不同干燥處理的迷迭香莖葉上、中層迷迭香酸含量測定

Determination of rosmarinic acid content in upper and middle layers of Rosmarinus officinalis L. stems and leaves under different drying treatments

WANG YuanliPEI Yunyi GUHong XU Yanfei GONG Yongwei （YuxiAgricultural Vocational TechnicalCollege，Yuxi 6531O6，China）

AbstractTocompare theefectsof differentstem/leaf positions （upper layerA，middlelayerA2），differentdrying methods （natural drying Bl， oven drying ，and different materials （leaf C1，stem C2）on the rosmarinic acid contentin rosemary，the upper and middle layers of rosemarystems and leaves were usedas raw materials.Rosmarinic acid was extracted using 70% ethanol with ultrasonic assistance，and a randomized experimental design was employed incombination with HPLC to determine therosmarinicacid content.Theresultsshowed thattherelativestandard deviation （RSD） calculated from the peak areas was 0.47% ，indicating that the established analytical method had a relatively high accuracy. The content of rosmarinic acid in A1B，C2，A2B，C2，AB，C and A treatment was 0.066 2， 0.067 9， 0.128 9 and 0.129 7 mg/mL， respectively. The rosmarinic acid contents of ， ， and treatments were O.0521，0.0573，0.1202and0.1194 mg/mL，respectively.Theresults indicated thattherosmarinic acid content extracted from stems and leaves treated with natural drying was higher than that from oven drying. The rosmarinicacid content in leaves was consistently higher than thatin stems，and among the leaves，the middle layer showed higher content than the upper layer.

KeywordsRosmarinus oficinalis L.； rosmarinic acid； ultrasonic extraction； high performance liquid chromatography

迷迭香（RosmarinusofficinalisL.）屬唇形科迷迭香屬芳香型多年生常綠灌木植物，為藥食兩用植物，可作為園林植物和經(jīng)濟(jì)作物進(jìn)行栽培[1-2]。迷迭香酸是迷迭香的主要酸性成分之一，屬于二萜類化合物3，具有抗炎、抗氧化、抑菌和抗病毒等多種生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、醫(yī)藥、動植物油脂和動物飼料等領(lǐng)域[4-6，在調(diào)節(jié)腸道微生物群落、提高機(jī)體免疫力方面具有較好的作用，具有廣闊的應(yīng)用前景7-9。現(xiàn)有的研究報(bào)道多以迷迭香的鮮葉或干葉為原料通過水蒸氣蒸餾或超聲輔助提取法進(jìn)行精油的提取，采用高效液相色譜進(jìn)行成分分析[10-]。古昆等[2]采用水蒸氣蒸餾法提取云南玉溪產(chǎn)迷迭香莖、葉中的揮發(fā)油，鑒定出25種化學(xué)成分，主要為萜類化合物。李大偉13利用超聲波輔助法對迷迭香進(jìn)行了提取與分離研究。然而對迷迭香的葉、莖分層研究報(bào)告較少。本研究對不同干燥處理后的迷迭香莖、葉進(jìn)行分層試驗(yàn)，以迷迭香酸含量為指標(biāo)，通過與標(biāo)準(zhǔn)品對比保留時間，色譜峰峰形、峰面積及提取量，比較不同莖葉部位、不同干燥方式和不同材料對迷迭香中迷迭香酸含量的影響，為進(jìn)一步精準(zhǔn)開發(fā)迷迭香活性成分資源奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料和試劑

迷迭香為玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)栽培在同一區(qū)域、統(tǒng)一管理的7年生植物；迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品（ 99.9% ，上海源葉），甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），95% 乙醇（分析純），娃哈哈純凈水。

1.2儀器設(shè)備

LC-10A高效液相色譜儀（HPLC）、shimpackVP-ODS，C-18（ 150mm×4.6mm ）色譜柱、UV2550紫外可見分光光度計(jì)：島津儀器（蘇州有限公司）；FCG3001B型電熱鼓風(fēng)干燥箱[中國·中科富祺（北京）科技有限公司]；SK5210HP超聲波清洗器（上海吉理超聲儀器有限公司）；電子天平（BT2205，北京賽多利斯儀器有限公司）；離心機(jī)（LD5-2A）；超微濾膜50x0.2um；高速多功能粉碎機(jī)C ，粉碎程度70＼～300目，永康市鉑歐五金制品有限公司）。

1.3試驗(yàn)處理

1.3.1材料處理 自然干燥：將新鮮采剪的上、中兩層材料均勻平鋪在干凈的不銹鋼托盤上，放在陰涼通風(fēng)處進(jìn)行干燥，干燥前后稱重相差 1g 即干燥結(jié)束，耗時 150h 。粉碎后，過20目篩，分別稱取3份各 1g ，備用。 5℃干燥：將新鮮采剪的上、中兩層材料均勻平鋪在干凈的不銹鋼托盤上，分別在50℃鼓風(fēng)干燥烘箱中干燥 。粉碎后，過20目篩，分別稱取3份各 1g ，備用。

