健脾和胃方的指紋圖譜、化學(xué)模式識(shí)別分析及多指標(biāo)含量測(cè)定

中圖分類號(hào)R284;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）15-1876-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.15.10

Fingerprints，chemical pattern recognition analysis，and multi-index content determinationof Jianpi hewei formula

HE Dongdong'，ZONG Hui’，WANG Chongyang'，WAN Juanjuan'，MAO Xuepu'，HUANG Chuansheng2，WANG Xinchun2，WANG Liping1（1. Schoolof Pharmacy，Shihezi University/Key Laboratoryof Xinjiang Phytomedicine Resource and Utilization，Ministry of Education，Xinjiang Shihezi 832002，China;2.Dept.of Pharmacy，the First Afliated Hospital of Shihezi University，Xinjiang Shihezi 8320o8，China）

ABSTRACTOBJECTIVEToestablish HPLC fingerprint forJianpi hewei formula（JPHWF），conductchemical paterm recognitionanalysis，anddeterminethecontentsof sevencomponentsintheformula，aiming toprovideascientificbasis for qualitycontrol and furtherresearch ofJPHWFMETHODS Taking15batchesof standard decoctionsof JPHWFassamples，the HPLCfingerprintwasestablishedusingtheSimilarityEvaluationSystemofTCMChromatographicFingerprint（2O12edition）. Subequently，similarityevaluation，aswellasidentificationandatributionanalysisofchromatographicpeaks，wereconducted. Using thecommon peak areasfromthe15 batches of samples as variables，chemical paternrecognition analyses were performed onthesamplestrougherarhicalcusteranalysis，priipalcomponentanalysis，andrthogonalpartialleastsqares-dsriiant analysis.Thecontentsofadenine，5-hydroxymethylfurfural，tetrahydropalmatine，naringin，dehydrocorydaline，neohesperidinand glycyrhizicacidin15batchesofsamples weredeterminedbyHPLC.RESULTSTherewere19commonpeaks inthecharacteristic chromatograms for15batchesofsampleswiththesimilaritesofmorethanO.95.Resultsofchemicalpattmrecognitionanalysis showedhat15batchesofsamplescouldbeclusteredinto3categories，and3diferentialcompoundswerefound[peak7（5- hydroxymethylfurfural）），peak17（nohesperidin），andpeak15（naringin）.The7components werelinearlygoodintherespective concentration ranges R²≥0.9994 ）；RSDs of precision，stability and repeatability tests were less than 2% 0 n=6 ）；the average recovery rate of 98.95%-103.81% ，RSDof 0.61%-2.75% （ n=6 ）；the contents of them were 0.031-0.106，0.267-0.824，0.089- 0.144，1.344-2.091，0.089-0.178，1.328-2.028， 0.040-0.150mg/g ，respectively. CONCLUSIONS Established HPLC fingerprinting methodoupledwithmult-indexcontentdeterminationisvalidatedtobeaccurateandreliable，anditscombinationwithchemical

pattern recognition analysis can be applied to the quality control of JPHWF.

KEYWORDS Jianpi hewei formula；fingerprint；chemical constituents； contentdetermination；hierarchical cluster analysis；principal componentanalysis；orthogonal partial least squares-discriminantanalysis

慢性胃炎是一種胃黏膜的慢性炎癥性疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及幽門螺桿菌感染、不良飲食習(xí)慣及遺傳因素等多重誘因。該病在病理學(xué)上可表現(xiàn)為胃黏膜萎縮，并伴隨腸上皮化生和異型增生等癌前病變特征，與胃癌的發(fā)生呈顯著正相關(guān)。對(duì)于慢性胃炎，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)自前尚缺乏針對(duì)性的治療方案，患者病情常反復(fù)發(fā)作、遷延不愈。中醫(yī)藥干預(yù)通過多靶點(diǎn)作用機(jī)制，可以部分逆轉(zhuǎn)相關(guān)病理改變，且毒副作用小，適合長(zhǎng)期治療[3]

