綿羊季節性發情性狀核心基因和關鍵lncRNA的篩選與分析

摘 要： 旨在篩選與季節性發情相關的核心基因和長鏈非編碼 RNA（long non-coding RNA，lncRNA）。本研究選取2～3歲空懷的中國美利奴羊和湖羊母羊（乏情期、發情期和發情間期各3只），采集卵巢組織樣本，采用 RNA-seq 技術篩選差異表達的基因（differentially expressed genes， DEGs）和 lncRNAs，并通過 GO、KEGG 富集分析、PPI 分析及 ceRNA 網絡構建鑒定與繁殖性能相關的核心基因和 lncRNAs。結果，構建了6個不同生理狀態下的 RNA 文庫，篩選得到 1 495 個差異表達基因（differentially expressed genes， DEGs）和 454 個差異表達 lncRNAs，其中共性 DEGs 和 lncRNAs 分別為 313 個和 435 個，特有 DEGs 和 lncRNAs 分別為 1 182 個和 19 個。GO 和 KEGG 富集分析顯示，共性 DEGs 在細胞分裂和細胞周期等方面顯著富集，而差異表達的 lncRNAs 靶基因富集于細胞內信號轉導及負調控 RNA 聚合酶 II 啟動子轉錄等。特有 DEGs 在細胞遷移的正向調節中富集，lncRNAs 的靶基因集中于細胞間粘附和整合素介導的信號通路等。通過 PPI 篩選出 19 個核心基因，主要富集在卵母細胞減數分裂和細胞周期信號通路。聚類分析結果顯示，核心基因在乏情期表達量較高。ceRNA 網絡進一步揭示基因在細胞周期等信號通路的富集。RT-qPCR 驗證結果與高通量測序一致。篩選出 19 個核心基因和 28 個 lncRNAs，并發現 42 個 lncRNA-miRNA-mRNA 靶向關系，為理解綿羊季節性繁殖的分子機制提供了潛在調控靶點。

關鍵詞： 綿羊；季節性發情；RNA-seq；核心基因；lncRNA

中圖分類號：

S826.3"""" 文獻標志碼：A"""" 文章編號： 0366-6964（2025）03-1264-14

收稿日期：2024-08-28

基金項目：兵團重點領域科技攻關項目;兵團農業創新工程（NCG202221）;中央引導地方科技發展資金項目;省部共建綿羊遺傳改良與健康養殖國家重點實驗室建設（2022CA002）

作者簡介：楊 楊（1989-），女，河南西平人，碩士，主要從事動物分子遺傳與育種研究，E-mail：1010975408@qq.com

*通信作者：代 蓉，主要從事動物分子遺傳與育種研究，E-mail：dairong1@163.com;周 平，主要從事動物分子遺傳與育種研究，E-mail：zhpxqf@163.com

Screening and Analysis of Core Genes and Key lncRNAs for Seasonal Estrus Traits in Sheep

YANG" Yang1， LI" Liangyuan2， WAN" Pengcheng1， LU" Shouliang¹ ， LIU" Changbin¹ ，

YANG" Hua1， WANG" Limin1， DAI" Rong^1*， ZHOU" Ping^1*

（1.State Key Laboratory of Sheep Genetic Improvement and Healthy Production，

Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science， Shihezi 832000，" China;

2.Institute of Traditional Chinese Medicine and Ethnical Medicine Resources， Guizhou

University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025，" China）

Abstract：" The aim of this study was to screen core genes and long non-coding RNAs related to seasonal estrus. Ovarian tissue were collected from 2 to 3 years old， non-pregnant female Chinese Merino and Hu sheep （3 sheep per group， each in anestrus， estrus and interestrus）. RNA-seq technology was employed to identify differentially expressed genes and lncRNAs. GO and KEGG enrichment analyses， protein-protein interaction （PPI） network analysis and ceRNA network construction were performed to identify core genes and lncRNAs related to reproductive performance. RNA libraries for 6 distinct physiological states were constructed. There were 1 495 differentially expressed genes （DEGs） and 454 differentially expressed long non-coding RNAs （lncRNAs） be identified. Among these， 313 DEGs and 435 lncRNAs were common， while 1 182 DEGs and 19 lncRNAs were unique. GO and KEGG enrichment analyses revealed that common DEGs were significantly enriched in the processes related to cell division and the cell cycle， whereas the target genes of differentially expressed lncRNAs were enriched in intracellular signaling pathways and negative regulation of RNA polymerase II promoter transcription. Unique DEGs were primarily associated with the positive regulation of cell migration. The target genes of lncRNAs were enriched in cell adhesion and integrin-mediated signaling pathways. There were 19 core genes identified by protein-protein interaction network analysis， which were predominantly enriched in oocyte meiosis and cell cycle pathways. These core genes exhibited higher expression level during the anestrus phase than those in interestrus. Further analysis of the ceRNA network highlighted the enrichment of genes in cell cycle-related signaling pathways. RT-qPCR results were consisted with the RNA-seq results. A total of 19 core genes and 28 lncRNAs were identified， along with 42 lncRNA-miRNA-mRNA interactions， providing potential regulatory targets for understanding the molecular mechanisms of seasonal reproduction in sheep.

