胃腸道腫瘤微轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)及意義

王忠津　馬紀(jì)江

腫瘤的轉(zhuǎn)移情況與腫瘤患者的疾病分期、治療及預(yù)后密切相關(guān)。現(xiàn)就胃腸道腫瘤微轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)及意義作一綜述。

近20年來(lái)，胃癌根治術(shù)的方法不斷改進(jìn)，但總的來(lái)說(shuō)最近20年來(lái)胃癌患者的預(yù)后并未改善。結(jié)腸癌患者大約50%死于局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移疾病，這可能與這可能與腫瘤患者在手術(shù)時(shí)未能清掃淋巴結(jié)、骨髓及腹腔內(nèi)的微小轉(zhuǎn)移灶有關(guān)。因此，腫瘤患者微轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)具有重要意義。

1 微轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)方法

1．1 免疫組化

抗體的特異性的選擇與檢測(cè)方法的敏感性同樣重要。目前所有的抗體主要有抗癌胚抗原（CEA）、細(xì)胞角蛋白（CK）、上皮細(xì)胞膜抗原（EMA）等抗體，而近來(lái)研究較多的是抗細(xì)胞角蛋白單抗。細(xì)胞角蛋白是一組蛋白，共有20個(gè)組份。細(xì)胞角蛋白多肽是正常上皮細(xì)胞和惡性上皮細(xì)胞骨架的基本成分。有報(bào)道結(jié)腸癌、胃癌、卵巢癌、乳腺導(dǎo)管癌等均能被CK1~CK4單抗染色。而Haboubi等報(bào)道一些抗上皮細(xì)胞的抗體與正常的淋巴結(jié)成分，如樹(shù)突細(xì)胞和漿細(xì)胞反應(yīng)。還有報(bào)道細(xì)胞角蛋白組分8．18在一些非上皮細(xì)胞組織和細(xì)胞系的異常表達(dá)。因此抗體的特異性有待提高。

1．2 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） 最近檢測(cè)微轉(zhuǎn)移灶的技術(shù)取得很大進(jìn)步。PCR方法具有敏感性高、特異性強(qiáng)、快速、樣本量大等優(yōu)點(diǎn)、目前PCR檢測(cè)微轉(zhuǎn)移灶的方法主要有兩種：①檢測(cè)突變或重組的改變了的DNA；②檢測(cè)“組織特異”基因的mRNA。所謂“組織特異”基因即所需測(cè)定的基因必須是在惡性細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄活化，而不是在惡性腫瘤組織所在的正常細(xì)胞中活化。Hayashi等通過(guò)檢測(cè)突變的K-ras或p53基因來(lái)診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這種方法的缺點(diǎn)是原發(fā)腫瘤必須具有一個(gè)能進(jìn)行PCR擴(kuò)增的異常基因，而Hayashi等只在120例重的71例獲得擴(kuò)增基因。另外，用PCR方法在淋巴結(jié)中測(cè)到的可能是降解的含有重要序列的腫瘤DNA片段，而非活的腫瘤細(xì)胞。但如果能找到各種腫瘤的共同突變的致癌或抑癌基因，則這種方法將具有很廣泛的應(yīng)用價(jià)值。有報(bào)道用CEAmRNA作為腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)骨髓中的微轉(zhuǎn)移灶。Noguchi 等用Keratin19 mRNA作為腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移灶，而Soeth等用CK20 mRNA作為特異目標(biāo)mRNA，用于結(jié)腸癌患者骨髓微小轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)，此方法的關(guān)鍵在于獲得“特異”基因的mRNA。

