鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒鑒別診斷方法

楊旭東 王剛

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所161006）

鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒鑒別診斷方法

楊旭東 王剛

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所161006）

鵝細(xì)小病毒 （GPV）和番鴨細(xì)小病毒 （MDPV）分別是引起小鵝瘟和番鴨細(xì)小病毒病的病原，20世紀(jì)90年代初才認(rèn)識(shí)到番鴨細(xì)小病毒病是不同于小鵝瘟的獨(dú)立疾病。這兩種病嚴(yán)重危害水禽飼養(yǎng)業(yè)的傳染病，臨床上常在同一地區(qū)流行，甚至混合感染。雖然二者在大小理化特性等方面很相似，但疫苗交叉保護(hù)差，致病性明顯不同。番鴨細(xì)小病毒僅見番鴨發(fā)病；而小鵝瘟病毒既可感染鵝也可感染番鴨，近年來番鴨小鵝瘟的流行也逐漸增強(qiáng)。在臨床上用和常規(guī)的血清學(xué)方法很難將這兩種病毒區(qū)分，本文簡要介紹目前的一些主要鑒別診斷方法。

鵝細(xì)小病毒；番鴨細(xì)小病毒；鑒別診斷；方法

鵝細(xì)小病毒引起的小鵝瘟是一種傳播快、死亡率高、高度接觸性、急性或亞急性、敗血性傳染病主要侵害1～20日齡雛鵝和雛番鴨。以腸道栓塞為其特征性病變是嚴(yán)重危害養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展的重要傳染病之一。番鴨細(xì)小病毒引起的番鴨細(xì)小病毒病臨床上主要發(fā)生于1～3周齡雛番鴨以腹瀉軟腳喘氣為特征。在細(xì)小病毒成員中，二者同源性最高，在理化特性、流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化也非常相似，兩者的血清也有一定的交叉保護(hù)性，臨床上這2種細(xì)小病毒病常在同一地區(qū)流行，用常規(guī)的血清學(xué)檢測方法很難區(qū)分，鑒別診斷難度較大。

1 動(dòng)物感染試驗(yàn)

可采用易感雛鵝和易感雛番鴨作感染試驗(yàn)。對5日齡左右的易感雛鵝和5日齡左右的易感雛番鴨分別攻毒。若雛鵝和雛番鴨均發(fā)病死亡，并且有小鵝瘟特征性病變，是小鵝瘟病毒感染；若只引起雛番鴨發(fā)病死亡，則感染了番鴨細(xì)小病毒。還可用鵝或番鴨的胚胎以及組織細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行病毒分離，通過電鏡直接觀察或者通過抗血清中和試驗(yàn)來確定感染細(xì)胞內(nèi)是否有該種病毒。還建立了過氧化物酶技術(shù)、反向間接血凝試驗(yàn)及瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等，能夠?qū)Ψ蛛x病原進(jìn)行鑒定。

2 血清學(xué)試驗(yàn)

血清學(xué)診斷技術(shù)有很多，比如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、膠乳凝集試驗(yàn) （LPA）和膠乳凝集抑制試驗(yàn) （LAPI）等。其中瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)應(yīng)用較多，該方法可以對鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒進(jìn)行交叉反應(yīng)，缺點(diǎn)是特異性不強(qiáng)。相比較而言LPA和LAPI特異性強(qiáng)，而且操作方便和判斷直觀。交叉中和試驗(yàn)可以鑒別GPV和MDPV抗體。王永坤等采用交叉免疫轉(zhuǎn)印試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MDPV的多抗與MDPV、GPV都出現(xiàn)了兩條反應(yīng)帶VP2、VP3；GPV多抗和MDPV只有1條反應(yīng)帶VP3；與 GPV出現(xiàn) 3條反應(yīng)帶VP1、VP2、VP3；MDPV單抗僅識(shí)別MDPV和GPV的VP3，GPV單抗在識(shí)別GPV VP3和VP2的同時(shí)，還識(shí)別MDPV的VP3。說明MDPV和GPV的共同抗原主要在占整個(gè)衣殼蛋白比例大的VP3上，兩者的VP1和VP2存在差異。張?jiān)频扔肎PV Ep22株VP3蛋白旳原核表達(dá)產(chǎn)物作包被抗原建立ELISA方法，可特異性檢測出GPV和MDPV，特異性和靈敏度分別為91.8%、96.7%和90.2%、95.2%。

2.1 PCR—RFLP技術(shù)

萬春和等根據(jù)GenBank登錄的鵝細(xì)小病毒和番鴨細(xì)小病毒非結(jié)構(gòu)蛋白（NS）基因特征，研究設(shè)計(jì)1對特異性引物對GPV和MDPV基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。用EcoR I酶對GPV和MDPV特異性膠回收產(chǎn)物進(jìn)行酶切，建立了一種快速區(qū)別GPV和MDPV感染的PCR-RFLP（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性）檢測方法。

2.2 PCR技術(shù)

劉家森等、季艷菊等根據(jù)GPV和MDPV基因組的非同源序列，分別設(shè)計(jì)了針對GPV和MDPV的引物但所設(shè)計(jì)引物僅能擴(kuò)增特定病毒的核酸片段，對其他病毒核酸沒有擴(kuò)增。鮮思美等分別設(shè)計(jì)合成針對GPV非結(jié)構(gòu)蛋白（NS）和MDPV NS2-VP1基因片段的2對引物GPVU/L和MDPVU/L，將GPV和MDPV提取核酸混合后作為模板，建立的雙重PCR可用于GPV和MDPV的鑒別診斷和聯(lián)合檢測。范文勝等根據(jù)GenBank登錄的番鴨細(xì)小病毒（MDPV）和鵝細(xì)小病毒 （GPV）基因組的同源序列區(qū)域結(jié)構(gòu)基因REP以及非同源序列區(qū)域結(jié)構(gòu)基因VP3，設(shè)計(jì)了2對引物，建立了一種鑒別診斷MDPV和GPV的二重PCR方法。

2.3 基因芯片檢測技術(shù)

鮮思美建立的DPV-GPV-GPMV基因芯片檢測技術(shù)，特異性強(qiáng)，能檢測出相應(yīng)的病原，對芯片上的其它病原無交叉雜交；敏感性可達(dá)7.886ng/L，高于瓊脂糖凝膠電泳；對實(shí)驗(yàn)臨床樣本的檢出率高；可應(yīng)用于鴨瘟病毒、鵝細(xì)小病毒、番鴨細(xì)小病毒和鵝副粘病毒的鑒定及其混合感染病例的檢測。