蟲草參芪口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

　　關(guān)鍵詞：蟲草參芪口服液；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；含量測定
　　中圖分類號：R927.11
　　文獻標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007-2349(2008)02-0038-02
　　
　　蟲草參芪口服液由冬蟲夏草、黃芪、丹參、人參、麥冬等組成。具有補氣養(yǎng)血、益。腎助陽之功效，用于氣血虧虛、腎陽不足所致的氣短懶言，身倦乏力，頭暈眼花等癥。為制定本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本實驗應(yīng)用TLC法對本品中主要藥物進行了定性鑒別，并用薄層掃描法測定了本品中主要有效成分黃芪甲苷的含量。結(jié)果表明該法穩(wěn)定可行，回收率高，重現(xiàn)性好，適宜作為蟲草參芪口服液的質(zhì)量控制方法。
　　
　　1、儀器與試藥
　　
　　1、1儀器CS-9301型雙波長薄層掃描儀(日本島津公司)；CQ-500J型超聲波儀(上海超聲波儀器廠)；PBQ-I型薄層鋪板儀(重慶南岸新力實驗電器廠)；定量毛細(xì)管(美國Drummond公司)。
　　
　　1、2試藥
　　薄層層析用硅膠G(德國Merck)；黃芪甲苷、原兒茶醛及人參皂苷Rg1、Re對照品(中國藥品生物制品檢驗所)；蟲草參芪口服液(青海三普藥業(yè)股份有限公司)；其他試劑均為分析純。
　　
　　2、定性鑒別
　　
　　2、1枸杞的鑒別
　　取本品10ml，加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣用醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取枸杞子對照藥材0.5g，加水35ml，加熱煮沸15min，放冷，濾過，濾液用醋酸乙酯提取2次，每次15ml，合并提取液，蒸干，殘渣用醋酸乙酯1ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯—氯仿—甲酸(3：2：1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
　　
　　2、2人參的鑒別　 取本品50ml，用水飽和的正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用3倍量氨試液提取2次，棄去氨液，正丁醇液用正丁醇飽和的水洗2次，每次30ml，蒸干正丁醇液，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；取人參對照藥材粉末1g，加乙醚40ml，加熱回流1h，棄去乙醚液，藥渣揮干，用水0.5ml拌潤，加水飽和的正丁醇10ml，超聲提取30min，吸取上清液，加3倍量氨試液(40～100)搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為對照藥材溶液；另取按處方量及制備工藝制備的蟲草參芪口服液空白(缺人參藥材)，同法制成陰性對照溶液；另取人參皂苷Rgl對照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液、人參皂苷Re對照品加甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液6μl、陰性對照溶液10μl、對照品溶液各2μl和對照藥材溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水(15：40：22：10)10℃下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇試液，在105℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個斑點。而陰性色譜中無相應(yīng)斑點出現(xiàn)。
　　
　　2、3丹參的鑒別
　　取本品10ml，用稀鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯提取3次，每次10ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材1g，加水適量煮沸30min，放冷，濾過，濾液加水至10ml，用稀鹽酸調(diào)PH值至2，加醋酸乙酯提取2次，每次15ml，合并醋酸乙酯液，蒸至1ml，作為對照藥材溶液；另取按處方量及制備工藝制備的蟲草參芪口服液空白(缺丹參藥材)，同法制成陰性對照溶液；另取原兒茶醛對照品加甲醇制成每1ml含1mg的溶液作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液10μl、陰性對照溶液10μl、對照品溶液1μl和對照藥材溶液4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿—醋酸乙酯—苯—甲酸(5：6：3：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％FeCl乙醇試液，吹干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同一藍(lán)色的斑點。而陰性色譜中無相應(yīng)斑點出現(xiàn)。
　　
　　3、含量測定
　　
　　3、1測定條件的選擇
　　精密量取蟲草參芪口服液30ml及陰性口服液(缺黃芪藥材)30ml，分別用水飽和的正丁醇提取5次(30，30，25，20，10ml)，合并正丁醇液，用氨試液洗3次(30，20，20ml)，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水3～5ml使溶解，過D101大孔吸附樹脂柱(d：1.5cm，L：12cm)，先后以水50ml、40％乙醇30ml、70％乙醇60mL洗脫，收集70％乙醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，分別作為供試品溶液及陰性對照溶液。另精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層掃描法(中國藥典2005年版一部附錄ⅥB)試驗，精密吸取供試品溶液10μl、陰性對照溶液10μl、對照品溶液2μl與4μl，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿—甲醇—水(13：6：2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加熱至斑點顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的潔凈玻璃板，周圍用膠布固定，照薄層色譜法進行掃描，波長：λs=530nm，λR=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值。陰性溶液無干擾。
　　
　　3、2線性化范圍的考察
　　精密吸取黃芪甲苷對照品溶液(1.02mg/ml)2μl、4μl、6μl、8μl、10μl點子同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件進行測定，以點樣量(μg)對積分值(A)作圖，得一不過原點的直線，結(jié)果見表1。
　　
　　
　　3、3穩(wěn)定性試驗
　　精密吸取同一供試品溶液10μl、對照品溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件，間隔不同時間進行測定，結(jié)果見表2。
　　
　　結(jié)果表明：黃芪甲苷在150分鐘內(nèi)積分值基本穩(wěn)定。
　　
　　3、4精密度試驗
　　精密吸取同一對照品溶液2μl，點于同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件進行測定，結(jié)果見表3。
　　
　　
　　3、5重復(fù)性試驗
　　精密吸取同一供試品溶液10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，按上述色譜條件進行測定，結(jié)果見表4。
　　結(jié)果表明：黃芪甲苷重復(fù)性試驗良好，符合定量分析要求。
　　
　　
　　3、6加樣回收率試驗
　　取本品約12g，精密稱定，加適量黃芪甲苷對照品，按照正文中(含量測定)項下方法進行處理樣品及測定，計算回收率，結(jié)果見表5。
　　
　　結(jié)果表明：黃芪甲苷回收率試驗良好，符合分析要求。
　　
　　3、7樣品含量測定
　　取3批樣品，按正文中(含量測定)項下條件進行測定，結(jié)果見表6。
　　
　　
　　4、討論
　　
　　本文中方法專屬、靈敏，也可供含黃芪藥材的其他中藥制劑之借鑒。關(guān)于黃芪甲苷的提取方法有溶液萃取法、回流提取法及超聲提取法等，因本品為口服液體制劑，可采用直接萃取法進行提取。因為皂苷類成分在含水正丁醇中溶解性好，故本文采用含水正丁醇直接萃取，提取效率最