胡蘆巴果膠抗氧化活性研究

摘要 ［目的］研究胡蘆巴果膠的體外抗氧化活性。［方法］以抗壞血酸（VC）為陽性對照，用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除試驗來評價胡蘆巴藥材水提醇沉得到的胡蘆巴果膠的抗氧化活性。［結果］胡蘆巴果膠、抗壞血酸清除DPPH自由基的IC50分別為0.340、0.016 mg/mL。［結論］胡蘆巴果膠具有抗氧化活性，在相同濃度下胡蘆巴果膠的抗氧化活性略小于抗壞血酸的抗氧化活性。

關鍵詞 胡蘆巴果膠；抗氧化活性；DPPH自由基

中圖分類號 R284 文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2025）06-0165-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.06.038

Study on Antioxidant Activity of Fenugreek Pectin

WEI Yan-ni， FANG Yu， WU Peng et al

（Hanzhong Vocational and Technical College，Hanzhong，Shaanxi 723000）

Abstract ［Objective］To study the in vitro antioxidant activity of fenugreek pectin. ［Method］Ascorbic acid （VC） was used as a positive control， and 1，1 -diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine （DPPH） free radical scavenging experiment was used to evaluate the antioxidant activity of fenugreek pectin obtained by the water extraction and alcohol precipitation of fenugreek. ［Result］The IC50 of fenugreek pectin and ascorbic acid scavenging DPPH free radical were 0.340 and 0.016 mg/mL， respectively. ［Conclusion］Fenugreek pectin has antioxidant activity. The antioxidant activity of fenugreek pectin is slightly less than that of ascorbic acid at the same concentration.

Key words Fenugreek pectin;Antioxidant activity;DPPH free radicals

胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）為豆科植物胡蘆巴的干燥成熟種子。胡蘆巴又名苦豆、香豆子、蘆巴、胡巴、季豆、蘆巴子、小木夏等［1-3］，主要分布在地中海東岸、中東、伊朗高原、喜馬拉雅等地。胡蘆巴性溫，味苦，歸腎經，具有溫腎助陽、散寒、止痛的功效，臨床上常用于治療腎陽不足、下焦虛冷、陽痿滑泄、精冷囊濕、小腹冷痛、寒疝腹痛、寒濕腳氣、足膝冷痛等癥［4-6］。藥理研究表明胡蘆巴具有降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、抗腫瘤、抗氧化、減肥通便等藥理作用［7-9］，在降血糖、降血脂方面的研究已較為深入并證明其確有療效，現已廣泛應用于臨床對應的疾病中，而對于胡蘆巴的其他藥理活性研究還不夠深入。近年來，胡蘆巴的抗氧化活性引起了國內外學者的廣泛關注，孫國棟等［10］對胡蘆巴的提取物進行了較為系統的研究，并對不同地區胡蘆巴的醇提物及胡蘆巴大孔樹脂提取物進行抗氧化活性研究，結果表明，胡蘆巴各提取物具有清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的作用；邵明昱［11］對胡蘆巴種子總黃酮提取、分離、抑菌及抗氧化活性進行了研究，結果發現，胡蘆巴總黃酮的抗氧化活性很強，在相同濃度下比抗壞血酸的活性更強。

近年來，天然抗氧化劑發展迅速，綠色、天然、純植物提取物逐漸得到人們的青睞，在植物中選擇和提取天然抗氧化劑已成為國內外科研人員研究開發的熱點［12］。胡蘆巴作為我國傳統中藥，同時又作為藥食同源之品［13］，并且資源豐富、價格適中，其在安全性、經濟性和普及性上具有很大的優勢。該試驗旨在研究胡蘆巴果膠的抗氧化活性，以抗壞血酸（VC）為陽性對照，采用DPPH自由基清除試驗評價胡蘆巴果膠的抗氧化活性，為胡蘆巴在食品、藥品、保健品、化妝品等方面應用提供依據，也為胡蘆巴的進一步研究和開發提供科學參考。

1 材料

1.1 試驗儀器與設備 日本島津UV-2550型紫外可見分光光度儀（上海善可精密儀器有限公司）；電子萬用爐（上海科恒實業發展有限公司）；超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）；AR1140分析天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；QE-300克型萬能粉碎機（浙江屹立工貿有限公司）；循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）。

1.2 試驗材料 胡蘆巴藥材購買于西安萬壽路藥材市場，經陜西中醫藥大學藥學院胡本祥教授鑒定為豆科植物胡蘆巴（Trigonella foenum-graecum L.）的干燥成熟種子；抗壞血酸（VC），批號W13DO1XL，科昊生物工程有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），批號D9133，sigma公司；無水乙醇，天津天力化學試劑有限公司；水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 樣品的制備