Keywords： sheep; seasonal estrus; RNA-seq; core gene; lncRNA

*Corresponding authors：" DAI Rong， E-mail： dairong1@163.com; ZHOU Ping， E-mail： E-mail：zhpxqf@163.com

綿羊繁殖效率是影響養羊效益的重要指標，但大多數綿羊品種都表現出季節性發情特性^［1］，不僅影響了母羊的生產力，同時也顯著影響了規模化養羊和全年均衡供應羔羊肉生產^［2-3］。因此，解析綿羊季節性發情機制對于理解和提高綿羊的繁殖力、實現常年自然發情至關重要。越來越多的研究已經證明，BMPRIB^［4］、BMP15^［5］ 和 GDF9^［6］ 等是影響綿羊繁殖性能的主效基因，隨著高通量測序技術的發展，為從多組學角度深入理解畜禽特性形成機制提供了技術思路，并取得了較多的研究成果^［7-8］。Yu 等^［9］利用全轉錄組測序技術研究雞胚卵巢的退化，鑒定出 22 個與卵巢發育和退化相關的基因。Mao等^［10］從豬卵巢組織鑒定出 DEGs 585 個和差異表達 lncRNA 398 個，利用功能注釋和富集分析發現它們與催乳素受體活性、誘導液泡形成的線粒體吞噬和減數分裂紡錘體有關，還發現 lncRNA MSTRG.3902.1 的靶基因 NR5A2 參與調節卵泡發育、排卵和雌激素分泌。Miao和Qin^［11］比較了陶賽特和小尾寒羊的卵巢組織全轉錄組，發現差異表達 lncRNAs 顯著富集在催產素信號通路。Wang等^［12］比較了小尾寒羊和新吉細毛羊的卵巢組織轉錄組，發現mRNA HSD17B1和 lncRNA MSTRG 表達水平存在顯著差異；其中，小尾寒羊中HSD17B1 低水平表達，導致雌二醇、孕酮和促腎上腺皮質激素的分泌量降低，進而減少顆粒細胞凋亡，維持卵泡發育；MSTRG.28645 過表達增加了黃體生成激素受體、卵泡刺激素受體和雌激素受體β的表達水平，從而影響了雌激素分泌。Feng等^［13］從高、低產羔數湖羊的卵巢組織鑒定出76個DEGs和5個差異表達lncRNA，顯著富集在免疫應答、肌動蛋白絲的切斷和吞噬作用等條目中，推測參與免疫應答和溶酶體相關的基因與排卵過程調節相關。但從分子水平研究與綿羊季節性發情相關的編碼基因和非編碼元件，特別是它們相互作用網絡的研究報道仍然非常有限。

本研究以季節性發情的中國美利奴羊和常年發情的湖羊為研究對象^［14］，探討繁殖特性不同的綿羊品種中卵巢組織轉錄組與季節性發情的關系，挖掘核心基因，進一步了解 lncRNA 在綿羊卵巢中的調控作用，提升對綿羊季節性發情調控機制的理解。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

中國美利奴羊來自新疆農墾科學院試驗羊場，湖羊購買于新疆鑫寶牧業。根據生產記錄選擇體況和年齡（2～3歲）相近，生殖生理狀態相似的空懷母羊。所有羊只都在新疆農墾科學院試驗羊場同圈飼喂管理。試情公羊每天早晚兩次試情，確定母羊的發情狀態，記錄發情周期，以母羊第一次接受交配當天為發情周期的第1天。在春季，連續 36 d（約2個發情周期）以上不發情確定進入乏情期。每只羊均經過大于兩個發情周期的觀察，以確保羊只健康且有正常繁殖能力。

