基于miR-146α調控TLR4/NALP3信號通路探討痛風立安膠囊的抗炎機制

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）12-0030-05

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.12. zgmzmjyzz202512008

Abstract：ObjectiveThisstudyaims toinvestigate theanti-inflammatoryefectofTongfengLianCapsuleonacutegoutyarthritis anditsunderlying mechanisms.MethodsArandomizedcontroleddesignwasadopted，andSPF-graderatsweredividedintofour groups：model group，colchicine group，Tongfeng LianCapsulegroup，andnormalcontrolgroup.Theacutegoutyarthritis odelwas inducedby monosodiumurate（MSU）crystals，andthecoespondingdrugsornormalsalinewereadministered.Jointswellngindex was measured at 1h before modeling and at 2 h， ^4h ！ 6h ，and 12h after modeling.After 3 days，samples were collected to detect the levels of IL-1β ， TNF-α ，PGE2，TGF-β1，and 1L-8 in serum，as well as the expression levels of NALP3，TLR4，and NF- κB （20 p65 proteins andmiRNA-146αmRNA insynovial tssue.ResultsCompared with thenormalcontrolgroup，ratsinthemodel group showedsignificant inflammatoryresponses，with significantlyincreasedankle jointswellngrate，serum inflammatoryfactors （IL-1β TNF-α ，PGE2，TGF-β1，IL -8），and expression levels of NALP3，TLR4，and NF - κκκ p65 proteins in synovial tissue. The level of miRNA -146α in synovial tissue wassignificantly decreased.Compared with the model group，theankle joint swellingrate，serum inflammatory factors（ IL-1β ， TNF-α ，PGE2，TGF-β1，IL-8），and expresson levels of NALP3 and TLR4 proteins in synovial tissue were significantly reduced in the Tongfeng Lian Capsule group，while miRNA -146α in synovial tissue was significantly upregulated.There was no significant difference in NF- κB p65 protein expression. Conclusion Tongfeng Lian Capsule exhibits a significant anti-inflammatoryefectonAGAanditsmechanismmayinvolveinibitinginfammatoryresponsesthroughtheregulationofmiNA -146α and the TLR4/NALP3 signaling pathway.This providesa scientific basis fortheclinical aplicationof Tongfeng LianCapsule.

Key Words：Tongfeng Lian Capsule;Gouty Arthritis；Inflammatory

痛風性關節炎（goutyarthritis，GA，簡稱痛風）是一種常見的關節炎癥，其發病常伴隨不良的飲食習慣和生活方式1]，具有高發性、致殘性和反復性等特點。急性痛風性關節炎（acutegoutyarthritis，AGA）發作時的疼痛非常劇烈，同時伴有關節僵硬、活動受限等癥狀，會直接影響患者的肢體功能[2]。炎性浸潤是急性痛風性關節炎重要病理改變， miR-146α 在TLR4和NALP3炎性體信號通路發揮關鍵調控作用，并與急性痛風性關節炎發生關系密切。研究[3]發現 miR-146α 可能間接靶向NALP3炎癥小體以改善 IL-1β 的活化，減少痛風的炎性反應。因此研究通過 miR-146α 及TLR4/NALP3炎性體信號通路，降低炎癥水平，減少患者疼痛是痛風治療藥物最緊迫的要求。

目前臨床常用的治療痛風的抗炎藥物有秋水仙堿、非甾體抗炎藥和糖皮質激素[4]。雖然這些藥物可以緩解局部疼痛癥狀，但是長期使用會產生很多不良反應，輕則產生胃腸道反應，嚴重則會導致腎功能衰竭[5]。根據痛風的臨床表現，其可歸屬于中醫“歷節”“痹證”的范疇，中醫藥治療具有較好且安全的治療效果，其在降尿酸、抗炎和改善關節功能方面經現代研究發現更具有優勢[6]

