不同劑量凱西萊治療肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ褪蟮膶嶒炑芯?/h1>
2007-01-01 00:00:00徐國存蔡永亮徐志樹陳懷珍王艷昕徐磊
中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志 2007年6期
摘要：目的 探討不同劑量凱西萊對肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ褪筱~代謝變化的影響。方法 用銅負(fù)荷飲食法復(fù)制肝豆?fàn)詈俗冃约膊游锬Ｐ停瑢⒛Ｐ痛笫蠓譃?個治療組與1個模型組，3個治療組分別給予50 mg／(kg·d)、100mg／(kg·d)、200 mg／(kg·d)凱西萊(靜脈輸注)。觀察各組大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白、白蛋白、肝銅、24h尿銅變化情況。并觀察病死率及生長發(fā)育情況。結(jié)果 各治療組病死率明顯降低，100mg／kg組、200 mg／(kg·d)組肝銅含量較模型組明顯降低(P<0．05或P<0．01)，24 h尿銅明顯升高。結(jié)論 凱西萊能降低銅負(fù)荷大鼠肝銅含量，降低其病死率。
關(guān)鍵詞：凱西萊；銅負(fù)荷模型；肝豆?fàn)詈俗冃裕焊毋~
中圖分類號：R589 R285．5
文獻標(biāo)識碼：A
文章編號：1672－1349(2007)06—0508—02
凱西萊又名硫普羅寧(tiopronin，MPO)，是一種新型的含巰基甘氨酸類藥物，其化學(xué)名為N－(2巰基丙酰基)甘氨酸，凱西萊首先作為改善肝功能藥物應(yīng)用于臨床，后義發(fā)現(xiàn)有絡(luò)合重金屬的作用，國外長期使用證實該藥具有療效確切、安全可靠等特點。凱西萊可能對銅代謝障礙疾病肝豆?fàn)詈俗冃?HLD)的過量銅沉積有治療作用。本實驗探討了不同劑量凱西萊對肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ褪筱~代謝變化的影響，獲得了預(yù)期的效果。
1材料與方法
1．1動物 純系健康雄性Wistar大鼠60只，體重220g～280g，購于安徽醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實驗動物中心。動物房為普通級飼養(yǎng)室，實驗前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。
1．2藥品、試劑與儀器凱西萊：新誼藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：0．1g，每盒12片，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H41020799。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白、白蛋白測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。去離子水：安徽大東方藥業(yè)提供。硫酸銅、硝酸：優(yōu)級純，合肥大藥房提供。原子吸收分光光度計：北京WFX－1A型原子吸收分光光度計。721型分光光度計：上海第三分析儀器廠。
1．3動物分組與治療 第1步：取Wistar雄性大鼠60只，體重為220 g～280 g，1周后開始造模。隨機取10只作為正常組，另50只喂飼含硫酸銅1g／kg的粉狀飼料和0．185％硫酸銅的去離子水造模4周(銅負(fù)荷飲食)。第2步：由于在第1步造模過程中造模組有8只大鼠死亡，故第2步給予如下分組與治療：正常組喂普通飼料，其余繼續(xù)給予銅負(fù)荷飲食。正常組10只；模型組12只；50 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊50mg／(kg·d)；100 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊100 mg／(kg·d)；200 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊200 mg／(kg·d)；第8周結(jié)束，在禁食18h后處死大鼠，取血測ALT、AST、總蛋白、白蛋白、肝組織標(biāo)本測肝銅。大鼠處死前5d置代謝籠連續(xù)留取3天的24 h尿液，做24h尿銅檢查。