中醫(yī)將慢性胃炎歸屬于“胃皖痛”“胃痞\"等范疇，認(rèn)為慢性胃炎是由脾胄虛寒導(dǎo)致的。健脾和胃治法針對(duì)脾胃虛弱、脾胃不和，采用補(bǔ)益脾氣的中藥，調(diào)和脾胃之氣，可以達(dá)到脾升胃降的作用。健脾和胃方是石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科治療慢性胃炎的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黨參、白術(shù)、木香、莪術(shù)、焦麥芽、焦神曲、焦山楂、枳殼、延胡索和甘草10味中藥組成，具有健脾和胃、補(bǔ)益脾氣的功效。該方已被臨床證實(shí)對(duì)慢性胃炎具有良好的治療效果，特別是對(duì)慢性萎縮性胃炎、胃癌前病變療效顯著。但目前針對(duì)該方的質(zhì)量控制尚無(wú)系統(tǒng)研究，導(dǎo)致其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一。

中藥指紋圖譜可以從整體上宏觀地表征中藥主要化學(xué)成分[6-7];；層次聚類分析（hierarchicalclusteranaly-sis，HCA）、主成分分析（principalcomponentanalysis，PCA）和正交偏最小二乘-判別分析（orthogonalpartialleastsquares-discriminantanalysis，OPLS-DA）等化學(xué)模式識(shí)別技術(shù)結(jié)合指紋圖譜已被廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)[8-9]。因此，本研究采用高效液相色譜（HPLC）法建立健脾和胃方的指紋圖譜，并結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別技術(shù)進(jìn)行分析，同時(shí)對(duì)其中7種主要成分（腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸）進(jìn)行含量測(cè)定，旨在為其質(zhì)量控制、醫(yī)院制劑開發(fā)和臨床應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支撐。

1材料

1.1主要儀器

本研究所用的主要儀器有：1260InfinityⅡ型HPLC儀（美國(guó)Agilent公司）KH-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）BAS224S型萬(wàn)分之一電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]、XW-80A型旋渦混合器（上海馳唐電子有限公司）、Fresco21型高速冷凍離心機(jī)[賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司]。

1.2主要藥品與試劑

對(duì)照品腺嘌呤（批號(hào)MUST-23103001）5-羥甲基糠醛（批號(hào)MUST-23102711）延胡索乙素（批號(hào)MUST-24022721）柚皮苷（批號(hào)MUST-24033001）脫氫紫堇堿（批號(hào)MUST-23071017）、新橙皮苷（批號(hào)MUST-23100812）、甘草酸（批號(hào)MUST-23110110）均購(gòu)自曼斯特（成都）生物科技有限公司，純度均不低于 98% ;乙腈、甲醇和磷酸均為色譜級(jí)。

1.3中藥飲片

黨參（批號(hào)DS231101、DS231002，產(chǎn)地甘肅）、白術(shù)（批號(hào)BZ231002，產(chǎn)地安徽；批號(hào)BZ240101，產(chǎn)地四川）木香（批號(hào)MX231101、MX221001，產(chǎn)地云南）、積殼（批號(hào)ZK231001，產(chǎn)地江西；批號(hào)ZK240101，產(chǎn)地四川）、莪術(shù)（批號(hào)EZ230701，產(chǎn)地廣西；批號(hào)EZ230201，產(chǎn)地四川）、焦麥芽（批號(hào)JMY210101，產(chǎn)地安徽；批號(hào)JMY220901，產(chǎn)地四川）焦神曲（批號(hào)JSQ210701，產(chǎn)地安徽；批號(hào)JSQ231001，產(chǎn)地四川）、焦山楂（批號(hào)JSZ210401，產(chǎn)地山東；批號(hào)JSZ230901，產(chǎn)地河北）延胡索（批號(hào)YHS230602、YHS230703，產(chǎn)地浙江）和甘草（批號(hào)GC231001，產(chǎn)地甘肅；批號(hào)GC231201，產(chǎn)地新疆）均購(gòu)自毫州市善安堂中藥飲片公司或四川國(guó)強(qiáng)中藥飲片公司，經(jīng)石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部王彪主管藥師鑒定均為真品。

2方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用WatersSymmetry C₁₈ 柱 250mm×4.6mm， μm） ，以乙腈（A） .0.1% 磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（ 0～15min ， 2%A?10%A 15～30min ， 10%A? 35%A 30～40min 35%A?80% ； 40～50min 80%A 2%A ）；檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm ；柱溫為 35^°C ；流速為1mL/min ；進(jìn)樣量為 10μL 。

