枸地氯雷他定對小鼠過敏性肺炎的改善作用及機制

中圖分類號R965 文獻標志碼A 文章編號 1001-0408（2025）15-1882-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.15.11

Improvement effect and mechanism of desloratadine citrate disodium in hypersensitivity pneumonitis model mice

PENG Wenjuan’，ZHAO Yan2，YUE Shaoyun2，WU Yujiao2，MO Jiajia2，CHU Zhaoxing2（1.Dept.of Internal Medicine II，Anhui Chest Hospital，Hefei 230022，China;2.Hefei Industrial Pharmaceutical Institute Co.， Ltd.，Hefei 230601，China）

ABSTRACTOBJECTIVETo investigate the improvement efectand mechanismof desloratadine citrate disodiuminmice with hypersensitivitypneumonitis（HP）.METHODS Sixtymicewererandomlydividedintoblank control group（normalsaline）， model group（normal saline），prednisone group（positive control， 20mg/kg ）anddesloratadine citrate disodium low-，mediumand high-dose groups（0.5，1， 2mg/kg ），with 1O mice in each group.Except for the blank control group，mice in other groups wereintraperitoneallyinjectedwithovalbumin（OVA）andexposedtoOVAinhalationtoestablishtheHPmodel.Onday22postmodeling，miceineachgroupwereadministeredthecorrespondingdrugsornormalsaline，onceaday，for11consecutivedays. Afterthelastadministration，lungfunctionandairwayhypereactivitywereassssd.Televelsofinterleukin-1β（I-1β），IL-4 andIL-6inserumaswellasthelevelsofIL-8，IL-13andIL-17AinbronchoalveolarlavagefluidweredeterminedPathological changesinlungtissueofmicewereevaluatedusing Massonstaining.Furthermore，theexpressonsoffibrosis-relatedproteins， including transforming growth factor β₁ （TGF- β₁ ），typeII collagen（Col- II）and fibronectin （FN）were determined in lung tisues.ESULTSComparedwiththe blankcontrol group，the model groupshowed significantdeteriorationinlung function（ Plt; 0.01），whileairwayresistanceandserumlevelsof IL-1β，IL-4，IL-6andthelevelsof IL-8，IL-13andIL-17Ain the bronchoalveolar lavage fluid were increased significantly（ （Plt;0.01 ）.The lung tissues exhibited alveolar collapse，atrophy，and structuraldisarrayalongwiththeformationof extensivedepositsofbluecoagen fibers，thepercentageofpositivestaining

increased significantly（ Plt;0.01 ）.Additionally，the expression levelsof TGF- ?β₁ ，Col-II，and FN proteinsin the lung tissues werealso increased significantly（ _Plt;0.01 ）.After intervention with desloratadine citrate disodium，the pathological changes in the lung tissues of mice in each dosage group of

desloratadinecitratedisodiumshowedvaryingdegresofimprovement，andmostof theaforementioned indicatorlevelswere significantlyreversed（ Plt;0.05 or Plt;0.01 ）. CONCLUSIONs Desloratadine citrate disodium can improve the lung function and airwayhyperreactivityofHPmice，inhibitthereleaseofinflammatoryfactors inserumandbronchoalveolarlavage fluid，and reducethedepositionofcollgenfibers.Itsmechanismofactionmayberelatedtoanti-inflammatory，mmunomodulatory，nd antifibrotic effects.

