注射用頭孢硫脒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法探討

陳小珍 謝冬梅 王群

注射用頭孢硫脒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法探討

陳小珍 謝冬梅 王群

目的 對(duì)注射用頭孢硫脒進(jìn)行鱟試劑檢查法實(shí)驗(yàn)，以替代熱原檢查，建立注射用頭孢硫脒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。方法 參照《中國(guó)藥典》2010版(二)部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法及其指導(dǎo)原則進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果 注射用頭孢硫脒稀釋至2.5 g/L及以下時(shí)可消除對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應(yīng)的干擾。結(jié)論

注射用頭孢硫脒可以通過(guò)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法來(lái)控制細(xì)菌內(nèi)毒素的含量。

注射用頭孢硫脒;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法;鱟試劑;干擾試驗(yàn)

注射用頭孢硫脒(cefathiamidine for injection)是第一代頭孢菌素類藥物，本品作用機(jī)制為抑制敏感菌的細(xì)胞壁合成而產(chǎn)生殺菌作用，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌及部分陰性菌有抗菌活性，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的作用較強(qiáng)，一般應(yīng)用于敏感菌所引起呼吸系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)、五官、尿路感染及心內(nèi)膜炎、敗血癥。

筆者通過(guò)計(jì)算機(jī)檢索系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)目前尚無(wú)有注射用頭孢硫脒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的報(bào)道，參照《中國(guó)藥典》2010版(二)部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法［1］應(yīng)用鱟試劑方法對(duì)該制劑進(jìn)行了研究，為該品種細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法的建立提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試藥

1.1 試藥

注射用頭孢硫脒，廣州白云山天心制藥股份有限責(zé)任公司，批號(hào)：110923，111029，120118 規(guī)格2.0 g/支。

1.2 試劑

鱟試劑：批號(hào) 110330，規(guī)格：0.1 ml，λ=0.25 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司;批號(hào)：101217，規(guī)格：0.1 ml，λ=0.125 EU/ml湛江博康海洋生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：批號(hào)：2010-3，效價(jià)120EU，規(guī)格：1 ml/支，中國(guó)藥品生物制品檢定所;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，以下簡(jiǎn)稱(BET)，批號(hào)：1107150，規(guī)格：5 ml/支，湛江安度斯生物有限公司，其余實(shí)驗(yàn)材料均經(jīng)250℃烘烤30 min。

1.3 儀器

XW_80A旋渦混旋器，上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠;HH.214電熱恒溫水浴鍋，江蘇醫(yī)療器械廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 鱟試劑靈敏度復(fù)核

按2010版《中國(guó)藥典》(二部)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)，結(jié)果所用鱟試劑靈敏度均符合規(guī)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果

2.2 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限制L確定

根據(jù)公式L=K/M計(jì)算L值，其中K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時(shí)可接受的內(nèi)毒素最大劑量，注射液的K為5 EU/(kg·h)。M為人每公斤體重每小時(shí)給藥的最大劑量，臨床注射用頭孢硫脒使用的最大劑量是2000 mg所以M為2000 mg·60 kg/h。通過(guò)計(jì)算得到L為0.15 EU/mg。綜合考慮本品臨床用藥特點(diǎn)，為了達(dá)到臨床用藥的安全性，將細(xì)菌內(nèi)毒素限值確定為0.1 EU/mg。

2.3 供試品最小有效稀釋濃度C的確定

選用靈敏度是0.25 EU/ml和0.125 EU/ml鱟試劑，最小有效稀釋濃度依照C=λ/L計(jì)算，鱟試劑靈敏度是0.125 EU/ml的最小有效稀釋濃度時(shí)1.25 g/L，鱟試劑靈敏度是0.25 EU/ml的最小有效稀釋濃度時(shí)2.5 g/L。

2.4 供試品的干擾預(yù)試驗(yàn)