2.2 溶液制備

2.2.1 健脾和胃方標(biāo)準(zhǔn)湯劑制備

取黨參 10g 白術(shù) 10g 木香 3g 枳殼 10g 焦三仙（焦麥芽、焦神曲、焦山楂）各 10g 莪術(shù) 6g 、延胡索 26g 、甘草 3g ，加8倍量水，首次冷浸 0.5h ，煎煮 ，紗布過濾；第2次加人6倍量水，煎煮 40min ，紗布過濾；合并2次濾液，減壓濃縮至 500mL ，即得健脾和胃方標(biāo)準(zhǔn)湯劑，備用。15批次健脾和胃方樣品（編號(hào) S1～S15 由各單味飲片采用隨機(jī)數(shù)表法組合而得（具體組合信息可掃描本文首頁(yè)二維碼，進(jìn)入“增強(qiáng)出版\"頁(yè)面查看附表1）。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液制備

精密稱取腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮昔和甘草酸對(duì)照品，用 50% 甲醇溶解制成質(zhì)量濃度分別為 0.51，5.04，5.12，5.08，5.20， 0.52，5.02mg/mL 的單一對(duì)照品溶液。分別精密移取上述各單一對(duì)照品溶液適量，用 50% 甲醇稀釋并定容至同一 5mL 容量瓶中，得上述7種成分質(zhì)量濃度分別為50.47、199.27，198.69，396.26，99.77，297.61，199.40μg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液制備

精密量取健脾和胃方標(biāo)準(zhǔn)湯劑 750μL ，加 750μL 甲醇，超聲 10min ，以 14000r/min 離心 10min ，取上清液經(jīng) 0.22μm 微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4單味飲片對(duì)照溶液、缺味陰性樣品溶液制備

取處方量的飲片，按“2.2.1\"項(xiàng)下方法制備單味飲片對(duì)照溶液和缺味陰性樣品溶液。

2.3 指紋圖譜的建立及分析

2.3.1 方法學(xué)考察

（1）精密度：取健脾和胃方樣品（編號(hào)S3），按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次。以15號(hào)峰（柚皮昔）為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，其RSD分別小于 0.61% 和 1.94%（n=6） ，表明方法精密度良好。

（2）穩(wěn)定性：取健脾和胃方樣品（編號(hào)S3），按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在室溫下分別放置0、2、4、6、8、10、12、24h時(shí)，按“2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以15號(hào)峰（柚皮昔）為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，其RSD分別小于 1.10% 和 2.93%（n=8） ，表明供試品溶液在室溫放置 24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（3）重復(fù)性：取健脾和胃方樣品（編號(hào)S3），按\"2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以15號(hào)峰（柚皮昔）為參照峰，計(jì)算各特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，其RSD分別小于 0.61% 和 1.71%（n=6） ，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.2 指紋圖譜建立及相似度評(píng)價(jià)

取15批健脾和胃方樣品（編號(hào) S1～S15 ，分別按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄HPLC色譜圖。將相關(guān)色譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012版）》，選取編號(hào)S3樣品的圖譜為參照?qǐng)D譜，設(shè)置時(shí)間窗寬度為0.1min，采用中位數(shù)法，進(jìn)行多點(diǎn)校正和全峰匹配，生成15批樣品的疊加指紋圖譜及其對(duì)照譜圖R，詳見圖1。以對(duì)照?qǐng)D譜R為參照，計(jì)算15批健脾和胃方樣品圖譜的相似度。結(jié)果顯示，15批樣品共標(biāo)定出19個(gè)共有峰；15批樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜R的相似度在 0.956～0.998 之間，均大于0.95，表明不同批次樣品間具有高度相似性。

圖115批樣品的HPLC疊加指紋圖譜及其對(duì)照?qǐng)D譜R

2.3.3 共有峰的指認(rèn)及歸屬

將健脾和胃方供試品溶液（編號(hào)S3）圖譜與混合對(duì)照品溶液圖譜（取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定所得）進(jìn)行比對(duì)，共指認(rèn)出7個(gè)色譜峰，分別是1號(hào)峰腺嘌呤、7號(hào)峰5-羥甲基糠醛、10號(hào)峰延胡索乙素、15號(hào)峰柚皮苷、16號(hào)峰脫氫紫堇堿、17號(hào)峰新橙皮苷和19號(hào)峰甘草酸。將健脾和胃方供試品溶液（編號(hào)S3）圖譜與單味飲片對(duì)照溶液圖譜、缺味陰性樣品溶液圖譜（分別取“2.2.4”項(xiàng)下單味飲片對(duì)照溶液、缺味陰性樣品溶液按“2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定所得）進(jìn)行比對(duì)可知， 1～4 號(hào)峰為各飲片水煎液共有；7號(hào)峰和8號(hào)峰歸屬于焦三仙（焦麥芽、焦神曲、焦山楂）；9號(hào)峰歸屬于莪術(shù)；10、11、13、14和16號(hào)峰歸屬于延胡索；12和19號(hào)峰歸屬于甘草；15、17和18號(hào)峰歸屬于積殼；5號(hào)峰歸屬于白術(shù)和木香；6號(hào)峰歸屬于黨參和白術(shù)。結(jié)果見圖2、圖3。

