靈芝菌絲體對提高河鲀免疫力的影響

俞　輝　匡曉峰

摘要：試驗通過在基礎飼料中分別添加不同含量(0.5％1％2％)藥性菌質(藥用真菌和中草藥雙向目體發酵的產物)的飼料組作為實驗組，以基礎飼料為對照組，飼養河鲀60天，并在第15，30，45，60天取樣測定其脾臟溶茵酶和超氧化物歧化酶活性。并在飼養60后進行攻毒試驗。結果表明，藥性菌質能夠提高河鲀免疫力。1％添加量的藥性茵質效果最佳。原因是藥性菌質在一定時間內能顯著提高河脾臟溶菌活性。

關鍵詞：靈芝菌絲體；河鲀；溶菌酶；免疫力

中圖分類號：Q-33文獻標識碼：A文章編號：1672-3198(2009)02-0296-02

0前言

河鲀又稱河鲀(Takifugu obseurus)屬鲀形目，純科，東方純屬，暖水性底棲魚類，俗稱河豚，又名氣泡魚，是一種營養價值較高的水產品，其蛋白質含量遠高于一般魚類，而脂肪含量是魚類中最低的一種，其不僅具有養血補氣功效，魚皮還有健胃的特效，而且其體內有毒的部位還可提取名貴的河豚毒素，有較高的經濟價值，名列長江“四大名魚”之首，為傳統美食中的典范，肉質鮮嫩，味美絕倫。

近年來隨著野生河鲀資源的嚴重衰退，人工飼養的河鲀成為供應市場以滿足食用的主要生產產品。通過人工養殖來緩解市場供需之間的矛盾是一條切實可行又勢在必行的途徑，并有利于保護天然環境中日益減少的河豚資源，經濟效益和生態效益顯著，人工養殖河豚又成了新的特種養殖經濟增長點；近年來河豚養殖業逐步規模化和集約化，但也存在著不少日益突出、制約河豚養殖業發展的問題。

藥用真菌新型(雙向性)固體發酵工程(簡稱雙向發酵)是將發酵菌種和發酵基質所構成發酵組合內的基質部分，由以往僅用富含碳、氮等營養的農副產品(甘蔗渣、麥麩等)作為營養基質(其產品稱為藥用菌質)，改變為采用具有一定活性成分的中藥材作為藥性基質，它既能提供真菌生長所需營養又因真菌的酶而被改變組織、成分，從而產生新的性味功能，故具有雙向性，其產品稱為藥性菌質，如兼用營養、藥性兩種基質則稱為全性基質，產品也稱為藥性菌質。藥性菌質，常可比該真菌或藥性基質本身或兩者簡單相加有更良好的藥效，主要表現在增效、擴用、排毒等方面。目前張李陽等對藥性菌質的研究在家禽的實驗中已取得一些成績，在肉雞的日糧中添加藥性菌質，可顯著性的促進肉雞血紅蛋白、血清蛋白的合成，改善蛋白質的代謝，提高營養物質的利用效率，可以提高肉雞的血清堿性磷酸酶的活性，促進機體的鈣、磷代謝，增強機體的新陳代謝功能，改善消化生理，從而促進肉雞的生長。

1材料和方法，

1.1材料

(1)靈芝菌絲體；選用的一種藥用真菌在含一定量可藥食同源中藥藥渣的全性基質上進行雙向發酵，最終得到的產物稱為藥性菌質。

(2)試驗用魚：取自中洋集團下屬龍洋水產有限公司河豚養殖場內，白養的大小基本一致的1冬齡河鲀1200尾。

(3)基礎飼料：海安龍洋牌河豚魚飼料。

1.2方法

共飼養大小基本一致(體重0.156±0.024Kg，體長19.0±1.6cm)健康活潑的河鲀魚10000尾，試驗前先用基礎飼料馴養7d，待供試魚適應環境，并確認無疾病癥狀后，隨機分成4組入池(每池2500尾)。試驗以投喂基礎飼料(正常河鲀飼料)為對照組(池)，以投喂在基礎飼料中分別添加不同含量(0.5％、1％、2％)的飼料添加劑的試驗飼料為試驗組(池)，飼養河鲀60天。每天按正常投飼量投喂河鲀飼料，使之飽食，并根據水溫適當調節，水溫保持在21.6～27.8℃。飼養管理按正常生產進行，每天記錄投飼量，計算出攝食量，河鲀疾病的防治對照中洋集團的養殖廠常規進行。并于投喂飼料添加劑后的第15、30、45、60天，從各組中用隨機撈取的方法撈取8尾供試魚取脾臟組織在－20℃冰箱中保存，備用。

