冷凍精液稀釋液保護劑成分探究

劉一錦

（賀蘭縣農牧漁業局，寧夏賀蘭 750200）

冷凍精液稀釋液保護劑成分探究

劉一錦

（賀蘭縣農牧漁業局，寧夏賀蘭 750200）

為了長時間的保存種畜精液并且能夠擴大精液的劑量，在鮮精中加入一定的保護溶液，即通常所說的“稀釋液”。盡管目前稀釋液的種類較多，其目的都是為了保護精子有一個適于的存活環境，它需要維持適合的滲透壓和電解質平衡，保證精子細胞膜的完整不受到損害，維持精清的環境，能供給精子營養，提高其耐低溫性，抗凍性，精子的活力和頂體完整，降低精子畸形，因此在稀釋液中常加入一些保護劑成分。

冷凍精液稀釋液； 保護劑

1 糖類

糖類對于精子營養作用是補充精子的能量消耗。如在稀釋液中加葡萄糖、果糖，可為精子提供能量，糖類物質是維持活力的能源，目前稀釋液中常用的有蔗糖、葡萄糖、果糖。應該注意到的是不同畜種在對糖類選擇上有所不同，也有1—2種并用，普遍認為以果糖更好，但是果糖價格貴，在大批量凍精生產中，要盡可能適量給與補充。糖類對精子在低溫情況下有保護作用，其機理目前尚未清楚。牛的精液稀釋液中以糖溶液為基礎液，在國內常用的有12%蔗糖、3%葡萄糖和2.5%果糖。

2 卵黃

國內使用較為普遍，因為卵黃中脂蛋白、卵磷脂類對精細胞在受到降溫和冷刺激時可以起到較好的保護作用，目前對保護作用的解釋有兩種，一是精子自身所含有的卵磷脂類為縮醛磷脂，其融點高，受到低溫影響時發生凝固而使精子遭受冷休克，而卵磷脂能夠替代精細胞中縮醛磷脂，使用含卵黃比含磷脂的稀釋液對精子的存活更有利。另一種解釋的是精子遭受冷休克，頂體蛋白會受到破壞，稀釋液中加入卵黃可以防止精子損失頂體蛋白。稀釋液中卵黃的比例一般在15～20%，稀釋液中加入卵黃后充分攪拌；卵黃的來源應是來自健康雞場的新鮮雞蛋。

3 抗凍劑

在0～10℃區間時精細胞的代謝和活動力都很低，這是維持生命的最好溫區，在冷凍精液技術開發前，被廣泛采用。而在正常動物體溫—0℃區間時精子的代謝能力降低，活力減弱，緩慢的降低溫度對精子的存活力沒有不良的影響。將精液從體溫狀態下緩慢降至-15℃左右溫度保存可便于長途運輸。

各種試驗證明在精液稀釋液中添加乙二胺四乙酸（EDTA）、丙三醇（甘油）、二甲基亞砜、低濃度甲醛（0.025%）可作為抗凍劑，在這其中甘油仍是公認的一種較理想的抗凍劑。甘油在冰點（0℃）以下，甘油的理化特性具有溶于水不宜發生結晶、吸水性強和降低水溶液冰點的特點；當精液冷凍時，主要受到危害是冰晶從精細胞原生質中抽去的水，使細胞造成脫水狀態，發生不可逆的變化死亡，而甘油可以減少和降低這種對精細胞的損害作用，牛冷凍精液稀釋液中添加甘油量，一般以精液稀釋后最終甘油濃度在3.5～5.0%之間為宜。

4 緩沖劑（調整pH值）

精子在副睪中處于弱酸，射精后副性腺分泌物偏堿中和，射出后的精液pH在7.0左右，精子呼吸、活動等代謝產物可影響精液pH，緩沖劑能夠起到調整酸堿度（pH）的作用，防止pH值過大或過小酸或堿過大，常用的有檸檬酸鈉、磷酸二氫鈉（鉀）、三羥甲基甲烷（Tris），這些對精子代謝性酸中毒和酶活動反應具有良好的緩沖作用，國內目前稀釋液中常用的基礎液是2.9%的檸檬酸鈉溶液，其pH接近精液并且與精液基本等滲透壓，國外很多國家在稀釋液中添加Tris對提高冷凍精液質量有較好的作用。

5 非電解質

副性腺分泌物的電離度，比副睪中精液高很多，射出后可能會使精子短時間失去電荷發生凝結現象，因此稀釋液中添加非電解質物質緩和副性腺分泌物的電離程度，常用的非電解質有各種糖類，還有氨基乙酸等，有的稀釋液有糖類，也適當可加入氨基乙酸。

6 抑菌物質

為抑菌稀釋液中添加抗菌素，應該注意到添加抗菌素的量是否足夠。抗菌素最好實現用現添加，國外有建議，在應用前6h內添加抗菌素。國內目前用青、鏈霉素較普遍，每100ml稀釋液中加青、鏈霉素5～10萬IU。

7 抗氧化物質

精子生精過程中的各抗氧化酶活性相互協調、相互影響。抗氧化酶作為一個完整的抗氧化體系保證精子的發生。生精過程中，各酶的活性并不是處于一個恒定水平，而是隨著生精細胞發育與分化的不同階段或周期呈現有規律性的動態變化，在雄性動物曲細精管不同的生精上皮周期 SOD 活性水平并不相同。生精細胞中抗氧化酶mRNA的水平隨雄性動物不同日齡及不同的生精上皮周期而呈現階段性特異性。與其相關的添加成分主要包括鋅、硒、銅、鈣和鎂和維生素C維生素B12和維生素C以及氧化物歧化酶（SOD）等，它可以進入細胞并具有抗自由基鏈式反應的作用，從理論上優于超氧化物歧化酶（SOD），用來治療由于自由基損傷所致的各種疾病。

8 結語和展望

維生素在精液保存中的應用研究具有廣闊的前景，尤其對于提高人工授精的精子受精率也有非常重要意義。但各種維生素在不同家畜精液保存中應用的研究報道結果不盡一致，還需要進一步的深入研究。另外，此前的研究大都集中在單一維生素對精液保存的效果，而很少涉及到兩種或更多種維生素同時添加對精子質量的影響。因為維生素B12、維生素E和C在精液保存過程中的作用機理不同，而且各種維生素在精液保存中所起的有利作用也有所不同，如果研究將多種維生素同時應用于精液保存，勢必會更有利于精液的長期保存。查閱文獻發現提及亞硒酸鈉維生素E對牛冷凍精液影響的實驗性資料甚少，但就理論依據如前面所指出，仍具有可行性。以此為筆者展開探究向冷凍精液的Tris卵黃稀釋液中添加了不同濃度的維生素和微量元素對精子的活力、精子的畸形、精子的頂體和存活時間都有一定積極的影響，對維持精子線粒體螺旋狀排列結構起重要作用，維持精子頂體細胞膜的機能，防止細胞、組織免受氧化物損害。也可被認為是一種營養補充劑，促進輔酶Q的合成。