1．4觀察指標(biāo)與測定方法 實驗動物一般情況觀察：實驗動物的飲食、毛色、活動度、排泄物、生長情況。血ALT、AST、總蛋白、白蛋白測定，按試劑盒說明書操作；肝組織標(biāo)本先用生理鹽水反復(fù)洗凈，再用干凈濾紙吸干并秤取濕重500mg，用濃硝酸(分析純)10mL低溫加熱進行消化，等組織完全溶解至黃色澄清透明后，采用原子吸收分光光度計測量、火焰法測定銅含量。24h尿銅測定：單只置于代謝籠，收集24h尿液，搖勻后，用量筒準(zhǔn)確量出尿液體積，并記錄總毫升數(shù)，測定時取2 mL尿液加0．1 mL H2SO4混勻待測。采用原子吸收分光光度計測量、火焰法測定。
1．5統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPESS 11．0軟件包，不同組間兩兩比較時用t檢驗。
2結(jié)果
2．1 實驗動物觀察 在造模過程中大鼠對飼料的消耗及飲水量明顯減少，約為正常組的1／2，活動減少，毛色欠光澤，在前4周造模過程中造模組相繼有8只鼠死亡，正常組無死亡。在后4周模型組又死亡5只，50mg／kg組死亡2只，200 mg／kg組死亡2只，100 mg／kg組無死亡且狀態(tài)較為活躍，毛色有光澤，與正常組無二，采食及飲水量明顯增加。造模及治療過程中未發(fā)現(xiàn)大鼠腹瀉、溶血、黃疸、貧血等表現(xiàn)。治療前后各組間體重差異并不明顯，各組內(nèi)大鼠體重均有明顯增長，各組增長幅度無明顯差異。
2．2各組動物血清ALT、AST總蛋白、白蛋白變化情況 治療后血清ALT、AST模型組較正常組升高(P<0．05)，ALT模型組與凱西萊各組比較無明顯差異；100mg／kg組、200mg／kg組AST較模型組、50mg／kg組明顯降低(P<0．05或P<0．01)。本實驗示模型組較正常組血清總蛋白無統(tǒng)計學(xué)意義，白蛋白有明顯降低(P<0．01)；200 mg／kg組較50 mg／kg組、100 mg／kg組不論總蛋白還是白蛋白均減少(P<0．05)；100mg／kg組與模型組比較白蛋白升高(P<0．05)。詳見表1。
2．3各組動物肝組織銅、24h尿銅變化情況 模型組肝銅較正常組明顯升高(P<0．01)，凱西萊各組隨劑量增大肝銅含量減少(P<0．05或P<0．01)；50 mg／kg組與模型組無明顯差異，100 mg／kg組、200 mg／kg組較模型組降低(P<0．05)。24h尿銅：模型組較正常組升高(P<0．05)；凱西萊各組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)；50 mg／kg組，100 mg／kg組、200 mg／kg組較模型組升高(P
與模型組比較，1)P<0．05，2)P<0．01；與正常組比較，3)P<0．05．4)P<0．01
3討論
肝豆?fàn)詈俗冃允且环N常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙疾病。銅過量沉積于腦、肝、腎臟等臟器的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。本病主要臨床表現(xiàn)為銅代謝障礙引致的肝硬化、腦基底神經(jīng)核尤其是豆?fàn)詈俗冃浴⒛I功能損害及角膜色素環(huán)(K—F環(huán))形成等。銅過量沉積是主要原因。多余的銅毒性很強，并且可作為氧化物前體促進自由基和有害的脂及蛋白氧化物形成。蓄積的銅損害肝細(xì)胞，引起慢性肝炎。最初多余的銅蓄積在肝中而引起肝細(xì)胞損傷，隨著肝中銅量的增加，銅被釋放入循環(huán)并在其他器官中蓄積，繼而銅介導(dǎo)的氧化開始損傷到其他器官、系統(tǒng)，包括腦、腎。雖然目前沒有任何一種動物模型可以完全復(fù)制HLD的全部臨床特征。但可以確定的是銅負(fù)荷飲食可在大鼠肝、腎組織產(chǎn)生類似于HLD的銅沉積。
本試驗表明，凱西萊可明顯降低肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ痛笫笏劳雎剩瑴p少其肝銅含量，增加24h尿銅排泄，升高白蛋白，降低轉(zhuǎn)氨酶。凱西萊通過提供巰基，并活化體內(nèi)超氧化物歧化酶，化解有害的自由基，增強肝臟解毒功能，對抗各種肝損傷，穩(wěn)定細(xì)胞膜和線粒體膜，起到保護肝臟的作用。本實驗凱西萊治療組白蛋白較模型組升高，與文獻報道一致，說明凱西萊通過酶水解生成甘氨酸參與嘌呤類核酸的合成。多篇文獻證明凱西萊降低AST療效確切，本實驗也證明凱西萊可減輕由銅沉積所致的肝功能損傷。對重金屬和藥物有解毒作用。巰基是蛋白質(zhì)和酶的正常成分，在體內(nèi)主要以半胱氨酸形式存在。重金屬中毒時，常通過與金屬酶中蛋白質(zhì)的巰基結(jié)合，從而使含巰基酶因失去這種活性巰基而失活，當(dāng)有外源性巰基進入時，一方面可直接與重金屬絡(luò)合，另一方面可與失活的含巰基酶因置換而使金屬酶恢復(fù)活性。含巰基的凱西萊降低了銅負(fù)荷鼠肝銅蓄積量，說明凱西萊有促進肝臟沉積銅排出的作用，從尿排出是其排泄途徑之一。給予大鼠100 mg／(kg·d)的凱西萊灌胃對減少銅負(fù)荷模型鼠肝銅含量和死亡率有顯著作用，且未見不良反應(yīng)，是較為合適的劑量。凱西萊各組肝銅含量較模型組低但較正常組高，有明顯差異，說明短時間難以將沉積于肝臟的銅完全絡(luò)合。
