ｂｃｌ－２和ｋｉ－６７蛋白在結腸癌及癌前病變中的表達及臨床意義

劉衛梅　劉建民　封　琳　付　剛

【摘要】 目的 檢測bcl-2和ki-67在結腸癌及癌前病變中的表達情況，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化方法檢測56例結腸癌，38例結腸腺癌，20例正常結腸粘膜，分別進行bcl-2和ki-67蛋白的檢測。結果 bcl-2陽性表達率在腺癌與腺瘤中基本相同，陽性表達強度腺癌明顯高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤和腺癌的陽性表達強度及表達率與正常大腸結膜相比差異有顯著性(P<0．01)。ki-67在腺癌中的表達強度及表達率明顯高于腺瘤(P<0．01)，有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴結轉移者(P<0．01)。結論 bcl-2在結腸組織的惡性轉化中起著重要作用；ki-67的陽性表達及表達強度對診斷腺癌和監測腺瘤癌變中有重要意義。

【關鍵詞】結腸癌；癌前病變；bcl-2蛋白；ki-67蛋白

お

The expression of bcl-2 protein and ki-67 protein in colon cancer and precancerous lesions and Its chinical significance

LIU Wei-mei,LIU Jian-min,FENG Lin,et al.Department of Pathology,The Second Jiaozuo Peoples Hospital,Henan 454100,China

【Abstract】 Objective Detecting the bcl-2 and ki-67 in the expression of colon cancer and precancerous lesions and and discussing its clinical significance.Methods Testing 56 example colon cancers, 38 example colon adenocarcinoma, 20 example normal colon mucous membrane with immunohistochemistry, and testing bcl-2 and the ki-67 protein separately.Results The rate of bcl-2 positive expression in adenoma and adenocarcinoma is basically the same, the intensity of positive expression of adenocarcinoma is significantly higher than adenomas(P<0．01), Compared to the positive expression strength and expression rate of conjunctiva,there are significant difference on adenoma and adenocarcinoma(P<0．01).ki-67 in adenocarcinoma's expression intensity and expression rate is significantly higher than the rate of adenoma(P<0．01), the patients with lymph node metastasis are significantly higher than those non-lymph node metastasis(P<0．01).Conclusion bcl-2 play an important role in m alignant transformation of the colon organization; the ki-67 positive expression and the expression intensity has the important meaning to diagnoses in the adenocarcinoma and the monitor adenoma cancer.

【Key words】Colon Cancer;Precancerous lesions;bcl-2 protein；ki-67 protein

結腸癌是消化道常見的惡性腫瘤，發病率有逐年增高的趨勢，嚴重危害人類的健康。結腸癌在不同國家和地區發病率相差懸殊。一般而言，西北歐及北美國家發病率較高，而亞洲、南美洲和非洲國家則較低。我國結腸癌平均死亡年齡為60．08歲，其中男59．29歲，女61．05歲，死亡性別比為1．35，男高于女。結腸腺瘤是常見的癌前病變，是發展為癌的最危險因素。腫瘤的發生發展與腫瘤細胞的凋亡密切相關^[1]，細胞凋亡是由基因調控的細胞程序性死亡^[2]。bcl-2是重要的細胞凋亡調節分子，在腫瘤的發生發展中起著重要作用。ki-67參與細胞周期的調節，從理論上講，與腫瘤發生也可能有密切的關系。本組試驗采用免疫組話的方法檢測bcl-2和ki-67在結腸癌及癌前病變中的表達及臨床意義。

1 材料與方法

1．1 一般資料 結腸癌手術標本56例，內鏡下電切腺瘤標本38例均來自本院病理科，所有病例均經過病理組織學證明。對56例結腸癌進行分級，高分化14例，中分化24例，低分化18例，有淋巴結轉移的34例，無淋巴結轉移的22例。另選取20例正常結腸粘膜作對照。

1．2 免疫組化染色 標本經10%甲醛固定，石蠟包埋切片，切取4 μm厚切片。bcl-2和ki-67抗體和免疫組化試劑盒均購于武漢博士德公司，采用免疫組化SABC法，基本步驟嚴格按試劑盒說明書進行。切片脫蠟入水；3%H2O₂處理5～10 min；正常山羊血清孵育20 min；加一抗1～2 h；加生物素標記二抗，加SABC(鏈霉素合素-生物素-過氧化物酶復合物)20 min，DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封固，陽性對照用一直的陽性片作對照，陰性對照用PBS代一抗。