痛風立安膠囊是廣西國際壯醫醫院風濕病科李鳳珍主任醫師臨床總結的壯藥經驗方，由腫節風、虎杖、忍冬藤、粉草、車前草、徐長卿、透骨草、甘草組成，通龍路火路之氣機，具有清熱毒、除濕毒、祛風毒、消腫痛等功效。多年臨床應用發現，其對痛風急性發作期的關節疼痛、腫脹及活動受限等癥均有明顯改善[7]，但其具體作用機制尚未明晰。基于此，本研究利用動物模型評價痛風立安膠囊的抗炎作用及其機制，以更好地促進臨床應用。

1材料

1.1實驗儀器905-ULTS超低溫冰箱（美國賽默飛世爾科技公司），高速離心機（SIGMA），熒光定量PCR（德國ROCHE公司），微量核酸蛋白分析儀（美國熱電公司），MK3型酶標儀（美國賽默飛世爾科技公司），蛋白掃膜儀（美國Proteinsimple公司）。

1.2實驗藥品與試劑痛風立安膠囊（院內制劑，批文號：桂藥劑字M20100004），由廣西國際壯醫醫院制劑中心生產提供。按人與動物體質量折算等效劑量（成人每日12粒 。秋水仙堿片（云南植物藥業有限公司，國藥準字H53020166， 0.5mg 片）用蒸餾水配制成秋水仙堿混懸液，備用。MSU混懸液的制備，稱取微晶型MSU 2500mg ，用無菌生理鹽水配制成 25mg/ mL的尿酸鈉懸濁液， 4^°C 冰箱保存，用前搖勻。1.3實驗動物雄性 SPF級SD鼠40只，體質量（ 200±20 ）g，由廣西中醫藥大學實驗動物中心提供。根據實驗室動物護理和使用指南，動物分組分籠，飼養環境溫度（ 22±2）^eC ，相對濕度為（50±5）% ， 12h/12h 明暗周期，標準飼料喂養，自由攝食飲水。

2實驗方法

2.1動物造模、分組和給藥將40只SPF大鼠適應性喂養1周，采用隨機數字表法分為造模組30只和正常組10只。建立經典痛風性關節炎模型模型制備參照Coderre造模方法：固定大鼠，受試大鼠麻醉后選右后足踝關節外側后方為穿刺點，針口斜面朝前上方與腔骨成 45^° 夾角刺人踝關節腔，以6號注射針向關節腔一次性注入 25mg/mL MSU混懸液 0.2mL ，正常組大鼠向關節腔內注射0.2mL 生理鹽水。于造模后 ⁴h 進行模型鑒定，注射部位出現明顯腫脹表示建模成功。成模大鼠隨機分為模型組、秋水仙堿組和痛風立安膠囊組，每組10只。正常對照組和模型組大鼠以同體積0.9% 氯化鈉溶液灌胃。

參照《藥理實驗方法學》人與大鼠體表面積換算法，按成人每日服用痛風立安膠囊劑量 4.8g 得痛風立安膠囊組大鼠每日給藥量分別為 0.432g/ kg，按2020年痛風指南建議成人秋水仙堿每日治療藥量 2mg ，得秋水仙堿組每日大鼠給藥量為0.18mg/kg ，正常組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，每日2次，連續 3d 。

2.2大鼠踝關節腫脹率測量各組大鼠在造模前以游標卡尺測量右后足踝關節下 0.5mm 處的直徑，造模后 ^2h ！ ^4h ！ 6h 、 ^12h ，在原部位以相同方法測量，比較致炎前后踝關節腫脹情況。關節腫脹指數分別于造模前 ¹h 、造模后 7 、6h、 ^12h ，采用縛線法于大鼠受試膝關節同一部位測量周徑，并計算各階段腫脹指數。