2結果與分析

2.1試驗結果

(1)取樣策略：試驗開始后的第15、30、45、60天，從試驗池中隨機撈取8尾受試魚進行采血，血清收集在-20℃冰箱中保存，備用。

取樣時停飼1次，測試各組受試魚50尾，并測量體重、體長、體全長(本文主要探討藥性菌質對河鲀免疫力影響，關于生長方面指標將另文探討)。

(2)受測指標：

A酶活性的測定。

用脾臟組織測定溶菌酶、SOD活性，測定按所購試劑盒(南京建成生物工程研究所)的方法在南京曉莊學院進行。

B回感試驗。

各組分別留存供試魚10尾，飼養在南京曉莊學院養殖室內，觀其行為正常并能正常攝食混合飼料時，進行回感試驗。用一定濃度的嗜水單細胞菌用注射方法進行肌注感染，觀察注射后各組行為變化、癥狀和死亡率。一周后按組對每尾河豚魚進行解剖，肉眼觀察其表皮、粘液、肌肉豐度、肝臟體積、含血量等和手指接觸等指標予以比對后進行記錄。

2.2實驗結果

試驗數據用ANOVA軟件進行方差分析，Duncan's進行多重比較。

(1)投喂藥性菌質添加劑對河豚魚相關酶活性的影響

在投喂藥性菌質后，實驗3、4組的溶菌酶活力有所升高并在45d時達到最大值，且以2％試驗組溶菌酶活力最高，1％次之，與對照組相比差異顯著。

(2)回感實驗結果。

在回感實驗中，1％試驗組死亡率最低，體表顏色鮮艷，表皮光滑，肌肉豐厚，但頭頸部表皮粘液呈片脫落，肝臟體積最大，血量較多，肝臟外表充血程度最小；對照組表皮較光滑，肌肉肥滿程度一般，肝體積中等，血含量較大僅次子1％試驗組；0.5試驗組，表皮欠光滑，肌肉不豐滿，肝臟外表呈條狀充血(約3cm)，肝葉血管較厚；2％試驗組表皮稍顯光滑，肝小，含血量少，肝臟整體充血，靠腹部有長條血痕(約4cm)。從中可以看出，藥性菌質能有效促進生長和提高魚體免疫力，其用作飼料添加劑的添加量應為2.0％組效果最佳，1.0％組效果佳。

2.2分析與討論

藥用真菌具有提高免疫、抗腫瘤、延緩衰老、降血脂等多種生物功效，在醫藥、食品領域受到廣泛關注。溶菌酶是魚體內具有殺滅外來細菌的活性酶，這種酶在魚體免疫和抗病過程中發揮著很重要的作用。

魚體中溶菌酶的產生與哺乳類動物相似，主要由嗜中性粒細胞和單核細胞產生，少量由巨噬細胞生成。溶菌酶是魚類防御微生物入侵的最有效因子之一，對于革蘭氏陽性菌溶菌酶主要是通過破壞細胞壁的N－乙酰胞壁酸和N－乙酰葡糖胺之間的聚糖鏈，使細胞壁失去韌性，細菌發生低滲性裂解，從而殺傷細菌。而對于革蘭氏陰性菌，溶茵酶是在補體和其他酶已經破壞細菌外層胞壁，露出細胞內層肽聚糖之后起作用。作者通過試驗知添加藥性菌質后，隨著飼喂時間增加，各組魚溶菌酶活力均有一定程度提高，并在45天左右達到最高，而后有所降低，且以添加2％效果明顯(P＜0.05)，說明藥性菌質組均能提高河鲀的溶菌酶活力，提高免疫水平，推測可能是藥性菌質中成分激活了單核細胞的分泌功能，從而使溶菌酶大量釋放。

在回感實驗中2％組活動力強，運輸過程中碰撞嚴重，其應激反應亦強，對肝臟損傷大，解剖該組魚發現個體的肝萎縮，肝臟血量少，表明其急性死亡率高，因此，整個實驗顯示菌質添加量在0.0％到2.0％范圍內，隨著添加量增加，免疫細胞增殖能力逐漸增強。試驗證明在飼喂含有藥性菌質45d后效果達到最好，因此使用本藥性菌質作為飼料添加劑應在河鲀易發病前45d效果最好。