1.2 試驗試劑

OMEGA 的 RNA 提取試劑盒（R6734-01）、TaKaRa 反轉錄試劑盒（RR047A）、羅氏定量檢測試劑盒（0470751601）購自北京北方生物技術研究所。

1.3 方法

1.3.1 卵巢樣品采集

羊發情階段的判定標準：乏情期是春季連續兩個情期無發情表現，發情期指發情周期的第1 天，發情間期是發情周期的第13天。嚴格按照發情周期時間點，屠宰后收集中國美利奴羊在春季乏情期（M_A，n=3）、秋季發情間期（MBD，n=3）、秋季發情期（MBE，n=3）以及湖羊春季發情間期（HAD，n=3）、春季發情期（HAE，n=3）和秋季發情期（HBE，n=3）的卵巢組織，液氮速凍，－80 ℃保存。

1.3.2 樣品總RNA提取及測序

采用 Trizol 法提取卵巢組織總 RNA。從同一分組 3只羊的卵巢樣本中各取3 μg 質檢合格的 RNA，混合成 6個樣品池。分別從 6 個混池中取3 μg RNA 樣品生成測序文庫^［15］。卵巢 RNA 的質量測定、文庫構建和測序由北京康普森生物技術有限公司采用 Illumina HiSeq 2000 系統進行。

1.3.3 轉錄組數據分析

通過 FASTQ 對每個樣品池的原始數據（raw reads）進行過濾，利用 HISAT2 軟件將質控后的 clean reads 比對到綿羊的參考基因組（Oar_v3.1）上。使用 HTSeq-count（v0.6.0）對轉錄本和基因表達量進行分析；利用 StringTie 軟件將 mapped reads 進行轉錄本拼接，鑒定 lncRNA，包括篩選和潛在編碼能力分析，限定條件分別為：選擇長度≥200 bp，exon 個數≥2，FPKM（fragments per kilobase of transcript per million fragments mapped）≥0.1 的轉錄本和利用 CPC、CNCI 和 CPAT 三種編碼潛能的分析方法評估 lncRNA^［16］；使用順式作用（lncRNA 鄰近100 kb）和反式作用（LncTar 軟件）兩種方法預測 lncRNA 的靶基因。采用 edgeR 方法對基因和轉錄本的表達量進行差異分析，差異分組為：M_A vs. MBD、M_A vs. MBE、M_A vs. HAD、M_A vs. HAE、M_A vs. HBE，以log2FC≥2和P-adjustlt;0.05 為閾值，獲得 DEGs 和差異表達 lncRNAs。使用 DAVID 數據庫（https：//david.ncifcrf.gov/summary.jsp）進行富集分析，以 Plt;0.05 篩選出顯著的 Gene Ontology（GO）條目和 Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）信號通路^［17］。使用STRING 數據庫（http：//string-db.org/，交互閾值gt;0.4）預測并繪制蛋白互作網絡（protein-protein interactions， PPI），利用 Cytoscape（v3.9.1）的 Cytohubba 插件^［18］最大聚集中心（Maximal Clique Centrality，MCC）算法篩選出 PPI 網絡中前 10 位作為 hub 基因，結合 MCODE 插件挖掘核心功能模塊及對應基因^［19］。通過 MiRanda（http：www.miranda.orgl）預測 lncRNA-miRNA 和 miRNA-mRNA 的靶向關系，利用共同靶向 miRNA 的 lncRNA 和 mRNA 構建出競爭性內源RNA（ceRNA）關系對^［20-21］，以斯皮爾曼相關系數大于 0.7、顯著性 Plt;0.05 為條件進行篩選，使用 Cytoscape 軟件（v3. 9. 1）進行結果可視化處理。

