過期妊娠胎盤滋養細胞Ｓｕｒｖｉｖｉｎ表達情況的研究

【摘要】 目的 通過觀察過期妊娠患者凋亡抑制蛋白Survivin在胎盤滋養細胞層的表達，探討滋養細胞凋亡與過期妊娠的關系。方法 采用免疫組織化學方法（S-P法）對10例過期妊娠和10例正常足月妊娠產婦的胎盤滋養細胞層Survivin表達進行檢測和對比研究。結果 結果胎盤滋養細胞層Survivin表達過期妊娠組為6.67±0.45，足月妊娠組為8.83±0.67，兩組比較Survivin表達差別有統計學意義(P＜0.05)。結論 胎盤滋養細胞層凋亡抑制蛋白Survivin表達減少，可能與過期妊娠有關。

【關鍵詞】 胎盤；過期妊娠；滋養細胞；凋亡；Survivin蛋白

文章編號：1003-1383(2008)02-0255-02中圖分類號：R 714.21 文獻標識碼：A

Study on Expression of Survivin Protein in Trophoblast Cells of Placenta of Postdate LaborCHEN Cairong1，WANG Zineng2，GUO xiaoyan1，HU Qinglan1，LIU kunping3

（1.Department of Obestetrics and Gynecology of the Fifth Affiliated Hospital of Jinan 

University，Guangdong Qingyuan 511500；2.Department of Obestetrics and Gynecology of the First Affiliated Hospital of

Jinan University，Guangdong Guangzhou 510630；3.Department of pathobiology of

the FifthAffiliated Hospital of Jinan University，Guangdong Qingyuan 511500）

【Abstract】 Objective To study the relationship between postdatelabor and the trophoblast apoptosis by observing the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta.

Methods Immunnohistochemistry was used to detect the expression of Survivin protein in the trophoblasts of placenta which were taken from 10 samples of postdate labor and 10 samples of full-term labor.Results The expressionin of Survivin protein in the trophoblasts of postdate labor was (PU:6.67±0.45) and in full-term labor group was (PU:8.83±0.67).The expression of Survivin protein in the trophoblasts of full-term labor was remarkably higher than that in the placenta of postdate labor. There was significant difference between them.Con

clusion Survivin may be inhibited by trophoblast apoptosis .it might be correlated with the postdate labor.

【Key words】 placenta；postdate labor；trophoblasts；apoptosis；Survivin

近年來，隨著細胞凋亡現象的提出，細胞凋亡分子調節機制的逐漸闡明，妊娠與凋亡相關性的研究也逐漸受到重視。細胞凋亡是在基因調控下有新蛋白合成的主動發生的現象。許多資料表明細胞凋亡的異常可能影響妊娠的正常進展，影響胎盤功能，進而導致妊娠疾病的發生。過期妊娠患者胎盤病理改變可引起胎盤氧儲備能力下降，并與胎兒缺氧有關，但引起胎盤病理改變的原因尚不清楚。明確胎盤功能降低的原因是解決不良妊娠結局的關鍵。本研究選取Survivin蛋白在過期妊娠胎盤滋養細胞層表達的情況，探討胎盤細胞凋亡在過期妊娠胎盤中的作用，旨在為揭示過期妊娠的病理機制提供實驗依據，更好地改善圍產結局。

對象和方法

1.對象 選擇于2002年12月至2003年5月在暨南大學醫學院附屬第五醫院婦產科住院分娩的正常足月妊娠產婦10例，過期妊娠產婦10例。其中足月產組產婦年齡24～32歲，平均(27.6±3.3)歲；過期產組產婦年齡23～31歲，平均(26.8±3.1)歲。兩組年齡差別無統計學意義(t=0.792，P＞0.05)。兩組均除外妊娠高血壓綜合征(妊高征)、前置胎盤、胎盤早剝、羊水過多、胎兒宮內發育遲緩等病理妊娠，除外糖尿病、肝炎、甲亢、心臟病、肺結核等妊娠合并癥，除外其他急慢性器質性病變。過期產組嚴格核對月經周期、胎動時間及孕早期B超檢查以確認妊娠真正過期。

2.方法

（1）標本采集：兩組孕婦均在胎盤娩出5 min內，于胎盤母面中央垂直至胎兒面貫穿取材，約2 cm×2 cm×2 cm 大小，立即用福爾馬林固定，24 h后石蠟包埋固定，5 μm連續切片2張，60℃烤箱過夜烤干后置37℃溫箱保存備用，免疫組織化學法（S-P法）染色測Survivin蛋白表達，剩下一張備用。

（2）實驗方法:免疫組織化學方法-鏈霉菌素抗生物素蛋白-過氧化酶法檢測胎盤滋養細胞層Survivin表達。Survivin鼠抗人多克隆抗體為Maixin公司產品， 試劑購自福州邁新