將供試品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成濃度是0.625，1.25，2.5，5.00 g/L的系列溶液，記此系列溶液為NPC系列;同時(shí)另做加含2λ的內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品平行系列溶液，記此系列溶液為PPC系列，采用相應(yīng)靈敏度的鱟試劑分別和NPC，PPC兩個(gè)系列的供試品反應(yīng)，按照檢查法項(xiàng)下試驗(yàn)。結(jié)果表明，注射用頭孢硫脒的稀釋濃度為1.25 g/L時(shí)，采用靈敏度是0.125EU/ml的鱟試劑，對(duì)試驗(yàn)無(wú)干擾作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.5 供試品干擾試驗(yàn)

用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和注射用頭孢硫脒分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成含細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品2.0λ，1.0λ，0.5λ，0.25λ 四種濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液。用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和樣品制成每一濃度平行做4支，另取細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和注射用頭孢硫脒溶液各做2支陰性對(duì)照管。靈敏度為0.125 Eu/ml的鱟試劑與上述兩個(gè)系列的內(nèi)毒素溶液反應(yīng)。結(jié)果見(jiàn)表3，Es在0.5λ～2.0λ之間，Et在0.5Es～2.0Es之間，說(shuō)明供試品在0.125 g/L時(shí)，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無(wú)干擾作用。因此對(duì)本品可以用細(xì)菌內(nèi)毒素法代替家兔法。

表3 供試品干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.5 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查實(shí)驗(yàn)

取3批熱原檢查合格的注射用頭孢硫脒按2010版《中國(guó)藥典》(二部)要求，考察其細(xì)菌內(nèi)毒素限值，擬定注射用頭孢硫脒的內(nèi)毒素限值為0.1Eu/ml。結(jié)果見(jiàn)表4，陰性對(duì)照管(NC)均為陰性，供試品陽(yáng)性管(PPC)和陽(yáng)性對(duì)照管(PC)均為陽(yáng)性，試驗(yàn)有效;供試品管(NPC)均為陰性，表明供試品中未檢出細(xì)菌內(nèi)毒素，3批注射用頭孢硫脒的細(xì)菌內(nèi)毒素檢出均符合規(guī)定。

表4 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

按照2010年版《中國(guó)藥典》(二部)附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法研究，結(jié)果表明注射用頭孢硫脒在稀釋濃度是0.125 g/L時(shí)，采用凝集法，用靈敏度是0.125 Eu/ml鱟試劑可以進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。由于細(xì)菌內(nèi)毒素法具有操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)周期短，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，因此可替代家兔法對(duì)注射用頭孢硫脒進(jìn)行安全質(zhì)量檢查［2，3］以達(dá)到安全用藥的目的。本文先通過(guò)干擾預(yù)試驗(yàn)確定供試品的有效稀釋濃度，再由干擾試驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，從而減少干擾試驗(yàn)的盲目性。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(二部).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄 XIE99-102.

［2］謝冬梅.甲鈷胺注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5(2)：69-71.

［3］李薇，劉肅，何華紅，等.三磷酸腺苷原料藥的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可行性的研究.中國(guó)藥房，2010，21(17)：1592-4.

On bacterial endotoxin inspection for cefathiamidine injection

CHEN Xiao-zhen，XIE Dong-mei，WANG

Qun.Department of Pharmary，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu 233004，China

Objective To establish bacterial endotoxin test method of the extraction of cefathiamidine injection.Methods According to the Chp 2010 Edt，inhibition or enhancement test for bacterial endotoxin test was carried out of oxiractam injection.Results The interference could be eliminated when cefathiamidine injection was diluted by 2.5 g/L.Conclusion Bacterial endotoxin test can be used for the extraction of bonemelon injection.

cefathiamidine injection;Bacterial endotoxin test(BET);Tachypleus amebocyte lysate(TAL);interference test

233004 蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科

表2 供試品的干擾預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

靈敏度EU/ml 系列 稀釋濃度g/L 5.0 2.5 1.25 0.625NC PC 0.25 NPC -- -- -- -- --PPC -- -- ++ ++ ++0.125 NPC -- -- -- -- --PPC -- ++ ++ ++ ++