五味子多糖的抗突變作用研究

摘 要 目的：研究五味子多糖對環磷酰胺(CP)致小鼠微核率、染色體畸變率改變的影響，以探討其對突變的拮抗作用。方法：50只小鼠隨機分成5組，連續7 d給予不同劑量的五味子多糖，于第8天給予環磷酰胺，之后取骨髓常規制片，光學顯微鏡觀察計數微核和染色體個數。結果：五味子多糖可抑制微核率；還可降低染色體畸變率。結論：五味子多糖具抗突變作用。

關鍵詞 五味子多糖 抗突變 微核 染色體

中圖分類號：R286

文獻標識碼：A

文章編號：1006-1533(2007)10-0462-02

A study on anti-mutation effect of Schisandra Chinensis polysaccharide

Chen Wenjing，Wang Yanjie，Ji Yubin

(Life Science and Enviromental Science Research Center of Haerbin Commercial University，Haerbin 150076)

ABSTRACT Objective： To study the influence of Schisandra Chinensis polysaccharide on changes in micronucleus frequencies and chromosome aberration rate induced by cyclophosphamide in mice，to explore its inhibitory effects against mutation.Methods： Fifty mice were randomly divided into 5 groups.Schisandra Chinensis polysaccharide was administered at different dosages for 7 days.Cyclophosphamide was injected on the 8th day.The bone marrow smear was observed under light microscope to count the number of micronucleus and chromosome.Results： Schisandra Chinensis polysaccharide inhibited micronucleus frequencies and decreased chromosome aberration rate.Conclusion： Schisandra Chinensis polysaccharide has anti-mutation effects.

KEY WORDS Schisandra Chinensis polysaccharide； anti-mutation； micronucleus； chromosome

隨著社會的發展，人類平均壽命有了很大的提高，而各種疾病成為影響人類壽命的重要因素，其中，腫瘤疾病發病率更是日益增高。腫瘤的形成與人體正常細胞和染色體的突變有密切關系，因此，應用抗突變藥物來降低人體自身正常細胞和染色體的突變率，對于腫瘤的防治有著深遠意義^[1]。中藥抗突變的作用已經得到了許多學者的認同，因此，中藥篩選抗突變劑有著廣闊的前景。五味子作為傳統中藥，記載于《神農本草經》中，被列為上品。五味子盛產于我國東北地區，作為道地藥材，北五味子的研究開發也受到廣泛的關注。已有資料表明，五味子具有降低血清谷丙轉氨酶、增強免疫、抗衰老和抗癌等多方面藥理作用，目前己引起國內外醫藥工作者高度重視^[2]，其主要成分五味子多糖，具有抗腫瘤和免疫增強作用。因此，筆者通過研究五味子多糖的抗突變作用，進一步探討其抗腫瘤作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

昆明種小鼠共100只，雌雄各半，體重18~22 g，由黑龍江中醫藥大學動物中心提供(黑動字第P00101006號)。

1.1.2 試劑

五味子粗多糖：由黑龍江中醫藥大學生物教研室自提。環磷酰胺注射劑：上海華聯制藥有限公司生產，批號：H31021703。生理鹽水：上海試劑二廠提供，批號：040809。秋水仙素：上海國藥集團化學試劑有限公司提供，批號：F20040408。

1.2 方法

1.2.1 分組

將小鼠100只分成兩批，每批各50只，分別供微核實驗和染色體畸變實驗使用。將兩批小鼠各50只均隨機分為5組，每組雌雄各5只。A組為空白對照組(生理鹽水組)；B組、C組、D組分別為五味子多糖高劑量組(40 mg/kg)、中劑量組(20 mg/kg)及低劑量組(10 mg/kg )；H組為環磷酰胺對照組(40 mg/kg)。