摘要：目的 探討不同劑量凱西萊對肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ褪筱~代謝變化的影響。方法 用銅負(fù)荷飲食法復(fù)制肝豆?fàn)詈俗冃约膊游锬Ｐ停瑢⒛Ｐ痛笫蠓譃?個治療組與1個模型組，3個治療組分別給予50 mg／(kg·d)、100mg／(kg·d)、200 mg／(kg·d)凱西萊(靜脈輸注)。觀察各組大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白、白蛋白、肝銅、24h尿銅變化情況。并觀察病死率及生長發(fā)育情況。結(jié)果 各治療組病死率明顯降低，100mg／kg組、200 mg／(kg·d)組肝銅含量較模型組明顯降低(P<0．05或P<0．01)，24 h尿銅明顯升高。結(jié)論 凱西萊能降低銅負(fù)荷大鼠肝銅含量，降低其病死率。
關(guān)鍵詞：凱西萊；銅負(fù)荷模型；肝豆?fàn)詈俗冃裕焊毋~
中圖分類號：R589 R285．5
文獻標(biāo)識碼：A
文章編號：1672－1349(2007)06—0508—02
凱西萊又名硫普羅寧(tiopronin，MPO)，是一種新型的含巰基甘氨酸類藥物，其化學(xué)名為N－(2巰基丙酰基)甘氨酸，凱西萊首先作為改善肝功能藥物應(yīng)用于臨床，后義發(fā)現(xiàn)有絡(luò)合重金屬的作用，國外長期使用證實該藥具有療效確切、安全可靠等特點。凱西萊可能對銅代謝障礙疾病肝豆?fàn)詈俗冃?HLD)的過量銅沉積有治療作用。本實驗探討了不同劑量凱西萊對肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ褪筱~代謝變化的影響，獲得了預(yù)期的效果。
1材料與方法
1．1動物 純系健康雄性Wistar大鼠60只，體重220g～280g，購于安徽醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所實驗動物中心。動物房為普通級飼養(yǎng)室，實驗前先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。
1．2藥品、試劑與儀器凱西萊：新誼藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：0．1g，每盒12片，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H41020799。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總蛋白、白蛋白測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。去離子水：安徽大東方藥業(yè)提供。硫酸銅、硝酸：優(yōu)級純，合肥大藥房提供。原子吸收分光光度計：北京WFX－1A型原子吸收分光光度計。721型分光光度計：上海第三分析儀器廠。
1．3動物分組與治療 第1步：取Wistar雄性大鼠60只，體重為220 g～280 g，1周后開始造模。隨機取10只作為正常組，另50只喂飼含硫酸銅1g／kg的粉狀飼料和0．185％硫酸銅的去離子水造模4周(銅負(fù)荷飲食)。第2步：由于在第1步造模過程中造模組有8只大鼠死亡，故第2步給予如下分組與治療：正常組喂普通飼料，其余繼續(xù)給予銅負(fù)荷飲食。正常組10只；模型組12只；50 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊50mg／(kg·d)；100 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊100 mg／(kg·d)；200 mg／kg組10只，靜脈輸注凱西萊200 mg／(kg·d)；第8周結(jié)束，在禁食18h后處死大鼠，取血測ALT、AST、總蛋白、白蛋白、肝組織標(biāo)本測肝銅。大鼠處死前5d置代謝籠連續(xù)留取3天的24 h尿液，做24h尿銅檢查。
1．4觀察指標(biāo)與測定方法 實驗動物一般情況觀察：實驗動物的飲食、毛色、活動度、排泄物、生長情況。血ALT、AST、總蛋白、白蛋白測定，按試劑盒說明書操作；肝組織標(biāo)本先用生理鹽水反復(fù)洗凈，再用干凈濾紙吸干并秤取濕重500mg，用濃硝酸(分析純)10mL低溫加熱進行消化，等組織完全溶解至黃色澄清透明后，采用原子吸收分光光度計測量、火焰法測定銅含量。24h尿銅測定：單只置于代謝籠，收集24h尿液，搖勻后，用量筒準(zhǔn)確量出尿液體積，并記錄總毫升數(shù)，測定時取2 mL尿液加0．1 mL H2SO4混勻待測。采用原子吸收分光光度計測量、火焰法測定。