2 微轉(zhuǎn)移灶在胃腸道腫瘤的意義

2．1 胃癌 由于先進(jìn)診斷技術(shù)的應(yīng)用，早期胃癌的診斷不斷提高，預(yù)后不斷改進(jìn)，但早期胃癌根治術(shù)后的患者仍有復(fù)發(fā)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測(cè)是預(yù)測(cè)早期胃癌患者生存率的一個(gè)重要因素，而常規(guī)染色有遺漏轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)檢出的可能。Machara等用抗CK單抗檢測(cè)34例死于復(fù)發(fā)的早期胃癌患者的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，其中8例患者（23．5%）測(cè)得CK陽(yáng)性細(xì)胞，CK陽(yáng)性組患者的平均生存時(shí)間為3．5年，CK陰性組為6．6年。Babo等報(bào)道淋巴結(jié)陰性的早期胃癌患者行R1根治術(shù)比行R2根治術(shù)復(fù)發(fā)率高，認(rèn)為這些患者可能存在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移灶。Schlimok等用抗細(xì)胞角蛋白單抗檢測(cè)97例胃癌患者的骨髓，其中34例骨髓中測(cè)到CK陽(yáng)性細(xì)胞，并且CK陽(yáng)性細(xì)胞患者的復(fù)發(fā)顯著高于CK陰性者，他認(rèn)為骨髓中測(cè)到CK陽(yáng)性細(xì)胞，可認(rèn)為有單個(gè)腫瘤細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移，其具有獨(dú)立的預(yù)后意義。Jauch等也認(rèn)為，骨髓中出現(xiàn)播散的腫瘤細(xì)胞則可認(rèn)為有腫瘤全身化的可能，可作為預(yù)后指標(biāo)，特別有助于制定輔助治療方案。Letter認(rèn)為，根據(jù)Pagets的“種子與土壤”理論，播散的單個(gè)細(xì)胞只是實(shí)體瘤轉(zhuǎn)移形成的一個(gè)前提，而局部環(huán)境因素和宿主的免疫狀態(tài)則決定是否出現(xiàn)明顯的臨床轉(zhuǎn)移及其轉(zhuǎn)移方式。

然而，Juhl等認(rèn)為，臨床上消化道腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移較少見(jiàn)，檢測(cè)腹腔中游離的腫瘤細(xì)胞意義更大。胃癌、結(jié)腸癌及胰腺癌常發(fā)生腹腔復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，腹腔中出現(xiàn)游離的癌細(xì)胞表明患者的預(yù)后差，腹腔中出現(xiàn)游離的癌細(xì)胞與肉眼可見(jiàn)的腹腔轉(zhuǎn)移具有同樣重要的意義。

2．2 結(jié)腸癌 Greenson等應(yīng)用抗細(xì)胞角蛋白單抗免疫組化方法檢測(cè)常規(guī)染色陰性的結(jié)腸周圍進(jìn)八戒，55例（568個(gè)淋巴結(jié)）中檢測(cè)到14例（33個(gè)淋巴結(jié)）出現(xiàn)CK陽(yáng)性細(xì)胞，其中6例（43%）于66個(gè)月內(nèi)死亡，而CK陰性組只有1例于同期內(nèi)死亡。因此他推薦對(duì)所有Duke B期結(jié)腸癌患者用抗CK單抗檢測(cè)結(jié)腸周圍淋巴結(jié)。Hayashi等認(rèn)為，基因診斷加傳統(tǒng)的病理檢查將使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷更準(zhǔn)確，而通過(guò)基因診斷檢測(cè)到陽(yáng)性淋巴結(jié)并不一定表明腫瘤復(fù)發(fā)的可能性大。

同樣有人用抗CK單抗檢測(cè)結(jié)腸癌患者骨髓中微轉(zhuǎn)移灶，認(rèn)為這提供了一個(gè)直接估計(jì)全身腫瘤細(xì)胞播散的技術(shù)，骨髓中出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞，表明這些腫瘤細(xì)胞可能已達(dá)到肝臟、腹腔、肺臟等，因此可作為一個(gè)比腫瘤大小和區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移更強(qiáng)的預(yù)測(cè)腫瘤轉(zhuǎn)移或局部復(fù)發(fā)的指標(biāo)。最緊有學(xué)者以CK20 mRNA作為特異目標(biāo)mRNA，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)結(jié)腸癌患者中的骨髓微小轉(zhuǎn)移灶，其陽(yáng)性率隨著腫瘤分期的提高而提高，而對(duì)照組中除1例FAP病例顯示陽(yáng)性外，其余均為陰性。

總之，微小轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)可以為臨床進(jìn)行腫瘤分期、判斷預(yù)后、擬定治療計(jì)劃等提供指導(dǎo)性或建議性意見(jiàn)。

參 考 文 獻(xiàn)

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