高效液相色譜法測定甲磺酸培氟沙星注射液的含量

文章編號：1008-6919（2007）09-0144-02中圖分類號:R917文獻標識碼：A【實驗研究】

[摘要]目的：建立甲磺酸培氟沙星注射液的含量測定方法。方法采用HPLC法，結果甲磺酸培氟沙星在4~40μg?ml-1濃度范圍內，峰面積積分值與濃度呈良好的線性關系；平均回收率為99.65%。結論本方法簡便、快速、結果準確可靠。

關鍵詞：高效液相色譜法（HPLC） 甲磺酸培氟沙星 含量測定

1 儀器與試藥

1.1 儀器：日本島津LC—10ATvp高效液相色譜儀，SPD—10Avp紫外檢測器，N2000色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究所），定量環20μl，日本島津UV—260紫外分光光度計，北京賽多利斯天平有限公司BP211D電子分析天平。

1.2 試藥：甲磺酸培氟沙星對照品（宜昌人福藥業有限責任公司提供，含量：99.6%，批號：020101）。磷酸、三乙胺為分析純，乙腈為色譜純，水為重蒸餾水。甲磺酸培沙星注射液：批號為A、B、C三批。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：LunaC18(250mm×4.6mm，5μm)；流動相：0.025mol? L-1磷酸溶液（用三乙胺調節pH值至3.0±0.1）—乙腈(87:13)；流速：0.7ml?min-1;檢測波長：278nm；柱溫：室溫。定量進樣環為20μl。在此色譜條件下，甲磺酸培氟沙星的保留時間為10.33分鐘。理論板數為9979。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的甲磺酸培氟沙星對照品40mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成儲備液（每1ml含0.4mg）。精密吸取儲備液5ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備

精密吸取樣品溶液適量（約相當于甲磺酸培氟沙星80mg），置200ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對照溶注入的制備

按處方比例稱取缺甲磺酸培氟沙星的其他輔料，照甲磺酸培氟沙星注射液的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.5 干擾試驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液在上述色譜條件下分別注入液相色譜儀，結果供試品色譜圖中與對照品有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間無吸收峰，無干擾。證明本法可行，結果見圖。

2.6 線性關系考察

精密吸取對照品儲備液（每1ml含0.4mg）各1、2.5、5、7.5、10ml分別置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下進行測定，以峰面積A對照品濃度C作線性回歸。結果回歸方程為：A=1.172×105C—6.763×104，r=0.9999。表明甲磺酸培氟沙星在4~40μg?ml-1范圍內呈良好的線性關系。

2.7 精密度試驗

取對照品溶液重復進樣5次，測得甲磺酸培氟沙星峰面積的相對標準偏差（RSD）為0.39%（n=5）。

2.8 重復性試驗取樣品5份，分別測定含量，相對偏差RSD為0.17%（n=5）。

2.9 穩定性試驗取同一份樣品，按“2.3”項下方法操作，每間隔1小時進樣1次，結果表明，在12h內溶液穩定，甲磺酸培氟沙星峰面積的RSD為0.72%。

2.10 回收率試驗

采用加樣回收試驗，精密吸取已測得含量的樣品溶液適量（約相當于甲磺酸培氟沙星400mg），置1000ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5份，每份50ml，置100ml量瓶中，精密加入一定量的甲磺酸培氟沙星對照品，振搖使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，按供試品制備項下操作。在上述色譜條件下分別測定，測得甲磺酸培氟沙星的平均回收率為99.65%（n=5）;RSD=0.44%。

2.11樣品測定

按上述對照品溶液和供試品溶液的制備方法，及色譜條件測定峰面積，以外標法計算含量，批號為A、B、C，并把測得結果與紫外法比較，結果沒有顯著性差異，P＞0.05，結果見表2。

3 討論

3.1檢測波長的選擇精密吸取對照品儲備液（每1ml含0.4mg）1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，以流動作空白，在紫外區掃描，結果甲磺酸培氟沙星在278.4nm處有最大吸收，故278nm作為檢測波長。

3.2流動相的選擇

3.2.1流動相的pH不變，調乙腈濃度為5%、10%、13%、15%、20%、30%結果表明，13%乙腈分離效果好。和前面的雜質峰的分離度達到2.0。

3.2.2 pH對色譜行為的影響，保持流動相中乙腈的濃度不變，0.025mol?L-1磷酸溶液，用三乙胺調節pH為2.7、3.0、3.1、3.2、3.8、4.5，結果pH3.0±0.1時，分離效果好，拖尾因子為1.18。根據以上試驗結果，按分離的要求，優選流動相的組成為0.025 mol?L-1磷酸溶液（用三乙胺調節pH值至3.0±0.1）—乙腈（87：13）。

參考文獻

1中華人民共和國衛生部標準[S].WS—299（X-198）—95.