1.3.4 實時熒光定量 PCR（RT-qPCR）

分別從各樣品池取 1.5 μg RNA。TaKaRa 反轉錄試劑盒進行 cDNA 第一鏈的合成，羅氏 Light Cycler 480 實時熒光定量 PCR 系統進行 RT-qPCR。擴增體系（20 μL）：模板 cDNA 1.0 μL，上、下游引物（10 μmol·L^-1）各0.5 μL，LightCycler 480 SYBR Green I Master 10 μL，ddH2O 8 μL。在測序結果中隨機各挑選 3 個 DEGs 進行 RT-qPCR 驗證，GAPDH 作為內參基因，引物序列見表1。反應條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s，60 ℃ 20 s，45 個循環。應用 2^-ΔΔCt 法計算 mRNA 的相對表達量，使用Graphpad Prism 9 軟件進行可視化。

2 結 果

2.1 RNA-seq 數據比對概況

raw datas 過濾后，共獲得 83.27 Gb 的 clean reads。6個文庫的 clean reads 與綿羊參考基因組比對（表2、圖1），mapping 率在 94.40%～95.93%，Q30 值均在 92.86% 以上。共鑒定到682個 lncRNAs（圖1C）。

2.2 不同分組間差異表達 lncRNAs 和 DEGs 的篩選

經差異比對，在 M_A vs. MBD、M_A vs. MBE、M_A vs. HAD、M_A vs. HAE、M_A vs. HBE 五個差異分組中（表3）分別獲得 466、463、475、471 和 473 個差異表達 lncRNAs，2 140、2 110、3 082、1 093 和 2 174 個 DEGs。

2.3 不同差異分組中共有和特有的差異表達 lncRNAs 和 DEGs

如圖 2 所示，在 5 個比較組中，綿羊乏情期與發情間期（M_A vs. HAD和M_A vs. MBD）共有的 DEGs 和差異表達 lncRNAs 數量分別為 1 335 和 448 個，乏情期與發情期（M_A vs. HAE、M_A vs. MBE 和 M_A vs. HBE）共有的 DEGs 和差異表達 lncRNAs 分別為 473 和 441 個。以上不同對比組的 DEGs 和差異表達 lncRNAs 有 1 495 和 454 個，其中共有的是 313 和 435 個，特有 1 182 和 19 個。

2.4 RT-qPCR 驗證分析

為驗證 RNA-seq 結果的可靠性，隨機挑選3個 DEGs 進行 RT-qPCR 驗證。結果顯示（圖 3），A2M、E114 和 FSHR 的 RT-qPCR 結果與轉錄組測序結果表達趨勢相似，表明測序數據結果可靠，可以用于后續研究。

2.5 DEGs 的功能富集分析

不同差異分組中共有的 DEGs 313個被富集到 87 個 GO 條目和 28 個 KEGG 通路，其中顯著富集在生物學過程（biological process，BP）的細胞分裂和細胞周期，細胞組分（cellular component，CC）主要包括細胞質和細胞外隙，分子功能（molecular function，MF）主要是 ATP 結合和 DNA 結合等（圖 4A）。KEGG 富集分析顯示（圖 4B），顯著富集在中性粒細胞胞外誘捕網形成和細胞周期。特有的1 182個DEGs富集在212個GO條目和63個KEGG通路，顯著富集在 BP 的細胞遷移的正向調節和對 ERK1 和 ERK2 級聯的正向調節，CC 主要包括膜的組成部分和質膜，MF 主要有鈣離子結合和蛋白質同源二聚化活性（圖 4C）。KEGG 顯著富"" 集在細胞因子-細胞因子受體相互作用和 PI3K-Akt 信號通路等（圖 4D）。共有和特有的 DEGs 都顯著富集在 CC 的細胞外隙和胞外區，以及中性粒細胞胞外誘捕網形成通路。

2.6 不同差異分組中共有和特有差異 lncRNAs 靶基因的功能富集分析

共有的 435 個差異表達 lncRNAs 靶基因預測有 659 個，富集到 73 個 GO 條目和 15 個 KEGG 通路，其中顯著富集在細胞內信號轉導和對 RNA 聚合酶 II 啟動子轉錄的負調控等 BP，CC 主要包括細胞膜和質膜的組成部分，MF 主要集中在 ATP 結合和絲氨酸/蘇氨酸/酪氨酸蛋白激酶活性等（圖 5A）。KEGG 顯著富集在磷脂酶 D 信號通路和 ECM 與受體的相互作用等信號通路（圖 5B）。特有的 19 個 lncRNAs 的 76 個靶基因，主要富集在細"" 胞間粘附和整合素介導的信號通路等 GO 條目（圖 5C），細胞粘附分子和 TNF 信號通路等 KEGG 通路（圖5D）。共有和特有 lncRNAs 的靶基因顯著富集于 GO 條目的細胞基質粘附，KEGG 的 ECM 與受體的相互作用。