KEYWORDsdesloratadine citrate disodium；hypersensitivity pneumonitis；lung function；anti-inflammation；fibrosis

過敏性肺炎（hypersensitivitypneumonitis，HP）是易感個體被暴露于環境中的致敏原經免疫介導而引起的一種間質性肺疾病，常見臨床癥狀包括呼吸困難、咳嗽和喘鳴。HP患病率隨氣候、職業暴露和環境暴露的差異而變化。研究顯示，HP占間質性肺疾病的 3%～15% ，為我國第三大常見的間質性肺疾病[-2]。

炎癥反應和纖維化在HP的發生發展中起重要作用，美國胸科協會、日本呼吸病學會和拉丁美洲胸科協會聯合制定的2020年版《成人過敏性肺炎診斷指南》，將HP分為纖維化型（混合炎癥性合并纖維化或純纖維化）和非纖維化型（純炎癥性）。糖皮質激素是目前治療HP的首選藥物，早期使用可以有效緩解呼吸困難、咳嗽等癥狀，但長期使用會引起感染、高血壓、骨質疏松等不良反應；免疫抑制劑如硫唑嘌呤、嗎替麥考酚酯，作為HP的二線治療選擇，可通過抑制免疫細胞的功能和增殖從而控制炎癥反應，但會出現骨髓抑制、肝腎功能損害等不良反應，長期使用安全性風險較大4。近年來，抗纖維化藥物成為治療HP的研究熱點，如尼達尼布或吡非尼酮均有改善HP纖維化的作用，可延緩肺功能下降，但胃腸道不良反應發生率高，且患者耐受性差。因此，現有藥物治療HP仍存在一定不足。

枸地氯雷他定是新型抗組胺藥，常用于治療過敏性蕁麻疹和過敏性鼻炎等過敏性疾病。研究發現，枸地氯雷他定不僅具有抑制肥大細胞脫顆粒和抗組胺作用，還可通過抑制炎癥因子的釋放和炎癥細胞的募集發揮抗炎作用，并進一步改善纖維化[6-]。從作用機制和臨床應用來看，枸地氯雷他定具有治療HP的潛力?；诖?，本研究以卵清蛋白（ovalbumin，OVA）誘導構建小鼠HP模型，研究枸地氯雷他定對HP的改善作用，并初步探討其可能的作用機制，以期為臨床治療HP提供一個可用的治療藥物。

1材料

1.1主要儀器

本實驗所用主要儀器包括QA40型超聲噴霧儀（美國Qsonica公司），SCIREQ型小動物肺功能檢測儀（北京廣源達科技發展有限公司），WBP型小動物全身體積描記檢測系統（美國DSIBUXCO公司），5810R型冷凍高速離心機（德國Eppendorf公司），MultiskanTMFC型酶標儀、FormaTM900系列 -80^°C 超低溫冰箱（美國ThermoFisherScientific公司），BS124S型萬分之一精密天平（德國Sartorius公司），KD-160型電子秤[百利達（上海）商貿有限公司]，MX-S型可調式渦旋混勻器（美國Scilogex公司）， CO₂ 安樂死箱（上海玉研科學儀器有限公司）。

1.2 主要藥品與試劑

枸地氯雷他定（批號20240341，純度 ?98% 購自合肥恩瑞特藥業有限公司；小鼠源甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）單抗（2310435）、兔源轉化生長因子 β₁ （trans-forming growth factor- β₁ ， TGF- β₁ ）多克隆抗體（批號2313234）均購自美國SantaCruz公司；兔源3型膠原蛋白（typeIIcollagen，Col-II）抗體、兔源纖維連接蛋白（fibronectin，FN）抗體、OVA（批號分別為234124、241234、240514）均購自美國Sigma公司；Al（OH）3（批號C11882643）購自德國Merk公司；白細胞介素（interleu-kin，IL）-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13和IL-17A酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（批號均為ml002921）均購自江蘇酶免實業有限公司；辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠/兔二抗（批號分別為20709024D、21205016D）均購自廈門通靈生物醫藥科技股份有限公司；乙酰甲膽堿（批號r622312）購自美國BioRuler公司。

1.3實驗動物

SPF級健康BALB/c小鼠，共60只，雌性， 6～8 周齡，體重 （18±2）g ，由浙江維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物生產許可證號：SCXK（浙）2024-0001。所有動物飼養于合肥綜合性國家科學中心大健康研究院動物實驗平臺，研究方案經該院動物倫理委員會審核通過（倫理號：IHM-AP-2024-063）。實驗期間小鼠自由進食與飲水。本研究嚴格遵循“3R\"原則，動物處理嚴格按照《實驗動物管理條例》進行。