圖2供試品溶液、混合對(duì)照品溶液及各單味飲片對(duì)照溶液的HPLC疊加圖

2.4 化學(xué)模式識(shí)別分析

2.4.1 HCA

將15批樣品的共有峰峰面積導(dǎo)入SPSS22.0軟件，采用組間連接、平方歐氏距離法進(jìn)行HCA。結(jié)果（圖4）顯示，當(dāng)平方歐氏距離為15時(shí)，15批樣品可聚為3大類：編號(hào)為 S4～S5.S7～S8.S11～S12…S15 的樣品聚為第1類；編號(hào)為S9的樣品為第2類；編號(hào)為 S1～S3.S6.S10Ω， S13～S14 的樣品聚為第3類。該結(jié)果表明，各批次樣品的成分有一定差異。

2.4.2 PCA

以15批樣品的共有峰峰面積為變量，將其導(dǎo)入SIMCA14.1軟件進(jìn)行PCA。以特征值 gt;1 為篩選標(biāo)準(zhǔn)，共得到5個(gè)主成分，其累積方差貢獻(xiàn)率為 85.446% （第1主成分的方差貢獻(xiàn)率為 32.350% ，第2主成分的方差貢獻(xiàn)率為 21.295% ，第3主成分的方差貢獻(xiàn)率為 12.310% ，第4主成分的方差貢獻(xiàn)率為 10.394% ，第5主成分的方差貢獻(xiàn)率為 9.097% ），可反映15批樣品的主要信息。其中，第 1～5 主成分中方差貢獻(xiàn)率較高的成分分別為峰16（脫氫紫堇堿）峰6、峰18、峰17（新橙皮苷）和峰19（甘草酸）。PCA得分圖（圖5）顯示，15批樣品可分為3類：編號(hào)為 S1～S2，S5，S11～S12 的樣品聚為第1類；編號(hào)為 S6～S9 的樣品聚為第2類；編號(hào)為 S3～S4，S10 S13～S15 的樣品聚為第3類。該結(jié)果與HCA結(jié)果相近。其中，PCA的主成分由全體變量共同貢獻(xiàn)，HCA結(jié)果可能由某些高方差變量主導(dǎo)，最終導(dǎo)致二者聚類結(jié)果略有不同。

圖415批樣品的HCA樹狀圖

圖515批樣品的PCA得分圖

2.4.3 OPLS-DA

以15批樣品的共有峰峰面積為變量，將其導(dǎo)入SIMCA14.1軟件進(jìn)行OPLS-DA。該模型穩(wěn)定性參數(shù)R²Y=0.794 ，預(yù)測(cè)參數(shù) Q²=0.615 ，均大于0.5，表明建立的OPLS-DA模型具有較高的穩(wěn)定性與較好的預(yù)測(cè)能力。OPLS-DA得分圖（圖6A）顯示，15批樣品可分為3類：編號(hào)為 的樣品聚為第1類；編號(hào)為S2、S6、S9的樣品聚為第2類；編號(hào)為 S4～S5，S7～ S8…S11～S12， S15的樣品聚為第3類。該結(jié)果與HCA結(jié)果相近。

本研究以變量重要性投影（variableimportance inprojection，VIP）值 gt;1 為標(biāo)準(zhǔn)，共篩選出3個(gè)差異性成分，分別為峰7（5-羥甲基糠醛）峰17（新橙皮苷）和峰15（柚皮昔），詳見圖6B。

