血凝滴度為1:512，-70℃凍存備用。乙醚、生理鹽水：由北京化學試劑公司提供。小鼠IFN-γ、TNF-αELISA試劑盒購自晶美生物工程（北京）有限公司，小鼠TGF-β1及IgG試劑盒購自Biotechnology Systems公司。

1.1.2 動物及分組

BALB/c nu/nu免疫缺陷裸小鼠，雌雄各半，共72只，體重18~20g，購自北京維通利華實驗技術有限公司。按體重隨機分組原則，將BALB/c nu/nu裸鼠分為正常對照組，模型組，病毒唑陽性藥組，銀翹散高、中、低劑量治療組，各組按感染后1天、3天、5天、7天不同時相各分為4小組，每小組3只，分別標記，分籠飼養，所有動物自由攝食和飲水，控制溫度濕度（18～25℃和55％±2%）。

1.1.3 儀器

微孔板掃描酶標儀(Bio-Tek公司)，微量加樣器，CO2恒溫培養箱，Labofuge 400R低溫高速離心機(德國Heraeus公司)，DEM-Ⅲ型自動酶標洗板機（北京拓普分析儀器有限責任公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型制備

以乙醚輕度麻醉小鼠后，BALB/c nu/nu裸鼠正常對照組以生理鹽水30μL/只滴鼻，其余各組以FM1株病毒液30μL/只滴鼻。

1.2.3 實驗給藥

感染1小時后給藥，給藥體積為0.2mL/10g，病毒唑組每次腹腔注射0.07g/kg/d，銀翹散高中低劑量組分別為40g/kg/d、20g/kg/d、10g/kg/d。正常空白組、感染模型組灌服生理鹽水。

1.2.4 取材

分別于感染24、72、120、168h后，各組小鼠摘眼球取血，離心分離血清，放入-20℃冰箱中保存待測，脫頸椎處死小鼠，無菌取胸腺、脾臟、雙側后肢股骨骨髓，以備它用。

1.2.5 觀察指標及方法

小鼠血清IFN-γ、IgG含量的測定。本實驗采用雙抗體夾心ELISA法，檢測程序按照試劑盒說明書進行。

1.2.6 統計學處理

所有實驗數據用±s表示，采用SPSS統計分析軟件進行統計學處理。在進行顯著性檢驗時，組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結果

2.1 YQS對流感病毒FM1感染小鼠血清IFN-γ含量的影響

實驗結果顯示，流感病毒感染小鼠后，感染模型組各時相IFN-γ的含量較正常空白組均有所增加，且各時間點二者比較，差異顯著（P<0.01）。其中第1、3天呈逐日上升趨勢，第3天達峰值，第5天開始下降。銀翹散各劑量組以及病毒唑組IFN-γ在各時間點的走勢與感染模型組相同，但IFN-γ的含量較感染模型組均有所下降，差異顯著（P<0.01）。說明銀翹散可以抑制病毒感染后IFN-γ的表達。

各組比較見圖1。

2.2 YQS對流感病毒FM1感染小鼠血清IgG含量的影響

實驗結果顯示，流感病毒感染后，病毒感染組與銀翹散高、中、低劑量組各時間點的IgG的走勢大致相同，呈逐漸上升趨勢，但各組的IgG含量都很低。治療組的IgG含量略低于感染模型組，差異不是十分顯著（P>0.05）。有可能因為在病毒感染早期，機體只能產生低水平低親和力的抗體，通常在感染后最初2周達高峰。

各組比較見圖2。

3 討論

流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，起病急驟，以全身中毒癥狀為主，亦可引起病毒性肺炎。流感病毒侵襲機體，病毒在宿主細胞內復制，并可入血，從而形成病毒血癥。病毒作用于機體后，機體免疫細胞對于病毒可產生免疫應答，從而產生一些超過生理濃度的細胞因子。這些細胞因子釋放入血后，其中具有致熱作用的因子即可引起發熱等全身中毒癥狀。研究發現，病理濃度的TNF-α、IL-1、IFN等都具有致熱作用。IFN-γ的致熱性作用方式可能是通過促進LPS而誘生IL-1。中醫復方治療病毒感染性疾病的優勢并非單純抗病毒本身，雖與促進機體免疫應答有關，卻不能單純用促進機體免疫應答來解釋，其療效機制可能與其抑制或調節機體炎癥免疫病理反應有關。IFN-γ主要由活化的Th1和NK細胞產生，是機體抗病毒感染中最重要的細胞因子之一。它不僅可以阻止病毒在體內復制和擴散，而且能對許多免疫細胞發揮強大的免疫調節作用。有研究發現，IFN-γ及TNF-α可調節單核吞噬細胞產生超氧陰離子，如在短時間內大量產生TNF-α，IFN-γ將全身大量單核巨噬細胞激活，產生大量超氧陰離子導致組織器官的嚴重損傷［2］；同時，IFN-γ可促進T細胞和B細胞的分化，激活單核-巨噬細胞，促進炎性因子如TNF-α，IL-6，IL-1的產生，從而造成炎性損傷。因此內源性IFN-γ雖是維持機體抗感染所必不可少，但大量產生則又“走向問題的反面”。實驗結果顯示，感染模型組的IFN-γ含量與正常空白組比較，有所提高，二者比較，有顯著性差異，銀翹散組IFN-γ含量較之模型組有所減少，而且二者比較，亦有顯著性差異。說明銀翹散可以抑制病毒感染后IFN-γ的表達，降低炎性因子的表達，從而減少炎性損傷。。關于流感病毒感染小鼠后，血清中IFN-γ的表達，有些資料［3］顯示IFN-γ升高，而有些資料［4］顯示降低。究竟流感病毒感染對IFN-γ的產生是抑制還是促進，有待于進一步探討。

病毒感染可誘導3種抗體：IgG、IgM、IgA。其中IgG是最重要的一類抗體，能直接中和體液中的病毒。盡管體液免疫在病毒感染后被激活，但在病毒感染早期，機體只能產生低水平低親和力的抗體，通常在感染后最初2周達高峰，以后開始下降。本實驗中各組的IgG含量都很低。治療組的IgG含量略低于感染模型組，差異不是十分顯著（P>0.05），有可能因為在感染初期，IgG水平比較低，也有可能因為本實驗選用的老鼠是胸腺缺陷小鼠，有文獻研究發現，T細胞及吞噬細胞功能障礙均可使自身完好的B細胞發生障礙而產生Ig或抗體缺乏癥。

通過本實驗，還可以發現，流感病毒所致機體的免疫狀態是一個龐雜的細胞因子網絡，各種細胞因子相互促進又相互制約，調節細胞因子生成的分子機制是復雜的，值得進一步探討。

參考文獻：

［1］ 吳幸周.銀翹散現代臨床運行的文獻研究［D］.北京：北京中醫藥大學碩士研究生學位論文，2006:6-8.

［2］ 周炳榮.IFN-γ及TNF-α調節單核吞噬細胞超氧陰離子及在抗感染中的作用［J］.國外醫學?免疫學分冊，1994(2):65.

［3］ Robert NJ JL. The limited role of the human interferon systerm response to respiratory syneytial virus challenge， Analysis and comparison to influenza virus challenge［J］.Microb Pathog， 1992， 12:49.

［4］ 王飛，胥方元， 馬萍，等. 感冒清口崩片對流感病毒FM1感染小鼠細胞因子水平的影響［J］. 中藥藥理與臨床，2007，23(5):169-170.

（責任編輯：陳涌濤）