2.1.1 供試品的制備。取胡蘆巴藥材于萬能粉碎機中打粉，稱量胡蘆巴粉末約100 g置于3 000 mL的圓底燒瓶中，加1 000 mL 純凈水提取1 h，過濾，濾渣同法再提取一次，過濾，2次濾液合并得總濾液900 mL，將合并的提取液濃縮至400 mL，加95%乙醇3 400 mL使藥液的含醇量達85%，靜置過夜，抽濾，濾液回收乙醇；濾渣用無水乙醇浸泡，進行脫水處理，濾渣陰干，稱量，得胡蘆巴果膠粗品9.31 g，4 ℃冷藏備用。

精密稱量胡蘆巴果膠粗品49.94 mg于25 mL容量瓶中，用純凈水溶解，并置于超聲波清洗器超聲1 h，定容至刻度，4 ℃冷藏備用。

精密稱量DPPH 19.5 mg用無水乙醇溶解，定容25 mL的容量瓶中，即得DPPH標準儲備溶液，4 ℃冷藏備用。

2.1.2 對照品的制備。精密稱量抗壞血酸15.2 mg于250 mL棕色容量瓶中，用純凈水溶解，定容至刻度，4 ℃冷藏備用。

2.2 DPPH自由基活性測定試驗 以抗壞血酸（VC）作為陽性對照，用以下公式［14-16］計算胡蘆巴果膠粗品對DPPH自由基的清除率：

清除率=1-［（Ai-Aj）/A0］×100%

式中：Ai為加供試品與DPPH溶液反應在517 nm的吸光度；Aj為僅加供試品溶液在517 nm的吸光度；A0為僅加DPPH溶液在517 nm的吸光度。

2.3 DPPH標準曲線的繪制 分別精密移取DPPH標準儲備溶液0.8、1.0、1.2、1.5、2.0 mL于5 mL容量瓶中，使用純凈水將其定容至刻度線，靜置30 min，分別測定5個溶液在517 nm 的吸光度，記錄所得吸光度。

以DPPH質量濃度（mg/mL）為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制DPPH標準曲線，如圖1所示，得到標準曲線回歸方程為y=2.276 8x+0.005 0（R2=0.999 5），線性范圍為0.124 8～0.312 0 mg/mL。

2.4 陽性對照品清除DPPH自由基試驗 用移液槍分別精密移取抗壞血酸0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL的一次性試管中，分別加2 mL的DPPH標準儲備溶液，再依次將各試管用純凈水補足至5 mL，于黑暗處反應30 min，分別測其吸光度，并計算抗壞血酸對DPPH自由基的清除率，結果如圖2所示。

根據圖2中曲線方程求出清除率為50%時所對應的抗壞血酸濃度即IC50，通過計算可知抗壞血酸IC50為0.016 mg/mL；從圖2還可看出抗壞血酸對DPPH自由基的清除率與其濃度有關，抗壞血酸的濃度越大，其對DPPH自由基的清除率越大。

2.5 胡蘆巴果膠清除DPPH自由基試驗 用移液槍分別精密移取胡蘆巴果膠溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL于10 mL的一次性試管中，分別依次加2 mL的DPPH標準儲備溶液，再依次將各試管用純凈水補足至5 mL，于黑暗處反應30 min，分別測其吸光度，并計算胡蘆巴果膠對DPPH自由基的清除率，結果如圖3所示。

根據圖3中曲線方程求出清除率為50%時所對應的胡蘆巴果膠濃度即胡蘆巴果膠IC50，通過計算得知胡蘆巴果膠的IC50為0.340 mg/mL。從圖3還可以看出胡蘆巴果膠對DPPH自由基的清除率與其濃度有關，胡蘆巴果膠的濃度越大，對DPPH自由基的清除率越大。但結合抗壞血酸的IC50分析可知，胡蘆巴果膠的自由基清除能力小于抗壞血酸，即胡蘆巴果膠的抗氧化活性小于抗壞血酸。

2.6 胡蘆巴果膠、抗壞血酸與DPPH反應時間對DPPH自由基清除率的影響 分別用移液槍精密移取胡蘆巴果膠溶液0.4 mL（質量濃度為0.159 9 mg/mL）、抗壞血酸1.0 mL（質量濃度為0.012 1 mg/mL）置于一次性試管中，加2 mL的DPPH標準儲備溶液，用純凈水補足至5 mL，分別在0、10、20、30、40、50、60 min測其吸光度，計算清除率，結果如圖4所示。

