GeneXpert 分子診斷技術在疑似結核感染患者中的應用價值分析

王怡悅 管桂波 陳紅丹

（1 龍泉市人民醫院檢驗科 浙江 龍泉 323700）

（2 龍泉市人民醫院藥劑科 浙江 龍泉 323700）

（3 龍泉市人民醫院內科 浙江 龍泉 323700）

肺結核是一種長期危害人類健康的傳染性疾病，該疾病主要由結核桿菌所引發，侵害人體健康。當人體感染肺結核后，如不及時治療或徹底治療則會給人類健康造成極大危害，甚至致呼吸衰竭或死亡[1]。肺結核主要通過呼吸道進行傳播，尤其是艾滋病患者和老年人等免疫力低下人群。早期診斷、及時治療是改善患者預后的關鍵，以往臨床診斷主要以結核菌培養、痰涂片為主，而該類方法的局限性在于痰液的標本，如果不是深部咳出的痰，或患者吐得是口水痰，唾沫，再加上技術的局限性，技術人員的主觀性，對結果的陽性率大大減低；且該方法檢測所需時間較長[2]。近年來，隨著臨床分子生物學技術的發展，GeneXpert 檢測技術得到快速發展和應用，GeneXpert 分子診斷技術只需2 小時就能出檢測結果，對患者和醫生都是一個福音[3]。本次研究為探討GeneXpert 分子診斷技術應用于臨床診斷結核病患者的效果。報告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年9 月—2020 年3 月于醫院治療且胸片提示感染的患者或痰培養為陰性又提示肺部感染的患者100 例。入選者獲悉研究相關內容，并簽署知情同意書，自愿參與研究，醫院倫理委員會批準。排除其他感染性疾病、血液系統疾病、精神疾病、肺部腫瘤等。男性55 例、女性45 例；年齡50 ～78 歲，平均為(63.7±3.7)歲。

1.2 檢測方法

采集研究對象痰液標本，并采用痰涂片法、GeneXpert 分子診斷技術、結核分枝桿菌分離培養檢測，此外，采用GeneXpert分子診斷技術和比例法藥敏試驗檢測利福平耐藥情況。

痰涂片法：采集研究對象痰液標本，然后進行涂片、染色、抗酸桿菌鏡檢。陽性：鏡檢下可見抗酸桿菌。

結核分枝桿菌分離培養：采集痰液標本1ml，然后根據說明書執行操作。

比例法藥敏試驗：對培養結果為陽性者采用比例法開展藥敏試驗，將待測菌制備成10-2g/L、10-4g/L 菌懸液，采用劃線法均勻接種到對照、含利福平的培養基表面，接種時盡量做到菌液分布均勻。于37℃環境下培養4 周，然后計算菌落數。

GeneXpert 分子診斷：GeneXpert 分子診斷儀器，留取患者痰液1ml，并放置于無菌試管中，然后加入消化液2ml，并渦旋振蕩20s，于室溫下靜置15min，再次加入2ml 處理液進行檢測。

1.3 觀察指標

對比不同檢查方法檢出陽性率和利福平耐藥檢出情況。

1.4 統計學方法

數據采用SPSS25.0統計學軟件分析處理，計數資料采用率（%）表示，行χ2檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 不同診斷方法檢出結核桿菌陽性情況

GeneXpert 分子診斷技術檢出結核分枝桿菌陽性率顯著高于痰涂片檢查方法，χ2=15.31，P=0.00；而與結核分枝桿菌分離培養相比較，無顯著差異（χ2=0.36，P=0.47）；見表1。

表1 不同診斷方法檢出結核桿菌陽性情況[n(%)]

2.2 GeneXpert 分子診斷技術檢出利福平耐藥率與比例法藥敏實驗結果比較

GeneXpert 分子診斷技術檢出利福平耐藥率與比例法藥敏實驗結果無顯著差異（χ2=0.57，P=0.39）；見表2。

表2 GeneXpert 分子診斷技術檢出利福平耐藥率與比例法藥敏實驗結果（n）

3.討論

長期以來，我國一直是結核病高負擔國家，隨著結核感染患者人數的增加，結核病耐藥情況也越發嚴重，這不僅增加患者痛苦，還給家庭、社會帶來極大的壓力和負擔，因此早期診斷、合理治療對改善患者病情和預后具有積極作用。肺結核是長期嚴重危害人群健康的慢性傳染病。由結核桿菌引起，主要侵害人體肺部，發生肺結核。肺結核在我國法定報告甲乙類傳染病中發病和死亡數排在第2 位。得了肺結核如發現不及時，治療不徹底，會對健康造成嚴重危害，甚至可引起呼吸衰竭和死亡，同時給患者和家庭帶來沉重的負擔。肺結核主要通過呼吸道傳播，人人都有可能被感染。艾滋病毒感染者、免疫力低下者、糖尿病病人、塵肺病人、老年人等更是容易發病的人群。因此急需一種更快速和更可靠的實驗室診斷方法輔助臨床的需求與診斷。各學者[4]認為早期診斷、合理治療是有效控制結核病的關鍵。現在目前檢測結核菌感染的手段主要是痰涂片，結核菌培養。它的局限性在于痰液的標本，如果不是深部咳出的痰，或患者吐得是口水痰，唾沫，再加上技術的局限性，技術人員的主觀性，對結果的陽性率大大減低。結核培養又因為結核菌自身分裂的時間限時，一般結果液體培養要7 ～8 天，固體培養要4 周，檢測結果無法滿足臨床，而GeneXpert 分子診斷技術只需2 小時就能出檢測結果，對患者、對醫生都是一個福音。

WHO 推薦使用Xpert MTB/RIF 試驗診斷肺結核，并選擇性的測試標本以診斷肺外結核。自2007 年以來，WHO 已批準了基于不同原理的結核病診斷技術，并在實驗室網絡體系的框架內為每種診斷技術明確了合適的應用定位。從本次研究結果來看，采用GeneXpert 分子診斷技術具有較好效果，且可達到與比例法藥敏試驗、分離樣本培養相當的效果。既往研究認為痰涂片培養陽性率在50%左右，而分離樣本培養陽性率在60%左右[5]。由此可見傳統診斷方法中存在較高誤診率，從而影響臨床治療方案的制定。本次所采用的GeneXpert 分子診斷技術是當前一種全新分子診斷技術，其可做到快速診斷。筆者分析認為GeneXpert 分子診斷技術主要是基于核酸擴增技術來設計，其根據rPoB 基因來設計5 對探針擴增81bp 利福平耐藥決定區，檢測核酸類型為DNA，因此具有較高診斷價值[6]。然本次研究中發現GeneXpert 分子診斷技術診斷陽性率并非100%，筆者分析認為GeneXpert 分子診斷技術在診斷過程中受人為因素和環境污染等因素影響，如制備菌液時出現交叉污染則可能會致菌落死亡，進而難以區別活菌與死菌，最終影響診斷陽性率。早期診斷和藥敏試驗對指導臨床制定治療方案具有重要意義，本次研究中發現GeneXpert 分子診斷技術可取得與比例法藥敏試驗相當的效果，但傳統藥敏試驗所需時間更長，因此對臨床治療造成不利影響[7-8]。而采用GeneXpert 分子診斷技術可更早掌握患者耐藥情況，有利于醫生盡早進行治療，從而控制耐藥結核病的傳播。

綜上所述，GeneXpert 分子診斷技術應用于臨床診斷結核感染具有較高診斷價值，可該方法快速，因此具有應用價值。