木棉葉總黃酮抗氧化活性研究

摘要 以抗壞血酸（VC）為陽(yáng)性對(duì)照品，采用芬頓反應(yīng)法、鄰苯三酚自氧化法等研究木棉葉總黃酮清除羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基的活性。結(jié)果表明，與VC相比，木棉葉總黃酮的抗氧化活性更高，可更高效地清除羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基，其對(duì)應(yīng)的EC50分別為1.012、4.360、0.209 μg/mL，VC的EC50分別是12.877、7.760、11.229 μg/mL。根據(jù)此結(jié)果可判斷出，在抗氧化方面木棉葉總黃酮表現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)，在抗自由基方面有較高應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞 木棉葉；總黃酮；抗氧化活性

中圖分類號(hào) R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2025）06-0168-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.06.039

Study on Antioxidant Activity of Total Flavonoids from the Leaves of Gossampinus malabarica （DC.） Merr

LIANG Yun-zhen， WEI Fang-li， DONG Pei-pei et al

（Department of Chemistry and Biological Engineering，Guangxi Normal Univerity of Nationalities，Chongzuo， Guangxi 532200）

Abstract Using ascorbic acid （VC） as a positive control， the activity of total flavonoids from Gossampinus malabarica leaves in scavenging hydroxyl radicals， superoxide anion radicals， and DPPH radicals was studied using Fenton reaction method， pyrogallol auto oxidation method， and other methods.The results showed that compared with VC， the total flavonoids in G. malabarica leaves had higher antioxidant activity and could efficiently scavenge hydroxyl radicals， superoxide anion radicals and DPPH radicals， with corresponding EC50 values of 1.012， 4.360 and 0.209 μg/mL， respectively. The EC50 values of VC were 12.877， 7.760 and 11.229 μg/mL， respectively. Based on this result， it can be concluded that the total flavonoids in G. malabarica leaves exhibit significant advantages in antioxidant properties and have high application value in combating free radicals.

Key words Leaves of Gossampinus malabarica （DC.） Merr;Total flavonoids;Antioxidation activity

黃酮為一種典型的多酚類物質(zhì)，其在很多生物體內(nèi)都存在，相關(guān)藥理研究結(jié)果表明，其表現(xiàn)出抗癌、降血脂、抗衰老等方面功能，這些功能主要是與其抗氧化性密切相關(guān)，因而很有必要對(duì)其抗氧化性進(jìn)行研究。相關(guān)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，人工合成抗氧化劑的毒性高，因而很有必要提取出自然界中的抗氧化劑，這也是目前此領(lǐng)域的研究重點(diǎn)［1-4］。

木棉葉為木棉植物的葉［5-6］，是一種傳統(tǒng)藥材，在傳統(tǒng)藥物和民間療法中得到了廣泛的應(yīng)用，在很多疾病治療方面效果很顯著，如泄瀉、痢疾、血崩等。目前關(guān)于木棉的研究主要集中在花的有效成分研究［7-8］，而有關(guān)木棉葉總黃酮的抗氧化活性的研究鮮見(jiàn)報(bào)道［9-10］。筆者采用芬頓反應(yīng)法、鄰苯三酚自氧化法等研究木棉葉總黃酮的抗氧化活性，為其實(shí)際應(yīng)用提供支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試材。木棉葉采自廣西民族師范學(xué)院。

1.1.2 試劑。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，來(lái)源于Bioszune 公司；鄰二氮菲、DPPH（CAS：1898-66-4，上海晶品）、鄰苯三酚、過(guò)氧化氫、抗壞血酸（VC）、Tris均為分析純。

1.1.3 主要儀器。UV-1601型光度計(jì)；SHB-Ⅲ型真空泵；電熱箱；PHS-3C型pH計(jì)；DKS-12型水浴鍋；KJ23B-AN型微波爐；FW 800型粉碎機(jī)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 木棉葉總黃酮的提取。按照文獻(xiàn)［9］的提取流程對(duì)木棉葉總黃酮進(jìn)行提取，即木棉葉→清洗→烘干→粉碎、過(guò)篩60目→稱重→浸提→微波處理→抽濾→收集濾液（即木棉葉總黃酮提取液）→冷藏。