從圖4可以看出，胡蘆巴果膠、抗壞血酸與DPPH反應時間對DPPH自由基清除率有影響，并且在0～30 min影響較為顯著，但在30 min以后清除率基本趨于穩定，所以，在試驗的過程中，反應時間可以嚴格控制在30 min左右。

3 結論與討論

該試驗采用抗壞血酸（VC）為陽性對照，用DPPH自由基清除來評價胡蘆巴藥材果膠的抗氧化活性，結果顯示抗壞血酸、胡蘆巴果膠清除DPPH自由基的IC50分別為0.016和0.340 mg/mL。從試驗結果可以看出胡蘆巴果膠確有抗氧化活性作用。

此外，通過試驗的反復操作發現，此試驗的結果與壞境、供試品儲存日期、反應時間等均有著密切的關系，實驗室室內的光強度對試驗影響較大，在整個試驗進行的過程中，VC和胡蘆巴提取物胡蘆巴果膠與DPPH反應必須是在黑暗的條件下進行才能保證試驗的穩定性，供試品和對照品在試驗過程中必須現配現用，其中DPPH只能穩定存在4 h，供試品溶液在配制后要及時放入冰箱中冷藏備用，以防止其變質；胡蘆巴果膠在用水溶液溶解后可能因為有雜質存在，有部分不溶的現象，在進行試驗時避免搖晃，吸取上清液進行測量；另外，反應時間對結果也有較大的影響，在進行穩定性試驗時應該準確地記錄每一個時間段的吸光度，在對樣品進行測量時，應嚴格把握樣品的反應時間，以確保試驗數據準確，從而使試驗具有重復性。

參考文獻

［1］ 姜文月.胡蘆巴降血糖成分分析及降血糖作用機制研究［D］.長春：吉林大學，2015.

［2］ 李琳，高建德，陳正君，等.胡蘆巴化學成分及其藥理作用研究進展［J］.甘肅中醫藥大學學報，2018，35（2）：98-101.

［3］ 楊梅，朱家勇，顏克序，等.胡蘆巴多糖提取工藝的研究［J］.廣東藥學院學報，2014，30（4）：444-447.

［4］ 鐘贛生.中藥學［M］.3版.北京：中國中醫藥出版社，2012：395.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：242.

［6］ 陳靈，鄧昌波，吳金虎.不同產地胡蘆巴的揮發性成分分析［J］.醫藥導報，2015，34（5）：667-669.

［7］ 王玲玲.胡蘆巴甾體皂苷的提取精制及其半乳甘露聚糖的利用研究［D］.天津：天津科技大學，2009.

［8］ 周吉銀，江明金，周世文，等.胡蘆巴調脂有效成分及其作用機制研究概述［J］.中藥藥理與臨床，2014，30（3）：157-160.

［9］ 劉穎，鄭彧，郭忠成，等.中藥胡蘆巴的研究進展［J］.實用藥物與臨床，2017，20（1）：98-101.

［10］ 孫國棟，李新霞，李琳琳，等.胡蘆巴提取物化學成分含量測定及體外抗氧化研究［J］.新疆醫科大學學報，2013，36（6）：772-776.

［11］ 邵明昱.胡蘆巴種子總黃酮提取分離、抑菌及抗氧化活性的研究［D］.烏魯木齊：新疆農業大學，2012.

［12］ 呂雙雙，李書國.植物源天然食品抗氧化劑及其應用的研究［J］.糧油食品科技，2013，21（5）：60-65.

［13］ 王慧竹，孫悅，陳盟杰，等.響應面法優化胡蘆巴多糖超聲提取工藝及體外抗氧化活性的研究［J］.吉林化工學院學報，2017，34（1）：8-15.

［14］ 韓煜.薔薇科果實類5種藥材的抗氧化活性比較及多酚成分分析［D］.合肥：安徽中醫藥大學，2016.

［15］ 馮改利，鄧翀，董媛媛.柚子內外果皮的抗氧化活性研究［J］.陜西中醫學院學報，2012，35（5）：92-93.

［16］ 馮改利，宋小妹，鄧翀，等.DPPH法篩選大血藤抗氧化活性有效部位［J］.陜西中醫，2011，32（9）：1233-1235.

作者簡介 魏艷妮（1995—），女，陜西咸陽人，講師，碩士，從事中藥質量標準化控制技術研究。*通信作者，教授，碩士生導師，從事中藥質量控制標準及中藥規范化栽培技術研究。

收稿日期 2024-07-02