1.2.2 實驗方法

1)微核實驗：A、B、C、D組第1～6天分別腹腔注射生理鹽水或五味子多糖各劑量；H組第1～5天腹腔注射生理鹽水，第6天腹腔注射環磷酰胺；第7天A組注射生理鹽水，B、C、D組先按照五味子多糖各劑量組給藥，然后B、C、D、H組一起同時注射環磷酰胺，6 h后，頸椎脫臼法處死所有實驗動物。取其雙側股骨，用75%乙醇浸泡的紗布剔除肌肉，剪斷肌骨，以生理鹽水沖洗骨髓細胞，常規制片^[3]，每只小鼠制3張涂片，并編號，自然晾干，甲醇固定，1∶9 Giemsa染色、油鏡觀察。每只動物計數1 000個嗜多染紅細胞(PCE)，并記錄出現微核細胞數，各組數據以 ±s表示，數據用SPSS 11.0軟件處理。樣本比較采用方差檢驗，并計算抑制率。抑制率=〔(環磷酰胺對照組出現數-試驗組出現數)/環磷酰胺對照組出現數〕×100%。

2)染色體畸變實驗： 具體給藥方法基本與微核試驗相同，最后注射完環磷酰胺后，2 h后再注射秋水仙素。然后處死小鼠，取其雙側股骨，用75%乙醇浸泡的紗布剔除肌肉，剪斷肌骨，用注射器吸生理鹽水沖洗骨髓細胞，沖出骨髓于離心管中，以1 000 r/min的速度離心10 min，去上清。低滲，固定，再離心，常規制片，10%Giemsa染色液染色，油鏡觀察。每只動物計數50～100個中期分裂細胞，記錄染色體結構異常和數目異常的細胞。各組數據以±s表示，數據用SPSS 11.0軟件處理，樣本比較采用方差檢驗。染色體畸變率(%)=染色體畸變總數/分析染色體的總數×100%。

2 結果

五味子多糖各劑量組對環磷酰胺誘導的小鼠骨髓微核率有抑制作用。與環磷酰胺對照組比較，高、中、低劑量組都有非常顯著性差異(P<0.01)，詳見表1。五味子多糖對環磷酰胺誘導小鼠骨髓染色體畸變率有抑制作用。與環磷酰胺對照組比較，高劑量組有非常顯著性差異，P<0.01；中劑量組有顯著性差異，P<0.05，詳見表2。

3 討論

對生物體有害的物質往往通過對遺傳物質的損傷而成為誘變劑，用遺傳物質受損程度判斷有害物毒性是當前靈敏度比較高的常規手段，而相應判斷一種物質是否有減毒作用(即抗誘變作用)則看該物質能否減少誘變物對遺傳物質的損傷。據此原理，本實驗以氮芥類烷化劑環磷酰胺誘導出現微核的小鼠骨髓嗜多染紅細胞數目和染色體畸變率為指標，觀察五味子多糖的抗突變作用。本實驗中，環磷酰胺的誘變作用使小鼠骨髓中的中幼紅細胞失核從而誘導微核的產生；對于骨髓細胞中的染色體造成了DNA的損傷，從而導致了染色體的畸變。本實驗的結果表明，五味子多糖高(40 mg/kg)、中(20 mg/kg)、 低(10 mg/kg)劑量組對于環磷酰胺誘導的微核率都有抑制作用；對小鼠骨髓染色體畸變有抑制作用。其機理可能是五味子多糖通過提高機體的免疫功能，幫助機體快速修復誘變劑引起的遺傳損傷。但是其具體的機制還需要通過進一步深入的研究來探討說明。

參考文獻

1 中華本草編委會編.中華本草(第二冊)[M].第6卷.上海：上海科學技術出版社，1999： 902.

2 劉筱虹，王佛華.五味子的藥理[J].河北中醫藥學報，1999，14(2)：35-36.

3 秦椿華主編.化學物致突變致癌檢測技術[M].烏魯木齊：新疆科技衛生出版社，1996：74.

(收稿日期：2007-05-18)