1.2.2 木棉葉總黃酮濃度的測(cè)定。

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)電子天平準(zhǔn)確稱量蘆丁對(duì)照品25.0 mg置于100 mL容量瓶中，加入80%乙醇進(jìn)行混合，并充分定容，精密吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL分別置于50 mL容量瓶中，加入5%亞硝酸鈉1.5 mL，充分混合后在室溫下靜置6 min，再加10%硝酸鋁1.5 mL混合后靜置，然后加入20 mL的4%氫氧化鈉溶液，通過(guò)80%乙醇定容，充分混合后在室溫下靜置15 min，同時(shí)設(shè)置80%乙醇為空白進(jìn)行對(duì)照研究，在510 nm處檢測(cè)吸光度，對(duì)數(shù)據(jù)處理并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程為A=11.533C+0.008（R2=0.999 8）。

1.2.2.2 木棉葉總黃酮濃度檢測(cè)。取“1.2.1”木棉葉總黃酮提取液1 mL置于50 mL容量瓶，通過(guò)“1.2.2.1”方法于510 nm 處檢測(cè)出吸光度，然后根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算出樣品中總黃酮的濃度。

1.2.3 木棉葉總黃酮抗氧化活性的測(cè)定。

1.2.3.1

對(duì)羥自由基的清除作用。采用芬頓反應(yīng)法，以羅宇倩等［11］和羅超等［12］的方法為基礎(chǔ)，并進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。其中每管加入0.5 mL的7.50 mmol/L鄰二氮菲和等量的PBS溶液（0.75 mmol/L，pH 7.4）以及硫酸亞鐵銨，充分混勻，接著向其中加入0.5 mL 0.1%過(guò)氧化氫溶液，以超純水為未損傷管，將1.0 mL各濃度的提取液加入各樣品管中，未損傷管以超純水代替，充分混合處理后在37 ℃條件下水浴處理60 min，然后536 nm處測(cè)吸光度。同時(shí)利用VC溶液進(jìn)行對(duì)照，羥自由基清除率按以下公式計(jì)算。

清除率=［（A樣品-A損傷）/（A未損傷-A損傷）］×100%

式中：A樣品為樣品管吸光度；A未損傷為未損傷管吸光度；A損傷為損傷管吸光度。

1.2.3.2

對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用。采用鄰苯三酚自氧化法，主要參考文獻(xiàn)［13-14］的方法并進(jìn)行一定的修改。在試驗(yàn)過(guò)程中先量取3.5 mL Tris-HCl試劑，加至1.0 mL樣品溶液中，充分混合處理后水浴20 min，接著加入0.5 mL鄰苯三酚溶液，混合處理后于25 ℃水浴反應(yīng)4 min，再加入3滴8 mol/L HCl溶液，以便結(jié)束反應(yīng)，于325 nm處測(cè)定吸光度（A樣品）。接著通過(guò)超純水代替樣品測(cè)空白管，所得結(jié)果記錄為A0，對(duì)照管則加入10 mmol/L HCl溶液，吸光度記作A對(duì)照。設(shè)置的陽(yáng)性對(duì)照為VC溶液，超氧陰離子自由基清除率通過(guò)以下公式計(jì)算。