生物技術開發有限公司，并設置相應的陽性和陰性對照。細胞內出現棕黃色顆粒為陽性信號，Survivin為胞漿染色，在400倍鏡視野下每張免疫組化片隨機測試10個視場，每個視場隨機取絨毛滋養層和絨毛間質各10個部位。研究采用暨南大學醫學院婦產科教研室的Leica Q550IW圖像分析系統，應用申洪等［1，2］提出的陽性單位(positive unit，PU)概念定量表達免疫組化陽性反應度。PU=［(Gα-Gβ)/Gmax］×100，Gα、Gβ分別為待測結構和背景的平均灰度，Gmax等于256，為檢測儀的最大灰度。

3.統計學方法 采用t檢驗進行統計學處理，以P＜0.05為顯著性標準。

結果

兩組胎盤滋養細胞層Survivin蛋白表達情況見表1。胎盤滋養細胞層Survivin蛋白表達足月產組高于過期產組(P＜0.01)。兩組Survivin蛋白在絨毛滋養細胞及絨毛間質細胞的表達見圖1、圖2。

討論

細胞凋亡在多細胞動物的生長發育及維持機體平衡等方面起非常重要的作用，細胞凋亡的紊亂與許多疾病相關。人們對正常妊娠的胎盤凋亡情況進行了大量的研究，發現隨著妊娠的進展，胎盤的凋亡發生率逐漸升高，表明凋亡是胎盤發育成熟過程中的一個生理現象［3］。許多學者認為，妊娠的病理因素與細胞凋亡的調節紊亂有關，例如宮內胎兒生長遲緩(IUGR)患者胎盤組織中凋亡的發生率明顯增加［4］，可能過度的凋亡影響了胎盤的功能，進而影響妊娠的結局。

本研究結果顯示，足月妊娠的胎盤與過期妊娠的胎盤相比，兩者滋養細胞層中Survivin的表達，前者的表達高于后者，差別有統計學意義。隨著妊娠的進展，胎盤組織的成分和功能均發生相應的變化，以適應孕期胎兒的生長發育。細胞凋亡是細胞生長代謝的形式，隨著孕周的變化也發生相應改變［5］。Stephen 等［6］采用光鏡下觀察計數的方法研究了23例正常足月妊娠和14例過期妊娠的胎盤中細胞凋亡的情況，發現過期妊娠的胎盤細胞凋亡發生率明顯增加。在本研究中，過期妊娠胎盤中凋亡抑制蛋白Survivin的表達明顯降低，這與Stephen的研究中胎盤凋亡發生率增加是相一致的，體現了基因蛋白調節與形態學變化的一致性。

Survivin 基因是一種凋亡抑制基因，其表達產物具有獨特結構，能夠保護特定細胞抵抗的一系列刺激原誘導，抑制細胞凋亡。Shiozaki等［7］將Survivin定位在細胞滋養細胞及絨毛外滋養細胞。且從早孕期開始一直持續至足月和過期妊娠。Survivin表達的減少，抑凋亡調節降低，導致胎盤滋養層凋亡增加，當凋亡細胞的比例增加到影響胎盤功能的時候，便進入病理狀態，最終導致發生胎盤功能不全，臨床表現為胎兒窘迫、胎死宮內、死產、新生兒窒息和新生兒死亡的發生率增加。筆者認為在正常孕婦胎盤組織中發生細胞凋亡是一種生理現象，而在過期妊娠患者胎盤組織中發生的細胞凋亡則是病理性的。隨著細胞凋亡的基礎性研究的進展和突破，將會對過期妊娠的預防和治療提供新的契機。

參考文獻

［1］申 洪，陸藥丹.免疫組織化學染色的定量方法研究［J］.生物醫學工程學雜志，1993，10（3）：281-285.

［2］申 洪.免疫組織化學染色的定量方法研究［J］.中國組織化學與細胞化學雜志，1995，4（1）：89-92.

［3］Baker PN，Smith SC，Symonds EM，et al.Placental apoptosis in normal human preganacy［J］.Am J Obstet Gynecol，1997，177(1):57-65.

［4］Levy R，Smith SD，Yusuf K，et al.Trophoblast apoptosis from pregnancies complicated by fetal growth restriction is associated with enhanced p53 expression［J］.Am J Obstet Gynecol，2002，186(5):1056-1061.

［5］De Falco M，De luca L，Acanfora F，et al.Alteration of the Bcl-2:Bax ratio in the placeta as pregnancy proceeds［J］.Histochem J，2001，33(7):421-425.

［6］Smith SC，Baker PN.Placetal apoptosis is increased in postterm pregnan-cies［J］.British J Obstetrics Gynaecology，1999，106:861-862.

［7］Shiozaki AKataoka K，Fujimura M，Yuki H，et al.Survivin inhibits apoptosis in cytotrophoblasts［J］.Placenta，2003，24(1):65-76.

(收稿日期：2008-03-16 修回日期：2008-06-11)

(編輯：潘明志 英文審校：鐘京梓)