圖615批樣品的OPLS-DA得分圖和VIP得分圖

2.5 多指標(biāo)成分含量測(cè)定

2.5.1 專屬性考察

取空白溶劑（ 50% 甲醇）混合對(duì)照品溶液和供試品溶液（編號(hào)S1），分別按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果（圖7）顯示，供試品溶液和混合對(duì)照品溶液中7個(gè)成分的保留時(shí)間一致，7個(gè)成分的色譜峰與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.5，理論板數(shù)以各待測(cè)成分峰計(jì)均不低于5000，且空白溶劑不干擾測(cè)定，說(shuō)明該方法專屬性良好。

圖7空白溶劑、混合對(duì)照品溶液和供試品溶液的HPLC色譜圖

2.5.2 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.2.2\"項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋2、5、10、50、100倍，取混合對(duì)照品原溶液及系列稀釋液，分別按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以各成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X） 、峰面積為縱坐標(biāo) （Y） 進(jìn)行線性擬合。結(jié)果（表1）顯示，各成分在其進(jìn)樣質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好。

表1各成分的線性關(guān)系考察結(jié)果

2.5.3 精密度考察

精密量取“2.2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋5倍后，按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸峰面積的RSD分別為 0.05% 、 0.08% 0.73% / 0.63% / 0.32% / 0.69% 和0.83%（n=6） ，表明儀器精密度良好。

2.5.4穩(wěn)定性考察

取編號(hào)S1樣品，按\"2.2.3\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在室溫下放置 0.2，4，8，12，24h 時(shí)，按“2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸峰面積的RSD分別為 1.11%.0.50%.0.56% 1.04%.1.47%.0.48% 和 1.16%（n=6） ，表明供試品溶液在室溫放置24h內(nèi)穩(wěn)定良好。

2.5.5 重復(fù)性考察

按\"2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液（編號(hào)S1），分別按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并采用外標(biāo)法計(jì)算各成分含量。結(jié)果顯示，腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸含量的RSD分別為 0.71%.0.60%.0.78% 0.57%.0.61%.0.87% 和 0.69%（n=6） ，表明該方法重復(fù)性良好。

2.5.6加樣回收率考察

精密量取6份已知成分含量的健脾和胃方標(biāo)準(zhǔn)湯劑（編號(hào)S1），每份 2mL ，按標(biāo)準(zhǔn)湯劑中已知成分含量1：1的比例加入各單一對(duì)照品溶液適量，按\"2.2.3\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按\"2.1\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算各成分的平均加樣回收率。結(jié)果顯示，腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸的平均加樣回收率分別為98.95%_～100.72%_～100.60%_～103.81%_～100.85%_～100.23% 和 99.23% ，RSD分別為 1.28%，1.26%，1.10%，0.66% /0.61% 、 0.73% 和 2.75% （ n=6 ，表明該方法的準(zhǔn)確度較高。

2.5.7 樣品含量測(cè)定

取15批次樣品，分別按\"2.2.3\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并采用外標(biāo)法計(jì)算各成分含量。每批樣品平行測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果（表2）顯示，15批樣品中腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮昔、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸含量范圍分別為 0.031～0.106，0.267～0.824，0.089～ 0.144、1.344～2.091、0.089～0.178、1.328～2.028、0.040～0.150mg/g 。

表215批樣品中各成分的含量測(cè)定結(jié)果 ?（n=3，mg/g）

3討論

3.1 健脾和胃方的方解

健脾和胃方由黨參、白術(shù)、木香、莪術(shù)、焦三仙（焦麥芽、焦神曲、焦山楂）、枳殼、延胡索和甘草10味中藥組成，對(duì)慢性胃炎具有良好的臨床療效。方中，黨參歸脾、肺二經(jīng)，能補(bǔ)脾養(yǎng)胃，為補(bǔ)中益氣的良藥[；白術(shù)甘溫補(bǔ)虛、苦溫燥濕，既能補(bǔ)氣以健脾，又能燥濕，炒用補(bǔ)氣健脾效果明顯[]，二者共為君藥。木香辛溫，具有溫中和胃、健脾消滯之功效[2，為臣藥。莪術(shù)味苦、辛，性溫，具有行氣、破血、消積、止痛的功效3；焦三仙具有消脹除滿、通暢胃腑的功效；枳殼味苦，性微寒，具有理氣寬中、行滯消脹之功效[4；延胡索性溫，味辛、苦，是活血化瘀、行氣止痛之妙品[15]，六者共為佐藥。甘草調(diào)和諸藥，疏肝行氣[，為使藥。10味中藥共奏健脾和胃、理氣通滯之效，達(dá)到治療慢性胃炎的效果。