2 方法

2.1 分組、造模與給藥

小鼠適應性飼養1周后，根據動物體重，按隨機數字表法將60只小鼠分為空白對照組（生理鹽水）模型組（生理鹽水）潑尼松組（陽性對照， 20mg/kg ，根據臨床等效劑量換算）和枸地氯雷他定低、中、高劑量組（0.5、

1，2mg/kg ，根據預實驗結果設定），每組10只。除空白對照組外，其余小鼠通過腹腔注射OVA和吸入OVA噴霧構建HP模型，以出現呼吸急促和氣喘為模型成功標準8-9。具體方法如下：造模小鼠在第1、8、15天腹腔注射 0.1mL 造模劑[含 200μgOVA 和 1mg.Al（OH）₃] ，共注射3次；從造模第22天開始，每天使造模小鼠暴露于 1% OVA噴霧中 30min （超聲噴霧儀），同時開始灌胃相應藥物干預，給藥容積為 10mL/kg ，每天1次，連續噴霧、給藥11 d。

2.2 肺功能檢測

末次給藥結束后 30min ，腹腔注射 1% 戊巴比妥鈉（70mg/kg） 麻醉各組小鼠，以仰臥位將其放置于小動物肺功能檢測儀內，手術鈍性分離暴露氣管并進行氣管插管，然后記錄小鼠肺功能指標：用力肺活量（forcedvitalcapacity，FVC）、第1秒用力呼氣容積（forced expiratoryvolumeinonesecond，FEV1）FEV1/FVC、最大呼氣流量（peakexpiratoryflow，PEF）。

2.3 氣道高反應性測定

肺功能檢測完畢后，采用小動物全身體積描記檢測系統評估各組小鼠氣道高反應性。將小鼠放入霧化室先適應 1min ，以乙酰甲膽堿溶液按霧化質量濃度1、5、10，15，20，25mg/mL 從低到高檢測，程序為霧化 1min 、記錄 3min 恢復 1min ，記錄氣道阻力。

2.4血清和支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子水平檢測

完成氣道高反應測定后，所有小鼠仰臥固定，于腹主動脈取血，室溫靜置 2h 后，以 3500r/min 離心 10min 后取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作，使用酶標儀檢測小鼠血清中的IL-1β、IL-4、IL-6水平。采用 0.9% 氯化鈉溶液對小鼠左側肺部進行灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液，以 3500r/min 離心 10min 后取上清液，按照ELISA試劑盒說明書操作，使用酶標儀檢測小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-8、IL-13、IL-17A水平。

2.5 肺組織病理觀察

完成血清和肺泡灌洗液采集后，將小鼠安樂死。每組取6只小鼠肺組織于 4% 多聚甲醛溶液中固定 24h 后脫水包埋于石蠟中，制備石蠟切片（厚度 3μm ），進行Masson染色后，封片，采用熒光顯微鏡于白光下觀察大鼠的肺組織病理變化。應用ImageProPlus6.0軟件測算切片中陽性染色（呈藍色）面積，并計算陽性染色百分比[陽性染色百分比 （%）= 陽性染色面積/總面積 x 100% 以評價病變程度。

2.6肺組織中纖維化相關蛋白表達的檢測

采用Westernblot法檢測。每組另取3只小鼠肺組織，提取組織中的總蛋白，采用BCA法測定總蛋白濃度。

將蛋白變性后，取蛋白 40μg 上樣進行電泳（恒壓180V， 13min 后轉膜至聚偏二氟乙烯膜上，用含 5% 脫脂奶粉的TBST浸泡聚偏二氟乙烯膜，室溫封閉 2h ；加入TGF- β₁ 、Col-II、FN、GAPDH一抗（稀釋比例分別為1：1000，1：1000，1：5000，1：5000） ，于 4^°C 孵育過夜；洗膜后，加人相應二抗（稀釋比例為1：10000），室溫孵育 2nΩ ；曝光顯色，利用ImageProPlus6.0軟件分析，以目標蛋白與內參蛋白（GAPDH）條帶灰度值的比值表示目標蛋白的表達水平。