2.3大鼠炎癥細胞因子表達檢測大鼠腹主動脈取血，ELISA法檢測血清 IL-1β 、TNF- ∝ 、PGE2、TGF-β1、IL-8的含量。

2.4大鼠炎癥信號軸相關蛋白檢測WB檢測大鼠滑膜組織中TLR4、 NF-κB 、NALP3蛋白表達量的差異；RT-qPCR 檢測滑膜miRNA-146amRNA表達量。GAPDH：F：GGCACAGTCAAGGCT-GAGAATG，R：ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA;miR- 146α：F： CTGTGCAAGCCAAATTCCCT，R：CAAAGTCGTCCGTGGGTTCT。

2.5統計學分析采用 SPSS23.0軟件進行統計分析，計量資料符合正態分布采用均數加減標準差進行統計描述，以（ ）表示，非正態分布采用“中位數和四分位間距”描述；符合正態分布兩組間比較用 χ_t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，兩組多個時間點比較采用重復測量方差分析，非正態分布采用秩和檢驗，以 Plt;0.05 為差異有統計學意義。

3結果

3.1關節腫脹度結果各組大鼠在造模后踝關節腫脹指數都有不同程度的增加，其中，模型組增加較為明顯，造模 ^2h 后，各組大鼠踝關節與空白組相比腫脹指數明顯增大，造模 4h，6h，12h 時，痛風立安膠囊組與秋水仙堿組大鼠踝關節腫脹指數均減小。與模型組相比，秋水仙堿組關節腫脹指數在 ^2h ！ ^4h 、 6h 人 ^12h 降低（ Plt;0.05） ；痛風立安膠囊組在 ^2h ！ ^4h ！ ^6h 、 ^12h 降低（ Plt; 0.05）。與秋水仙堿組相比，痛風立安膠囊組關節腫脹指數在 ^2h 、 ^12h 降低不明顯（ Pgt; 0.05）。見表1、如圖1所示。

表1大鼠各組各時段踝關節腫脹指數表

注：與空白組比較， Plt;0.05 ；與模型組比較， Plt;0.05 。

圖1各組大鼠12h關節腫脹外觀情況圖

3.2大鼠炎癥細胞因子比較與空白組比較，秋水仙堿組、痛風立安膠囊組血清中 IL-1β 、TNF-α 、PGE2、TGF-β1、IL-8含量差異具有統計學意義（ Plt;0.05 ）；與模型組比較，秋水仙堿組、痛風立安膠囊組有差異（ Plt;0.05 ）；與秋水組比較，痛風立安中膠囊組具有統計學意義（ Plt; 0.05）。見表2。

表2大鼠各組炎癥細胞因子含量比較表

注：與空白組比較， ¹Plt;0.05 ；與模型組比較， Plt;0.05 ；與秋水仙堿組比較， Plt;0.05 。

3.3大鼠炎癥信號軸相關蛋白檢測分析大鼠滑膜組織中TLR4、 NF-κB p65、NALP3表達量的差異，模型組中TLR4、 NF-κB p65、NALP3蛋白表達量較空白組升高（ Plt;0.05 ），秋水仙堿組、痛風立安組NALP3、TLR4蛋白表達較模型組降低（ Plt;0.05 ， Plt;0.01 ），并且秋水仙堿組與痛風立安組未顯示統計學差異（ Pgt;0.05 ），模型組NF-κBp65 表達較空白組升高，但在秋水仙堿組、痛風立安組與模型組比較未顯示出統計學差異（ Pgt; 0.05），提示痛風立安對炎癥信號軸相關蛋白調控能力與秋水仙堿相當，這可能主要與調控TLR4、NALP3表達有關。如圖2。

圖2大鼠炎癥信號軸相關蛋白表達情況圖

注：圖中為3次大鼠滑膜組織WB條帶圖，并對各自目的條帶進行灰度值分析，結果以柱狀圖顯示。 ^*Plt;0.05 ， ^**Plt;0.01 。

3.4大鼠 miR146-α 表達qPCR檢測滑膜組織中miRNA -146α 表達量，模型組中miRNA -146α 表達量較空白組下降（ Plt;0.05. ），秋水仙堿組、痛風立安組大鼠miRNA -146α 表達較模型組升高，兩組比較均具有統計學差異（ Plt;0.05， 。見表3。

