雞傳染性法氏囊病毒新型變異株傳播性研究

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：A文章編號：1673-1085（2025）05-0042-06

傳染性法氏囊病（Infectiousbursaldisease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（IBDV）引發(fā)的，一種具有高度傳染性、高致死率且可能導致免疫抑制的嚴重傳染病。自1957年在美國首次發(fā)現(xiàn)IBDV的經典毒株以來，該病毒在全球范圍內廣泛傳播[1。自2017年起，世界各地不斷有IBDV變異株的報道。近期在中國發(fā)現(xiàn)了一種新的變異株，它與早期分離的變異株有所不同。這種新毒株雖然不會導致雞只死亡，但會引起法氏囊嚴重萎縮，導致免疫抑制，從而造成巨大的經濟損失。變異株引起的臨床癥狀，主要包括精神不振、羽毛蓬亂、食欲減退、間歇性腹瀉等[2-3]。解剖可見法氏囊黏膜出血，嚴重時法氏囊呈現(xiàn)黃色，甚至呈紫葡萄狀。該病毒的危害直接表現(xiàn)為死亡率上升和飼料利用率降低，給家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來了災難性的經濟損失[4]。

近年來，隨著傳染性法氏囊病毒A、B節(jié)段的持續(xù)重組與重配，中國東部地區(qū)報道了IBDV新型變異株的出現(xiàn)。2019年，中國首次從六個省份檢測到這種新型變異株[5]。這一發(fā)現(xiàn)引起了科研人員的廣泛關注[，國內研究者開始陸續(xù)分離并研究IBDV新型變異株。這種新型變異株也迅速傳播到其他亞洲國家，2021年日本、韓國、馬來西亞等國相繼報告了IBDV新型變異株的發(fā)現(xiàn)[7-8]。IBDV新型變異株的出現(xiàn)，可能成為家禽業(yè)的新挑戰(zhàn)，其防控形勢令人擔憂。

前期在臨床已分離到一株IBDV新型變異株GD2021-08^[9] ，為了解探究新型變異株的傳播性，本試驗對該毒株在SPF雞上的水平感染能力以及發(fā)病特征進行研究，以期能為生產上該病的防控提供參考和指導。

1材料方法

1.1材料

1.1.1病毒毒株：IBDV新型變異株代表株GD2021-08，由溫氏研究院分離純化鑒定。

1.1.2SPF雞胚、試驗動物無特定病原體（Specificpathogenfree，SPF）雞、SPF雞胚均購于。雞胚，37℃培養(yǎng)箱孵育；SPF雞，試驗場負壓隔離器飼養(yǎng)。

1.1.3主要試劑病毒基因組提取試劑盒（RaPureViralRNA/DNAKits）購自Magen生物公司；PrimecriptTMOnetepRT-PCRKitVer.2一 步法反轉錄試劑盒購自TaKaRa公司；凝膠回收試劑盒（E.Z.N.A. GelExtractionKit）、質粒DNA抽提試劑盒（E.Z.N.A. PlasmidMiniKitI）為Omega公司產品；In-Fusion HD Cloning Plus均購自TaKaRa公司；胎牛血清（FBS）購自Bovogen公司；DMEM購自Hyclone公司。

1.2 方法

1.2.1傳播性試驗方案及分組為評估IBDV新型變異株GD2021-08在SPF雞上的水平傳播能力，

20只16日齡SPF雞隨機分為3組，GD2021-08感染組（5只）、同居組（5只）、空白對照組（10只），動物試驗分組見表1。GD2021-08感染組，以點眼滴鼻的方式感染IBDV新型變異株GD2021-08，劑量為 ， 200μL/ 只；同居組，5只雞與GD2021-08感染組在感染當天同一隔離器中飼養(yǎng)；空白對照組，以點眼滴鼻的方式接種同劑量PBS溶液。每天觀察SPF雞的臨床癥狀與存活情況，同居25d后，每組雞先稱重后剖檢，觀察法氏囊、脾臟病變，再依照（1-1）式、（1-2）式、（1-3）式計算囊體比、脾體比、BBIX指數(shù)，并通過熒光定量RT-PCR檢測同居組法氏囊拷貝數(shù)，與空白組相比較。

囊重比 （法氏囊重量/體重） ×1000 （1-1）式脾重比 （脾臟重量/體重） ×1000 （1-2）式BBIX 攻毒組雞囊重比/空白對照組雞平均囊重比 （1-3）式

當BBIX lt;0.7 時，判定法氏囊萎縮。

熒光定量PCR檢測：使用AppliedBiosystems7500Fast熒光定量RT-PCR檢測，反應程序為：預變性 ， ，共計40個循環(huán)。計算樣品中IBDV新型變異株病毒RNA的拷貝數(shù)，分析SPF雞排毒情況。qPCR反應體系見表2，IBDVVP2檢測引物和探針見表3。