2.7 統計學方法

使用GraphPadPrism9.5軟件對數據進行統計分析。計量資料滿足正態分布，以 表示，多組間比較采用方差分析，方差齊性時組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，方差不齊時組間兩兩比較采用Tamhane's 檢驗。檢驗水準 α=0.05 。

3結果

3.1枸地氯雷他定對模型小鼠肺功能的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠FVC、FEV1、FEV1/FVC、PEF均顯著降低 （Plt;0.01 ；與模型組比較，各給藥組小鼠FVC、FEV1、FEV1/FVC（除枸地氯雷他定低劑量組外）、PEF均顯著升高（ （Plt;0.05 或 Plt;0.01 ）。結果見表1。

表1各組小鼠肺功能指標比較 ）

a：與空白對照組比較， Plt;0.01 ;b：與模型組比較， Plt;0.01 ;c：與模型組比較， Plt;0.05 。

3.2枸地氯雷他定對模型小鼠氣道高反應性的影響

空白對照組、模型組、潑尼松組和枸地氯雷他定低、中、高劑量組小鼠的氣道阻力依次為 （2.01±0.22） ?。?.05±0.25） ）、 （2.96±0.23） ）、 （3.23±0.29） 、 （2.90±0.35） 、（2.77±0.40）cmH₂O/（mL?s）（1cmH₂O≈98.0665Pa） 。與空白對照組比較，模型組小鼠氣道阻力顯著升高（ Plt; 0.01）；與模型組比較，各給藥組小鼠氣道阻力均顯著降低 ?Plt;0.05 或 Plt;0.01 ）。

3.3枸地氯雷他定對模型小鼠血清中炎癥因子的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-6水平均顯著升高 （Plt;0.01 ）；與模型組比較，各給藥組小鼠血清中IL-1β、IL-4、IL-6（除潑尼松組和枸地氯雷他定低劑量組外）水平均顯著降低 Plt;0.01. ）。結果見表2。

表2各組小鼠血清中炎癥因子水平比較 pg/mL）

a：與空白對照組比較， Plt;0.01 ;b：與模型組比較， ?Plt;0.01?

3.4枸地氯雷他定對模型小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-8、IL-13、IL-17A水平均顯著升高（ （Plt;0.01 ；與模型組比較，各給藥組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-8、IL-13（除枸地氯雷他定低劑量組外）、IL-17A水平均顯著降低（ ΔPlt;0.05 或 Plt;0.01 ）。結果見表3。

表3各組小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子水平比較

a：與空白對照組比較， Plt;0.01 ;b：與模型組比較， Plt;0.01 ;c：與模型組比較， ΔPlt;0.05Δ

3.5枸地氯雷他定對模型小鼠肺組織病理的影響

空白對照組小鼠肺泡結構清晰，肺泡間質內以氣管為中心的少量藍色膠原屬于正常膠原，陽性染色百分比為 （3.43±0.23）% ；與空白對照組比較，模型組小鼠肺組織出現肺泡塌陷、萎縮及結構紊亂，并生成大量藍色膠原纖維沉積，陽性染色百分比顯著升高[（ 26.54± 2.65）% Plt;0.01] ;與模型組比較，各給藥組小鼠肺組織結構均明顯改善，陽性染色百分比均顯著降低[潑尼松組和枸地氯雷他定低、中、高劑量組的陽性染色百分比依次為 （15.43±1.76）% ！ （21.43±2.63）% 、 （17.65±1.72）% ?。?14.36±1.23）% Plt;0.05 或 Plt;0.01] 。結果見圖1。