1．5統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPESS 11．0軟件包，不同組間兩兩比較時用t檢驗。
2結(jié)果
2．1 實驗動物觀察 在造模過程中大鼠對飼料的消耗及飲水量明顯減少，約為正常組的1／2，活動減少，毛色欠光澤，在前4周造模過程中造模組相繼有8只鼠死亡，正常組無死亡。在后4周模型組又死亡5只，50mg／kg組死亡2只，200 mg／kg組死亡2只，100 mg／kg組無死亡且狀態(tài)較為活躍，毛色有光澤，與正常組無二，采食及飲水量明顯增加。造模及治療過程中未發(fā)現(xiàn)大鼠腹瀉、溶血、黃疸、貧血等表現(xiàn)。治療前后各組間體重差異并不明顯，各組內(nèi)大鼠體重均有明顯增長，各組增長幅度無明顯差異。
2．2各組動物血清ALT、AST總蛋白、白蛋白變化情況 治療后血清ALT、AST模型組較正常組升高(P<0．05)，ALT模型組與凱西萊各組比較無明顯差異；100mg／kg組、200mg／kg組AST較模型組、50mg／kg組明顯降低(P<0．05或P<0．01)。本實驗示模型組較正常組血清總蛋白無統(tǒng)計學(xué)意義，白蛋白有明顯降低(P<0．01)；200 mg／kg組較50 mg／kg組、100 mg／kg組不論總蛋白還是白蛋白均減少(P<0．05)；100mg／kg組與模型組比較白蛋白升高(P<0．05)。詳見表1。
2．3各組動物肝組織銅、24h尿銅變化情況 模型組肝銅較正常組明顯升高(P<0．01)，凱西萊各組隨劑量增大肝銅含量減少(P<0．05或P<0．01)；50 mg／kg組與模型組無明顯差異，100 mg／kg組、200 mg／kg組較模型組降低(P<0．05)。24h尿銅：模型組較正常組升高(P<0．05)；凱西萊各組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)；50 mg／kg組，100 mg／kg組、200 mg／kg組較模型組升高(P 與模型組比較，1)P<0．05，2)P<0．01；與正常組比較，3)P<0．05．4)P<0．01 3討論 肝豆?fàn)詈俗冃允且环N常染色體隱性遺傳性銅代謝障礙疾病。銅過量沉積于腦、肝、腎臟等臟器的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。本病主要臨床表現(xiàn)為銅代謝障礙引致的肝硬化、腦基底神經(jīng)核尤其是豆?fàn)詈俗冃浴⒛I功能損害及角膜色素環(huán)(K—F環(huán))形成等。銅過量沉積是主要原因。多余的銅毒性很強，并且可作為氧化物前體促進自由基和有害的脂及蛋白氧化物形成。蓄積的銅損害肝細(xì)胞，引起慢性肝炎。最初多余的銅蓄積在肝中而引起肝細(xì)胞損傷，隨著肝中銅量的增加，銅被釋放入循環(huán)并在其他器官中蓄積，繼而銅介導(dǎo)的氧化開始損傷到其他器官、系統(tǒng)，包括腦、腎。雖然目前沒有任何一種動物模型可以完全復(fù)制HLD的全部臨床特征。但可以確定的是銅負(fù)荷飲食可在大鼠肝、腎組織產(chǎn)生類似于HLD的銅沉積。 本試驗表明，凱西萊可明顯降低肝豆?fàn)詈俗冃阅Ｐ痛笫笏劳雎剩瑴p少其肝銅含量，增加24h尿銅排泄，升高白蛋白，降低轉(zhuǎn)氨酶。凱西萊通過提供巰基，并活化體內(nèi)超氧化物歧化酶，化解有害的自由基，增強肝臟解毒功能，對抗各種肝損傷，穩(wěn)定細(xì)胞膜和線粒體膜，起到保護肝臟的作用。本實驗凱西萊治療組白蛋白較模型組升高，與文獻報道一致，說明凱西萊通過酶水解生成甘氨酸參與嘌呤類核酸的合成。多篇文獻證明凱西萊降低AST療效確切，本實驗也證明凱西萊可減輕由銅沉積所致的肝功能損傷。對重金屬和藥物有解毒作用。巰基是蛋白質(zhì)和酶的正常成分，在體內(nèi)主要以半胱氨酸形式存在。重金屬中毒時，常通過與金屬酶中蛋白質(zhì)的巰基結(jié)合，從而使含巰基酶因失去這種活性巰基而失活，當(dāng)有外源性巰基進入時，一方面可直接與重金屬絡(luò)合，另一方面可與失活的含巰基酶因置換而使金屬酶恢復(fù)活性。含巰基的凱西萊降低了銅負(fù)荷鼠肝銅蓄積量，說明凱西萊有促進肝臟沉積銅排出的作用，從尿排出是其排泄途徑之一。給予大鼠100 mg／(kg·d)的凱西萊灌胃對減少銅負(fù)荷模型鼠肝銅含量和死亡率有顯著作用，且未見不良反應(yīng)，是較為合適的劑量。凱西萊各組肝銅含量較模型組低但較正常組高，有明顯差異，說明短時間難以將沉積于肝臟的銅完全絡(luò)合。