表3各組大鼠滑膜中 miR-146α 表達量結果表

注：與空白組比較， Plt;0.05 ；與模型組比較，2） Plt; 0.05；與秋水仙堿組比較， ^3）Plt;0.05 。

4討論

痛風是一種尿酸過度沉積導致炎癥急劇增加的疾病，其臨床表現出的關節周圍“紅、腫、熱、痛”與炎癥因子的分泌密切相關。現代研究發現miRNA對于正常細胞的基因調控至關重要，其在痛風的進展中也起著重要作用。miRNA介導的Toll樣受體4（Toll-likeReceptors4，TLR4）和Nod 樣受體蛋白-3（Nod-likereceptorpyrin do-main3，NLRP3）炎性體信號通路是目前研究中發現的兩條可以調控炎癥因子的信號通路。miR-146α 是miRNA的一種亞型，在炎癥信號傳導途徑中起負反饋作用[9]。TLR4是一種模式識別受體，可以激活核轉錄因子核轉錄因子- κB （nucleartranscription factor - κB ， NF-κB[10] ，繼而增加下游一系列炎癥因子的轉錄和表達，最終產生級聯放大的炎癥反應。NLRP3則被報道在炎癥因子通路上具有監管功能，且 miR-146α 的缺乏能上調NALP3炎性小體促進 IL-1β 的激活[1]

現有研究發現， miR-146α 具有轉錄中斷功能，在由MSU晶體存在引發的急性炎癥反應期間表達下降。 miR-146αKO 小鼠比WT小鼠患痛風性關節炎更嚴重，NALP3、 IL-β 小 TNF-α 等促炎因子顯著增加。也有研究[3提到 PGE2、TGF－β1、IL-8也在痛風發作中扮演重要角色。因此，對于干預痛風炎癥反應，控制關節癥狀具有現實性和迫切性。

中醫認為痛風的發病機制中“濕、熱、瘀”起著重要作用。“濕”可阻礙氣血流通，導致關節腫脹疼痛；“熱”可煎灼津液，表現為“紅，腫，熱，痛”等癥狀；最終都可轉化為“瘀”，血阻滯，不通則痛，可導致痛風患者關節疼痛[12]。痛風立安膠囊是臨床中常用于治療痛風的驗方，具有清熱利濕、祛風通絡的功效。適用于關節疼痛、紅腫灼熱的痛風類型。本研究中發現，大鼠在痛風造模后關節腫脹，關節腔內可見大量拉絲狀淡黃色積液，表明痛風模型成功。秋水仙堿組（陽性對照），痛風立安膠囊組關節腫脹指數在造模成功后 2h 、4h、 6h 、 12h 相較于模型組明顯降低，表明痛風立安膠囊對于痛風的治療效果非常明顯。同時，血清中炎癥細胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、TGF-β1、IL-8在痛風立安膠囊治療下明顯降低。這些表明痛風立安膠囊可以明顯降低急性痛風進展中的炎癥因子，減少炎癥細胞浸潤。后續研究發現痛風立安膠囊治療組大鼠TLR4、NALP3蛋白表達降低，血清中 miRNA-146α 表達升高，這提示痛風立安膠囊可能通過調節 miR-146α 及 TLR4/NALP3信號通路活性改善痛風炎性反應。

據此，基于 miR-146α 調控TLR4/NALP3信號通路的理論基礎，筆者進一步開展痛風立安膠囊對急性痛風性關節炎大鼠的干預研究，發現痛風立安膠囊可以上調 miR-146α 表達，降低I-1β 、TNF - α 、PGE2、TGF-β1、IL-8含量，抑制TLR4、NALP3表達，為痛風立安膠囊的臨床應用提供了科學依據。如圖3所示。

圖3痛風立安治療痛風的可能機制圖

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（收稿日期：2024-09-10編輯：陶希睿）