3.6枸地氯雷他定對模型小鼠肺組織中纖維化相關蛋白表達的影響

與空白對照組比較，模型組小鼠肺組織中TGF- ?β₁ 、Col-II、FN蛋白表達水平均顯著升高（ Plt;0.01 。與模型組比較，各給藥組小鼠肺組織中TGF- ?β_¹?Col. I、FN蛋白表達水平均顯著降低（ Plt;0.01 。結果見圖2、表4。

4討論

HP是一種由吸人有機粉塵或化學物質引發的免疫介導的肺部炎癥性疾病，發病機制復雜，炎癥免疫反應和組織纖維化是其主要致病機制，涉及先天性和適應性

D.枸地氯雷他定低劑量組E.枸地氯雷他定中劑量組F.枸地氯雷他定高劑量組黃色箭頭：膠原纖維沉積。

圖1各組小鼠肺組織病理變化Masson染色顯微圖

圖2各組小鼠肺組織中TGF- β_{β1，C0l-} Ⅲ、FN蛋白表達電泳圖

I：空白對照組；Ⅱ：模型組；Ⅱ：潑尼松組； IV ：枸地氯雷他定低劑量組；V：枸地氯雷他定中劑量組；VI：枸地氯雷他定高劑量組。

表4各組小鼠肺組織中TGF- ??{β}_{C0I- IⅢI ?_FN 蛋白表達水平比較 ）

a：與空白對照組比較 .Plt;0.01 ；b：與模型組比較， ?Plt;0.01 。

免疫反應。在先天性免疫啟動后，適應性免疫通過抗原特異性T細胞和B細胞介導的炎癥反應，導致肺部肉芽腫形成，并促進肺部纖維化，最終導致肺組織結構發生不可逆破壞，加重疾病癥狀[0-11]

OVA是常用的致敏原，可啟動機體過敏性免疫反應，激活輔助性T細胞2（helperTcell2，Th2）/Th17型免疫應答和免疫球蛋白E介導的效應反應，導致IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-17A等細胞因子釋放，進而誘導促纖維化因子TGF- ?β₁. Col-II、FN的高表達，導致氣道壁的阻塞、狹窄和炎癥細胞的浸潤，引起肺功能呼氣量降低和嚴重的氣道高反應性，進而導致肺部組織出現纖維化及不可逆的病理變化[12]。因此，本研究采用OVA構建小鼠HP經典模型，用于評價枸地氯雷他定對HP的改善作用。

在HP疾病發展過程中，炎癥、免疫紊亂及纖維化均起到重要作用。促炎因子IL-1β和IL-6的大量釋放可誘導黏附分子及IL-8等趨化因子表達，促進白細胞募集和T細胞分化，其中Th2細胞釋放的IL-4和IL-13可誘導成纖維細胞增殖和膠原蛋白生成，Th17細胞釋放的IL-17A可促進中性粒細胞聚集、激活、遷移，加劇纖維化形成，從而導致TGF- ?β₁ 和FN等纖維化相關因子激活，加重肺纖維化程度[13-14]。在本實驗中，HP小鼠的氣道阻力顯著升高，肺功能顯著降低，血清中IL-1β、IL-4、IL-6水平和支氣管肺泡灌洗液中IL-8、IL-13、IL-17A水平以及肺組織中TGF- ?β₁?C01? Ⅱ和FN蛋白表達水平均顯著升高，說明OVA誘導的HP引起了體內相應促炎因子的激活，并進一步促進了TGF-βi和FN等纖維化因子的激活。給予枸地氯雷他定干預，可顯著改善小鼠肺功能和氣道高反應性，降低炎癥因子水平，抑制肺組織中纖維化相關蛋白表達，改善肺組織膠原纖維的沉積。

綜上所述，枸地氯雷他定可改善HP小鼠的肺功能和氣道高反應性，抑制血清和支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子的釋放，降低膠原纖維的沉積，其作用機制可能與抗炎、調節免疫和抗纖維化相關。

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（編輯：舒安琴）