2.7 共有DEGs 和 lncRNAs 靶基因的 PPI 和核心基因分析

利用 STRING 數據庫對不同差異分組共有998 個 DEGs 和 lncRNAs 的靶基因構建 PPI 網絡（圖 6A）。Cytohubba 計算蛋白質相互作用最緊密的 10 個 hub 基因（圖 6B），MCODE 篩選 PPI 中重要蛋白質互作功能模塊，其中得分最高的核心功能模塊由 18 個基因組成（圖 6C、6D）。篩選出的 hub 基因與 MCODE 獲得的核心功能模塊內基因重合，其中 BUB1B、TOP2A、BUB1、CDCA8、CCNB2、DLGAP5、KIF2C、KIF11、SPAG5 和 CDC20 可能是影響綿羊季節性發情的核心基因。

2.8 特有DEGs 和 lncRNAs 靶基因的 PPI 和核心基因分析

對不同差異分組特有的 1 239 個 DEGs 和 lncRNAs 的靶基因構建 PPI 網絡（圖 7A）。Cytohubba 篩選出綿羊季節性發情相關的 10 個 hub 基因（圖 7B），進一步通過 MCODE 分析確定了 14 個組成核心功能模塊的基因（圖 7C、7D），重疊的基因包括 NCAPG、CDK1、AURKA、KIF20A、PRC1、TPX2、SMC2、ESPL1、ECT2 和 CDCA8，其中 CDCA8 同時被識別為共有 DEGs 和靶基因的核心基因。

2.9 核心基因的表達模式和染色體上的分布

共有和特有DEGs 和lncRNAs靶基因的 19 個核心基因分布在綿羊的 11 條染色體上，其中 1 號常染色體上分布最多（圖 8）。這些核心基因在 KEGG 通路中顯著富集于卵母細胞減數分裂和細胞周期等通路。使用 TBtools 軟件對 19 個核心基因的 FPKM 表達量進行聚類分析（圖9），發現 MBD 和 MBE 首先聚到一起，再依次向 HAD、HAE、HBE 和 M_A 聚集，表明同一品種、同一季節的發情間期和發情期的基因表達模式更相似。核心基因在乏情期的表達水平高于發情間期和發情期。

2.10 ceRNA網絡與功能富集分析

從預測得到的 lncRNA-miRNA-mRNA 關系對中，以rgt;0.7和 Plt;0.05 為閾值，構建了與綿羊季節性發情相關的 ceRNA 網絡（圖 10）。該網絡由 42 條靶向相互作用組成，涉及 12 個核心基因、28 個 lncRNA和 19 個 miRNA。這 12 個核心基因與靶基因在細胞周期信號通路中顯著富集，GO 條目則顯著富集于 CC 的核糖核蛋白復合物，BP 的染色體凝聚的正向調節，MF 的 ATP 結合和微管結合等相關功能類別。

3 討 論

季節性繁殖是動物適應環境變化的表現^［22］，其形成的內在機制一直是研究的熱點。有研究表明，季節性發情與光周期調節通路密切相關，穩定變化的光周期通過褪黑素既可以介導下丘腦甲狀腺激素調節下的促性腺激素釋放激素神經元的變化，又可以介導 Kisspeptin 等繁殖相關神經遞質的變化^［23］。綿羊作為一種重要的家畜，大部分綿羊品種都表現出季節性發情特性^［24-25］，成為影響綿羊高效繁殖的主要限制性因素^［26］。因此，深入研究綿羊季節性繁殖的內在機制對于提高綿羊繁殖效率具有重要意義。

本研究選取繁殖力有明顯差異的中國美利奴羊和湖羊，對其卵巢組織進行 RNA-seq 測序。結合綿羊發情周期的二期分法，即黃體期和卵泡期，作為分析框架^［27］。選擇卵巢處于相對靜止狀態的乏情期與發情周期的發情間期進行比較（M_A vs. HAD和M_A vs. MBD），篩選出影響排卵后黃體形成、發育至最大的 DEGs 1 335 個和差異表達lncRNAs 448個。乏情期與發情期（M_A vs. HAE、M_A vs. MBE 和 M_A vs. HBE）對比結果顯示，篩選出對黃體消失、卵泡發育和排卵過程有潛在影響的 DEGs 473 個和差異表達 lncRNAs 441 個。結合韋恩圖分析，比較了綿羊乏情期與不同繁殖狀態，篩選出在黃體活動和卵泡發育中共同發揮作用的 DEGs 313個，差異表達 lncRNAs 435 個；單獨發揮作用的 DEGs 1 182 個，差異表達 lncRNAs 19 個。

