ＨＰＬＣ法測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量

陳劍峰　林　昊

（1.岑溪市人民醫院，廣西 岑溪 543200；2.梧州食品藥品檢驗所，廣西 梧州 543002）お

摘 要：目的：建立測定玉葉清火膠囊中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量的高效液相色譜法。方法：采用VP-ODS柱C18（250mm×4.6mm，5μm）柱分離，以甲醇―水（55∶45）為流動相，在250nm處檢測。結果：穿心蓮內酯在0.00676～0.1082g范圍內線性關系良好（r=0.9998），平均回收率為98.82%，RSD=0.8%（n=6）;脫水穿心蓮內酯在0.01288～0.2061g范圍內線性關系良好（r=0.9997），平均回收率為98.95%，RSD=1.6%（n=6）。結論：該法操作簡便，方法穩定，專屬性強，可作為該制劑的質量控制方法。

關鍵詞：玉葉清火膠囊；HPLC；穿心蓮內酯；脫水穿心蓮內酯

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）03-0023-02

玉葉清火膠囊是由玉葉清火片^[1]改劑型而來，它包含玉葉金花、穿心蓮、梔子、墨旱蓮、倒扣草等中草藥組方。具有清熱解毒、消腫止痛的功效，用于喉痹、暴喑、急性咽炎以及其它風熱癥者。為控制該藥品的質量，本研究采用HPLC法測定穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-2010 HPLC；日本AND GR-202電子分析天平。

1.2 試藥

穿心蓮內酯對照品、脫水穿心蓮內酯對照品購于中國藥品生物制品檢定所；水為高純水；甲醇（色譜純Fisher Scientific）；其它化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為島津VP-ODS柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：以甲醇―水（50∶50）為流動相;流速：1.0mL/min;檢測波長：250nm;柱溫為室溫；進樣：10μL。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品適量，分別加甲醇制成每1mL含穿心蓮內酯50μg、脫水穿心蓮內酯100μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內容物，研細，取約1.5g，精密稱定，精密加入甲醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液

按處方比例稱取除穿心蓮以外的其余味藥，按玉葉清火膠囊制備工藝制成缺穿心蓮陰性樣品;按2.2.2項下操作，制成缺穿心蓮的陰性對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

在上述色譜條件下，穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯的保留時間分別為8.42min和23.38min，與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，對稱因子在0.95～1.05之間，理論塔板數按穿心蓮內酯計算不低于4000，按脫水穿心蓮內酯計算不低于8000。陰性對照對樣品測定無干擾。結果見圖1、圖2。

2.4 專屬性考察

取缺穿心蓮陰性樣品按供試品溶液制備方法制備，進樣，測定。圖譜表明在該色譜條件下，陰性對照無干擾，結果見圖3。

2.5 供試品測定

按上述色譜條件，取供試品溶液，進樣，測定。圖譜中供試品溶液與對照品溶液有相同的色譜峰，表明供試品為穿心蓮內脂和脫水穿心蓮內脂，如圖4。

2.6 標準曲線的制備

精密稱取穿心蓮內酯13.52mg，脫水穿心蓮內酯對照品25.76mg置100mL量瓶中，搖勻，作為對照品儲備溶液（濃度分別為0.1352，0.2576mg/mL）。精密量取對照品儲備溶液0.5、1、2、4、8mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述6個對照品溶液各10mL，按正文擬定的色譜條件測定。以穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯對照品進樣量（g）為橫坐標（X），峰面積積分值為縱坐標（Y）繪制標準曲線，得回歸方程為：

穿心蓮內酯：Y=823520X+4333.3（r=0.9998）

脫水穿心蓮內酯：Y=1762866X-5264（r=0.9997）

結果表明：當穿心蓮內酯在0.00676～0.1082g范圍內，脫水穿心蓮內酯在0.01288～0.2061g時，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.7 精密度實驗

取同一份供試品溶液，按上述色譜條件，連續進樣6次，測定峰面積積分值，穿心蓮內酯的RSD為0.36％，脫水穿心蓮內酯的RSD為0.29%。

2.8 穩定性實驗

取同一份樣品溶液，放置0，1，2，4，8，12h，按上述色譜條件，分別測定峰面積積分值，RSD為0.82％。

2.9 重復性實驗

精密稱取同一批的樣品6份，按上述方法試驗，結果穿心蓮內酯的平均含量為0.912mg/g，RSD=1.47%，脫水穿心蓮內酯平均含量為2.024mg/g，RSD=1.06%。

2.10 加樣回收率實驗

精密量取線性關系項下穿心蓮內酯對照品儲備溶液（濃度為0.1352mg/mL）50mL，置500mL量瓶中，精密稱取脫水穿心蓮內酯對照品12.46mg置同一量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液（穿心蓮內酯濃度為13.52g/mL，脫水穿心蓮內酯濃度為24.92g/mL）。精密稱取重復性試驗項下的玉葉清火膠囊（穿心蓮內酯含量0.912mg/g，脫水穿心蓮內酯含量2.068mg/g）約0.75g，平行取6份樣，分別精密加入上述對照品溶液各50mL，按正文擬訂的方法提取、測定，計算回收率，結果詳見表1，表2。

3 討論

嘗試了乙腈－水以及甲醇－水等不同的濃度比，發現甲醇－水（50∶50）峰形對稱，無干擾，故選擇為流動相。

參考文獻：

［1］ WS-1109（ZD-1093）-2002，國家藥品中藥標準［S］.2002.

（責任編輯：陳涌濤）