1.2.2病理切片分析采集的法氏囊組織用 4% 甲醛固定，由武漢塞維爾科技有限公司組織病理學分析。

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析傳播性試驗通過GraphPadPrism9.0軟件進行T檢驗及單因素方差統(tǒng)計分析，Plt;0.05 時表示差異顯著， Plt;0.01 時表示差異極顯著。

2結果

2.1存活率

統(tǒng)計同居25d后SPF雞存活率，結果見圖1，顯示同居組、GD2021-08感染組均沒有雞只死亡，存活率為 100% 。

2.2 同居后法氏囊、脾臟病變

為了探究IBDV新型變異株的傳播能力，剖殺SPF雞取法氏囊、脾臟，病變情況見圖2，可見GD2021-08感染組、同居組的法氏囊較空白對照組有明顯萎縮，三組間脾臟則無明顯病變。

分別對采集的法氏囊、脾臟稱重并分析，發(fā)現(xiàn)同居組、GD2021-08感染組的囊重比與空白對照組有顯著差異（ Plt;0.001 ），較空白對照組下降幅度明顯，脾體比與空白對照組無明顯差異，但較空白組也有所下降，結果見圖3。

囊指數(shù)（BBIX）測定結果與水平傳播能力評價見圖4。同居組與GD2021-08感染組的BBIX值相當，且均小于0.7，這表明兩組的法氏囊均出現(xiàn)萎縮情況，該分析結果與解剖結果一致。對同居組、感染組法氏囊同時進行熒光定量檢測，檢測結果顯示同居組和感染組的病毒拷貝數(shù)相當。

注：A：法氏囊；B：脾臟。

2.3 法氏囊病理切片結果

法氏囊病理切片顯示，可見IBDV新型變異株GD2021-08感染組、同居組皮髓質淋巴細胞壞死、溶解，形成空洞（黑色箭頭），伴較多未分化的上皮細胞增生（綠色箭頭），濾泡間質少量結締組織增生（紅色箭頭），伴少量炎性細胞浸潤（黃色箭頭）；而空白組法氏囊則無明顯病理損傷，正常。法氏囊病理切片見圖5。

3討論

自1957年首次在美國發(fā)現(xiàn)傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的經典株以來，該疾病迅速在全球范圍內傳播。到了20世紀80年代，IBD開始展現(xiàn)出新的流行特征[10]，世界各地陸續(xù)報告了IBDV的變異株和超強毒株的出現(xiàn)。這些超強毒株具有極高的致死率，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴重的經濟損失[5。而變異株主要在北美洲流行，自1990年以來，國內僅出現(xiàn)零星病例[1]。因此，在相當長的一段時間內，國內對IBDV變異株的關注度較低。隨著疫苗開發(fā)和防治管理的加強，vvIBDV也得到了有效的控制，對變異株的研究逐漸受到重視[12]

2017年，中國東部[5報道了一種與美國變異株不同的新型變異株[13]。這種新型變異株雖然不對雞致死，但會嚴重損傷法氏囊，破壞淋巴B細胞的發(fā)育。一旦發(fā)病，雞群會處于亞臨床狀態(tài)，導致其他疫苗接種失敗，引發(fā)免疫抑制，甚至可能引起并發(fā)或混合感染多種疾病。這種新型變異株給雞養(yǎng)殖業(yè)帶來了新的挑戰(zhàn)，迫切需要進行流行病學調查，為有效防控提供數(shù)據(jù)支持[14]。

本實驗室成功分離出一株新型變異株IBDV9。通過SPF雞致病性試驗顯示，該毒株可引起法氏囊萎縮和壞死。為了進一步評估IBDV新型變異株GD2021-08在SPF雞上的水平傳播能力，我們將感染后的雞群與未感染雞群同居飼養(yǎng)，并每天觀察SPF雞的臨床癥狀與存活情況。結果表明，同居組的雞也出現(xiàn)了明顯的法氏囊萎縮。進一步通過病理觀察顯示，同居組的法氏囊有明顯的病理損傷，包括皮髓質淋巴細胞的壞死、溶解、大量減少，上皮細胞的大量增生，結締組織的增生，以及炎性細胞的浸潤，并伴有囊腫形成。但脾臟無明顯萎縮。由于法氏囊是雞主要的中樞免疫器官，該變異毒株通過水平傳播對雞群免疫系統(tǒng)造成了巨大損傷，進一步影響了雞群的生長發(fā)育，給生產中的防控工作帶來了巨大的威脅。

4總結

本研究探討了IBDV新型變異株GD2021-08的水平傳播能力，發(fā)現(xiàn)該毒株能夠導致同居雞群的法氏囊出現(xiàn)萎縮和炎性病變，而脾臟未見明顯變化。法氏囊的這些異常變化，間接導致了雞群的生長發(fā)育障礙，同時在生產免疫防控方面衍生諸多問題。本研究成果為生產實踐中的防控工作提供了有價值的臨床參考和指導，有助于制定更為科學有效的防控策略。

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