3.2 色譜條件的優(yōu)化

本課題組在實(shí)驗(yàn)前期優(yōu)化了HPLC色譜條件，考察了不同流動(dòng)相（甲醇-水、甲醇- .0.1% 磷酸溶液、乙腈 .0.1% 磷酸溶液）、柱溫 （35，40，45^°C ）和流速（0.8、1.0、1.2mL/min 對(duì)該方化學(xué)成分分離效果、峰形等的影響，結(jié)合全波長(zhǎng)掃描，最后確定了本研究中的色譜條件。在該色譜條件下，色譜峰的峰形和分離度良好，保證了分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性。

3.3 指紋圖譜分析

本研究基于HPLC法對(duì)健脾和胃方標(biāo)準(zhǔn)湯劑進(jìn)行了指紋圖譜研究，不同批次樣品的指紋圖譜相似度均在0.95以上，表明不同批次飲片的整體質(zhì)量較穩(wěn)定。指紋圖譜中共標(biāo)定了19個(gè)共有峰，通過與混合對(duì)照品溶液圖譜比對(duì)確定了其中7個(gè)主要成分，分別是腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸。并且，筆者通過與缺味陰性樣品溶液和單味飲片對(duì)照溶液色譜圖進(jìn)行對(duì)比，明確了7種成分的藥材歸屬，為揭示健脾和胃方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了參考。然而，本研究中用于指紋圖譜建立的飲片樣本量有限，后續(xù)在醫(yī)院制劑開發(fā)和申報(bào)過程中有必要進(jìn)一步增加飲片樣本量，建立更加完善的質(zhì)量控制體系。

3.4化學(xué)模式識(shí)別的結(jié)果分析

本研究使用SPSS22.0、SIMCA14.1軟件對(duì)15批樣品進(jìn)行HCA、PCA和OPLS-DA。HCA、PCA和OPLS-DA均將15批樣品聚為3大類，表明各批次樣品的成分有一定差異。以VIP值 gt;1 為標(biāo)準(zhǔn)篩選出3個(gè)差異性成分，分別為峰7（5-羥甲基糠醛）峰17（新橙皮苷）和峰15（柚皮苷）；其中峰17（新橙皮苷）在PCA中為第4主成分中方差貢獻(xiàn)率較大的化合物，其余2個(gè)差異性成分未被主成分捕獲，說(shuō)明類別差異可能隱藏在次要方差中。

3.5含量測(cè)定成分選取依據(jù)及結(jié)果分析

腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮苷、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸是健脾和胃方樣品HPLC色譜圖中響應(yīng)較高的成分，且多是該方中藥材在2020年版《中國(guó)藥典》（一部）中收載的用于含量測(cè)定的指標(biāo)性成分，因此本研究將其作為定量分析指標(biāo)。如柚皮昔和新橙皮苷是積殼的指標(biāo)成分，具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)和抗?jié)兊淖饔肹1；延胡索乙素是延胡索的指標(biāo)成分，具有鎮(zhèn)靜、止痛等作用；甘草酸為甘草的特征性活性成分，具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫的作用；腺嘌呤、5-羥甲基糠醛和脫氫紫堇堿都具有抗炎、抗腫瘤等作用[20-22]。以上7種成分可能是健脾和胃方發(fā)揮治療慢性胃炎作用的重要物質(zhì)，因此本研究對(duì)這7種成分進(jìn)行了含量測(cè)定。含量測(cè)定結(jié)果顯示，15批樣品中腺嘌呤、5-羥甲基糠醛、延胡索乙素、柚皮昔、脫氫紫堇堿、新橙皮苷和甘草酸的含量范圍分別為 0.031～0.106，0.267～0.824，0.089～0.144，1.344～ 2.091、 0.089～0.178，1.328～2.028，0.040～0.150mg/g 結(jié)果提示，7種成分在15批樣品中的含量存在一定差異，這可能與藥材產(chǎn)地、提取工藝或儲(chǔ)存條件有關(guān)。

綜上所述，本研究所建立的HPLC指紋圖譜及多指標(biāo)成分含量測(cè)定方法穩(wěn)定、可行，為揭示健脾和胃方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了參考，也為健脾和胃方的質(zhì)量控制、后續(xù)醫(yī)院制劑開發(fā)和臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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（編輯：林靜）