為了深入理解這些差異表達背后的生物學意義，進一步開展了基因差異表達分析和富集分析等，篩選出了19個與繁殖力差異相關的核心基因，其中 7 個基因在卵母細胞減數分裂、細胞周期和孕酮介導的卵母細胞成熟等繁殖相關信號通路中顯著富集（Plt;0.01）。核心基因中的CDC20 是同源染色體分離的關鍵調控因子，通過影響減數分裂后期促進復合物的活性，促進 Ⅱ 期姐妹染色體分離。研究發現，CDC20 蛋白表達量的降低會導致小鼠受精卵幾乎無法正常發育，失活會引起胚胎死亡^［28-29］。BUB1 作為紡錘體檢查點的平臺蛋白，可通過直接作用或形成復合物的形式，調控其他關鍵的紡錘體檢查點蛋白，如 CDC20 等，進而影響細胞周期的進程^［30］。Shabbir等^［31］對不同發育階段（包括 1、3和8 月齡）湖羊卵巢的 lncRNAs 和 mRNA 進行全基因組測序分析，發現 CDC20 和 CDK1 是影響卵巢發育的重要基因。CDK1 是細胞周期 G2/M 期轉換和 DNA 損傷檢驗點的關鍵調控因子^［32］。CDK1 激活啟動AURKA 參與的有絲分裂過程，被激活的 AURKA 能夠與 CDK1 相互作用，促進有絲分裂的進行，并參與紡錘體形成和中心粒分裂^［33］。BUB1B 是紡錘體裝配檢驗點的核心部件，能夠保證有絲分裂的精準進行^［34］。Wu 等 ^［35］發現，CCNB2 在 G1 期合成后表達量驟降，其缺失會導致 G2/M 檢查點失效，進而引起細胞的劇烈增殖。ESPL1 是一種分離酶，最初在真菌中發現，編碼一種參與細胞周期的蛋白質，在染色體分離和細胞分裂中起著關鍵作用^［36］。

近年來，研究發現哺乳動物基因組約 70% 被轉錄，但實際上能編碼蛋白質的只有約 2%，其余被轉錄為非編碼 RNA^［25］。這些非編碼 RNA 可通過轉錄、轉錄后調控、表觀遺傳修飾等影響基因和蛋白的表達，并與卵巢的生殖功能和內分泌功能密切相關^［37-38］。為了深入探究綿羊季節性繁殖的機制，本研究發現其中 12 個核心基因存在lncRNA-miRNA-mRNA 靶向關系。因此，針對以上核心基因構建了 ceRNA 網絡，預測 lncRNA 與季節性繁殖核心基因之間的靶點組合，進而探討差異表達 lncRNA 在綿羊發情調控過程中的潛在作用。GO 和 KEGG 通路分析發現，14 個差異表達 lncRNAs 均靶向分子功能是 ATP 結合相關的蛋白質編碼基因 TOP2A、BUB1B、KIF11、KIF20A、BUB1 和 SMC2。ATP 結合參與卵子發生的調控^［39］。7 個 lncRNAs 靶向細胞周期信號通路相關基因。細胞周期包括 DNA 復制和分裂，對細胞存活、增殖以及組織平衡和發育至關重要^［40］。細胞周期進程主要由 CDKs 和細胞周期蛋白驅動和調控^［41］。本研究篩選到與細胞周期相關的蛋白質編碼基因 CDCA8、CDC20、CDK1 和 CCNB2，在中國美利奴羊乏情期的表達水平高于其他繁殖時期。

4 結 論

季節性發情特性的形成可能與卵母細胞的發育過程存在密切關聯。本研究篩選出 19 個核心基因和 27 個 lncRNA，并構建了基于核心基因的 ceRNA 網絡，為后續開展機制研究提供科學基礎。

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（編輯 郭云雁）