1．3 結果判斷 bcl-2以細胞膜、細胞漿顯示棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，ki-67陽性表現為細胞核內出現棕黃色顆粒。選取5個不同高倍視野（×100），每個視野計數100個腫瘤細胞，取其平均值為細胞的陽性率，參照文獻^[3-5]，陽性細胞數≥50%為強陽性(+++)，30%～49%為陽性(++)，10%～29%為弱陽性(+)，<10%為陰性。

1．4 統計學方法 數據分析采用確切概率法(Fishers Exact Test或χ²檢驗)，應用SPSS 11．5軟件包完成，以P<0．05差異具有統計學意義。

2 結果

2．1 bcl-2胞膜/胞漿表達 56例結腸腺癌中弱陽性(+)3例，陽性(++)7例，強陽性(+++)33例，表達率為76．79%；38例結腸腺瘤中弱陽性(+)12例，陽性(++)14例，強陽性(+++)2例，表達率為73．68%；20例正常黏膜中弱陽性(+)1例，陽性(++)2例，表達率為15%。腺癌與腺瘤的陽性表達率基本相同，腺癌的陽性表達強度明顯高于腺瘤(P<0．01)。二者的陽性表達率及表達強度與正常結腸粘膜相比差異有統計學意義(P<0．01)。

2．2 ki-67細胞核表達 56例結腸腺癌中弱陽性(+)2例，陽性(++)18例，強陽性(+++)34例，表達率為96．43%；38例結腸腺瘤中弱陽性(+)11例，陽性(++)4例，強陽性(+++)3例，表達率為47．37%；20例正常黏膜中無1例表達。結腸腺癌的陽性表達率及表達強度相助高于腺瘤(P<0．01)。

2．3 cl-2和ki-67蛋白陽性與結腸癌組織分級和淋巴結轉移的關系(表1)。

3 討論

ki-67為細胞增殖的一種標記。在細胞凋亡中S、G2、M期均有表達，它是一種增殖抗原，主要定位于細胞核，與細胞周期密切相連，在有絲分裂中起著維持DNA有規則結構的重要作用。

ki-67參與細胞周期的調控網絡，理論上，可作為診斷和預測腫瘤對治療的敏感度及其結局等方面的標志物，在腫瘤的分級、增生程度、預后的預測中均有一定的意義。

本組研究顯示：結腸腺癌中的陽性表達強度及表達率均高于腺瘤(P<0．01)。ki-67的陽性表達隨著腺癌的組織學降低而增高，但差異無統計學意義(P>0．05)，有淋巴結轉移和無淋巴結轉移的表達情況差異無統計學意義(P>0．05)。結果表明，ki-67陽性表達及表達強度對診斷腺癌和監視腺瘤癌變有重大意義，對結腸癌早期發現有較高價值，而與結腸腺癌的分化程度和淋巴結轉移無明顯相關性。國外有學者研究指出：癌細胞分化程度越低，伴有淋巴結轉移者ki-67表達越強^[6]。本結果似有不同，有待進一步研究。

bcl-2是從濾泡性淋巴瘤中分離處的一種癌基因，也是細胞凋亡抑制因子，具有抑制細胞凋亡、延長細胞壽命的功能。bcl-2作為抑制凋亡的基因，其過表達能延長細胞壽命，使已有DNA受損的細胞生存期延長，以致增加其他基因突變的機會，從而導致腫瘤的發生^[7]。本組研究中，正常結腸粘膜、腺瘤和腺癌中均有bcl-2表達，腺瘤與腺癌的陽性表達率亦無顯著性，腺癌的表達強度則明顯高于腺瘤(P<0．01)，腺瘤及腺癌的陽性表達強度和表達率與正常結腸粘膜相比，差異有統計學意義(P<0．01)。表明bcl-2的陽性表達強度和表達率隨著結腸組織的惡性轉化呈上升趨勢，尤以表達強度為甚。提示bcl-2蛋白表達在結腸組織惡性轉化中起重要作用。同時還顯示bcl-2的陽性表達與結腸癌的分化程度和淋巴結轉移無關(P>0．05)。

參 考 文 獻

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