清除率=［1-（A樣品-A對(duì)照）/（A0-A對(duì)照）］×100%

1.2.3.3

對(duì)DPPH自由基的清除作用。主要依據(jù)文獻(xiàn)［15-16］的方法，并進(jìn)行適當(dāng)改進(jìn)。先通過(guò)電子天平準(zhǔn)確稱量39.4 mg DPPH，向其中加95%乙醇并定容至500 mL，適當(dāng)混合后形成0.2 mmol/L DPPH溶液，放置到4 ℃環(huán)境中。對(duì)樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋后，形成濃度梯度的系列樣品液。加入1.0 mL樣品液到樣品管中，接著向其中加4.0 mL DPPH溶液，設(shè)置95%乙醇為對(duì)照，以超純水作空白。將3組均放置在30 ℃水浴環(huán)境中處理30 min，通過(guò)超純水調(diào)零，在517 nm處測(cè)吸光度。設(shè)置同樣的陽(yáng)性對(duì)照，DPPH自由基清除率通過(guò)以下公式計(jì)算。

清除率=［1-（A樣品-A對(duì)照）/（A0-A對(duì)照）］×100%

式中：A樣品為樣品管吸光度；A0為空白管吸光度；A對(duì)照為對(duì)照管吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 木棉葉總黃酮對(duì)羥自由基的清除作用

從圖1可以看出，隨著木棉葉總黃酮濃度的提高，其對(duì)羥自由基的清除率持續(xù)升高。木棉葉總黃酮濃度在0.352～2.464 μg/mL時(shí)清除作用很明顯，且表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。經(jīng)計(jì)算，木棉葉總黃酮對(duì)羥自由基清除率為50%的EC50為1.012 μg/mL，而VC的EC50為12.877 μg/mL，由此可知，在同樣的條件下木棉葉總黃酮可更好地清除羥自由基，比VC有顯著的性能優(yōu)勢(shì)。

2.2 木棉葉總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

從圖2可以看出，隨著木棉葉總黃酮濃度的提高，清除超氧陰離子自由基的能力不斷提高。木棉葉總黃酮濃度在2.600～13.000 μg/mL時(shí)，其清除超氧陰離子自由基的作用很顯著。經(jīng)計(jì)算，木棉葉總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基清除率為50%的EC50為4.360 μg/mL，而VC的EC50為7.760 μg/mL，由此可知，在同樣的條件下，前者可更好地清除超氧陰離子自由基，比VC有顯著的性能優(yōu)勢(shì)。

2.3 木棉葉總黃酮對(duì)DPPH自由基的清除作用

從圖3可以看出，木棉葉總黃酮濃度在0.129～0.775 μg/mL時(shí)可以清除DPPH自由基，且存在顯著的量效關(guān)系。經(jīng)計(jì)算，木棉葉總黃酮對(duì)DPPH自由基清除率為50%的EC50為0.209 μg/mL，而VC的EC50為11.229 μg/mL，由此可知，在同樣的條件下木棉葉總黃酮可更好地清除DPPH自由基，其活性水平更高。

3 結(jié)論

該試驗(yàn)研究了木棉葉總黃酮清除羥自由基、超氧陰離子自由基、DPPH自由基的活性，發(fā)現(xiàn)其清除這3種自由基的活性均高于VC，其EC50分別為1.012、4.360、0.209 μg/mL，其對(duì)不同類型自由基的清除性能存在差異，對(duì)比結(jié)果為清除DPPH自由基＞羥自由基＞超氧陰離子自由基。總體上看木棉葉總黃酮的抗氧化性能高，且不會(huì)產(chǎn)生顯著副作用，有明顯的應(yīng)用性能優(yōu)勢(shì)，表現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。

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基金項(xiàng)目 廣西壯族自治區(qū)一流專業(yè)建設(shè)點(diǎn)（生物科學(xué)專業(yè)）項(xiàng)目（3950010513）；廣西壯族自治區(qū)教育廳第四批民族院校特色學(xué)科（民族生態(tài)學(xué)）建設(shè)項(xiàng)目（3950010401）；廣西民族師范學(xué)院自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2023SBNGCC001）。

作者簡(jiǎn)介 梁云貞（1973—），女，壯族，廣西龍州人，副教授，從事生物化學(xué)的教學(xué)與研究工作。*通信作者，教授，碩士生導(dǎo)師，從事植物學(xué)及植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)的教學(xué)與研究工作。

收稿日期 2024-07-08