1.3.2迷迭香酸提取 將分層自然干燥和烘干的莖、葉粉碎后，分別按料液比 用 70% 乙醇超聲波提取 30min ，離心 15min ，取上層清液，過濾[13-14]。殘?jiān)偬崛?次，同樣方法離心過濾，合并濾液，用 70% 乙醇定容至 50mL ，再用0.45um微孔濾膜過濾，避光保存、待測。

1.3.3最大吸收波長確定 取適量的迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品，用 70% 乙醇制成濃度為 0.5mg/mL 的迷迭香酸的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液。取儲備液 0.2mL ，用 70% 乙醇稀釋至 10mL ，利用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行光譜掃描。在 200～400nm 范圍內(nèi)進(jìn)行吸收光譜掃描，結(jié)果顯示，迷迭香酸在218、290和 327nm 處出現(xiàn)吸收峰，在 327nm 處最大吸收峰波長明顯（圖1）。因此，本試驗(yàn)選擇波長 327nm 作為迷迭香酸檢測波長。

1.3.4 色譜條件 色譜柱為shimpackVP-ODSC-18反相色譜柱（150mm×4.6mm ；柱溫 30℃，流動相為乙腈 -0.1% 磷酸 為25：75）進(jìn)樣量10uL，流速 1mL/min ；迷迭香酸波長 327nm 。在此色譜條件下， 0.2mg/mL 迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品保留時間為 5.266 min（圖2）。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1精密度評價 吸取迷迭香酸樣品溶液10uL，連續(xù)進(jìn)樣3次，分別計(jì)算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），評價建立方法的精密度。

1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 吸取迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mg ，分別定容于 10mL 容量瓶內(nèi)，配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，吸取10uL進(jìn)行HPLC測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4.3不同處理的迷迭香酸測定 采用三因素兩水平的隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，考察不同莖葉部位（A）不同干燥方式（B）和不同材料（C）對迷迭香酸含量的影響（表1）。

2 結(jié)果與分析

2.1儀器精密度評價

吸取 0.2mg/mL 迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液10uL，重復(fù)進(jìn)樣5次，5次峰面積分別3163757、3184857、3174160.3174160.3174307 和3 由峰面積計(jì)算RSD值為 0.47%（lt;1%） 。因此，本試驗(yàn)方法的精密度滿足要求。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

由圖3可知，建立的回歸方程 ，表明迷迭香酸濃度在 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3不同處理的迷迭香酸含量

利用回歸方程對迷迭香酸進(jìn)行定量分析，由表2可知，自然干燥處理的莖、葉的迷迭香酸含量均高于50℃干燥處理。葉以中層部分經(jīng)干燥處理后其峰面積及迷迭香酸含量最優(yōu)。

3結(jié)論與討論

迷迭香酸易溶于甲醇、乙醇、水，而難溶于氯仿、石油醚等有機(jī)溶液，耐高溫[15-16]。李麗華等[7探究了迷迭香酸溶解在不同溶劑中，含量隨時間和溫度的變化趨勢，結(jié)果表明，迷迭香酸在甲醇中的穩(wěn)定性最好，其次是乙醇和乙酸乙酯。本次試驗(yàn)以 70% 乙醇為溶劑，提取迷迭香酸，自然干燥處理迷迭香的葉、莖提取液中的迷迭香酸含量高于50℃烘干處理。說明高溫處理原料過程中隨著水分蒸發(fā)帶出部分迷迭香酸，從而影響其含量，可進(jìn)一步探討原料處理的最佳溫度和方式。

綜上，本試驗(yàn)以 70% 乙醇為提取劑，通過 30min 的超聲波處理，利用HPLC提取不同干燥方式處理的迷迭香的莖、葉的迷迭香酸。結(jié)果表明，迷迭香酸濃度在 0.05～0.25mg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) 為 0.47% ，儀器精密度高，從自然干燥處理的莖、葉中提取分析得到的迷迭香酸含量優(yōu)于 50℃干燥處理，葉的含量高于莖，葉以中層為最佳。超聲波輔助提取具有效率高、提取時間短等優(yōu)點(diǎn)，乙醇為溶劑，有利于分離和純化，結(jié)果穩(wěn)定性好，該方法為迷迭香植物中單項(xiàng)或多項(xiàng)活性物質(zhì)的聯(lián)合提取和進(jìn)一步研究提供參考。

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（責(zé)任編輯：胡立萍）