白族藥西歸中阿魏酸的含量測定

摘要：目的：建立高效液相色譜法測定白族藥西歸中阿魏酸的含量。方法：色譜柱為Agilent ZORBA SB-C₁₈(4.6×150mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇：0.1％磷酸水溶液(30:70)，流速為1.0ml／min，檢測波長為320nm，柱溫為30℃。結(jié)果：阿魏酸在0.0202～0.202ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=3089.3C+3.8794(r=0.9999)，加樣平均回收率為99.66％，RSD為1.06％。結(jié)論：本法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；西歸；阿魏酸

中圖分類號(hào)；R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-2349(2007)12-0029-02

西歸(seselopsis)是傘形科屬植物西藏凹乳芹(Vicatiathibetica deBoiss)的根，凹乳芹屬植物全球約5種，產(chǎn)于印度、巴基斯坦、尼泊爾和中國，在中國主要分布于云南西北部、四川西部及西藏等地，在云南大理有少量栽培。在滇西北及川西，民間用它作中藥當(dāng)歸的代用品，稱為西歸(大理)、獨(dú)腳當(dāng)歸(馬爾康)。據(jù)研究報(bào)道西歸中化學(xué)成分有阿魏酸、傘形花內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯、芹菜素、胡蘿卜苷等，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明西歸與人參一樣具有明顯抗疲勞、抗缺氧和耐熱作用，具有較高的開發(fā)價(jià)值。西歸中有關(guān)成分的含量測定未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對西歸中阿魏酸的含量進(jìn)行測定，為進(jìn)一步建立西歸藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀，包括G1315A／B DAD檢測器，G1313A ALS自動(dòng)進(jìn)樣器，Agilent 1100色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；梅特勒電子天平AE240(瑞士)；SZ-97自動(dòng)三重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；DZKW-4水浴鍋(上海科析實(shí)驗(yàn)儀器廠)；甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、水(重蒸餾純凈水)、阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)、西歸直接從產(chǎn)地收集，并由大理學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室馬曉匡教授鑒定。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBASB—C₁₈(4.6×150mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(體積比為30:70)，流速：1.0ml／min，柱溫：30℃，檢測波長：320nm.進(jìn)樣量:10ul。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的阿魏酸對照品5.05mg。置50ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，作為儲(chǔ)備液。

2.3提取溶劑的選擇 精密稱取5份樣品，每份約1g，分別精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、乙醚10ml，稱重，超聲提取30min，冷卻補(bǔ)重，按2.1項(xiàng)條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表1。

從上表可以看出甲醇提取率最高，故采用甲醇。

2.4提取方法選擇 根據(jù)2.3項(xiàng)的結(jié)果采用甲醇作提取溶劑，稱取樣品3份，每份約1g，分別用回流提取、超聲提取、索氏提取進(jìn)行考察，結(jié)果見表2。

從上表可以看出回流提取效果最佳，故采用回流提取法。2.5提取時(shí)間的選擇根據(jù)2.3的結(jié)果采用甲醇作提取溶劑，稱取樣品5份，每份約1g，用回流提取法提取1h、1.5h、2h、2.5h、3h，結(jié)果見表3。

從上表可以看出2h后，提取率不再發(fā)生改變，所以采用2h提取西歸中的阿魏酸比較合適。

2.6供試品溶液的制備 精密稱取研磨成80～100目的西歸試樣1g，于100ml磨口燒瓶中，精密加入甲醇10ml，加熱回流2h，放冷至室溫，甲醇補(bǔ)重，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾.即為供試品溶液。

2.7線性關(guān)系的考察 取2.2項(xiàng)中制備好的阿魏酸對照品儲(chǔ)備液2ml于10ml容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，即得質(zhì)量濃度為0.0202mg／ml的對照品溶液。按2.1項(xiàng)色譜實(shí)驗(yàn)條件.取0.0202mg／ml的對照品溶液，2、4、8、10、14、16、20u1分別進(jìn)3次，測定阿魏酸的峰面積值，以進(jìn)樣量(ug)為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程：y=3069.3X+3.8794，r=0.9999，結(jié)果表明進(jìn)樣量在0.0404～0.404ug范圍之間線性關(guān)系良好。

2.8精密度試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取阿魏酸對照品溶液(0.0202mg／m1)，按選擇的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，其峰面積的RSD為0.31％，表明儀器精密度較好。取同一樣品液，每隔1h進(jìn)樣1次，每次10ul，測定峰面積，結(jié)果表明樣品液在6h內(nèi)穩(wěn)定(n=6)，阿魏酸峰面積的RSD為1.63％。

2.9重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取烘干至恒重的西歸粉末(100目)5份，每份1g。按“供試品溶液的制備”進(jìn)行平行提取，在選定色譜條件下測定阿魏酸的含量，RSD為1.80％，分析結(jié)果表明重現(xiàn)性較好。

2.10回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的西歸粉末(100目)5份，分別精密加入一定量的阿魏酸儲(chǔ)備液，照2.5項(xiàng)下方法操作，進(jìn)行回收率測定，結(jié)果見表4。

2.11樣品的測定 取六批樣品制備成供試液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，按外標(biāo)法計(jì)算阿魏酸的含量。西歸中阿魏酸含量為124.58ug／g(n=2)。西歸與阿魏酸對照品的HPLC色譜圖見圖1。

3 討論

有關(guān)西歸的研究報(bào)道很少，其化學(xué)成分的含量測定均未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過提取溶劑、提取方法、提取時(shí)間的選擇，確立西歸中阿魏酸的最佳提取條件為10倍量甲醇回流提取2h。

由于西歸中阿魏酸、芹菜素等都含有酚羥基，具有一定酸性，易電離，參照有關(guān)文獻(xiàn)，流動(dòng)相中水相采用0.1％的磷酸水溶液，可以減少拖尾，改善峰形，且分離效果好。本試驗(yàn)曾用乙腈：水(0.1％磷酸)15:85進(jìn)行測定，經(jīng)試驗(yàn)，以甲醇：水(0.1％磷酸)30:70為流動(dòng)相時(shí)分離效果最佳。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法可以用于西歸藥材中阿魏酸的含量檢測和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制，并且具有操作簡便、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)。