三峽庫區道地藥材木香中12種真菌毒素的測定與分析

摘要：目的：建立超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC-MS/M）測定木香藥材中12種真菌毒素的分析方法，并利用該方法對51批來自三峽庫區生產企業和種植基地的樣品進行檢測分析。方法：溶劑為70%甲醇溶液，樣品經過提取超聲后，用HLB小柱凈化；色譜柱為Waters Atlantisd C18色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm），質譜條件為電噴霧電離源（ESI）和多反應監測模式（MRM）。結果：12種真菌毒素標準曲線線性關系良好（R>0.995），方法的檢出限在0.1～3.8μg/kg之間，高、中、低3個不同濃度加標回收率為81.6%～100.5%，相對標準偏差（RSD，n=6）為1.88%～6.81%。在51份樣品中，真菌毒素的檢出率為9.8%；檢出率最高的真菌毒素是ZEN，為9.8%，其次為T-2和FB1，均為3.9%，其他毒素檢出率相對較低。結論：該方法檢測快速、結果精準，可用于中藥材樣品中多種真菌毒素的檢測分析。除了藥典規定的黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮外，還應重點監督三峽庫區道地藥材中伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和T-2毒素這三種真菌毒素的污染現狀。

關鍵詞：三峽庫區；超高效液相色譜-串聯質譜法；道地藥材；真菌毒素

中圖分類號：R282文獻標志碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1674-4977.2025.01.001

基金項目：重慶三峽醫藥高等專科學校重點實驗室項目（Sys20210030）：三峽庫區道地藥材木香、黃精、陳皮和太白貝母真菌毒素安全性質量標準研究。

三峽庫區常年溫度適宜，濕度較大，為植被提供了較好的生長條件，但這種環境也加大了庫區中藥材被污染的風險[1]。在濕度高的地區，中藥材在處理環節中可能因為干燥不徹底、儲藏不當等因素受到真菌污染，進而影響其藥用價值，嚴重時還會危害人的生命安全[2]。因此，本研究以木香為研究對象，對三峽庫區道地藥材中12種真菌毒素進行檢測分析。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

TSQ Series超高效液相-質譜聯用儀（美國Waters公司）；AB204S型天平（萬分之一，瑞士梅特勒托利多公司）；TurbovapⅡ型自動吹氮儀（瑞典Biotage公司0；CNW Poly-Sery HLB Pro SPE柱（60 mg，3 mL/100 pcs，上海安譜公司）。

真菌毒素混合標準溶液（青島普瑞邦生物工程有限公司）：黃曲霉毒素B1（AFB1，0.502μg/mL）、黃曲霉毒素G1（AFG1，0.503μg/mL）、黃曲霉毒素B2（AFB1，0.502μg/mL）、黃曲霉毒素G2（AFG2，0.503μg/mL）、玉米赤霉烯酮（ZEN，5.03μg/mL）、T-2毒素（T-2，50.93μg/mL）、伏馬毒素B1（FB1，10.0μg/mL）、伏馬毒素B2（FB2，10.04μg/ mL）、伏馬毒素B3（FB3，10.18μg/mL）、嘔吐毒素（DON，50.01μg/mL）、赭曲霉毒素A（OTA，0.500μg/mL）、赭曲霉毒素B（OTB，50.06μg/mL）。甲醇、乙腈等試劑均為色譜級（迪馬科技有限公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

準確移取標準溶液適量，用50%乙腈稀釋并定容，配制成質量濃度分別為0.0502μg/mL、0.0502μg/ mL、0.0503μg/mL、0.0503μg/mL、0.5093μg/mL、1.001μg/mL、1.004μg/mL、1.018μg/mL、0.503μg/ mL、0.050μg/mL、0.5006μg/mL、0.5001μg/mL的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、T-2、FB1、FB2、FB3、ZEN、OTA、OTB、DON混合標準溶液，并于-4℃條件下備用。

1.2色譜和質譜條件

色譜條件：采用Waters Atlantisd C18（150 mm×2.1 mm，1.7μm）為色譜柱。水（A）-甲醇（B）為流動相，梯度洗脫程序為：0～1.0 min，流動相B為15%；1.0～3.0 min，流動相B為15%～70%；3.0～5.1 min，流動相B為70%～ 90%；5.1～8.0 min，流動相B為90%；8.0～8.1 min，流動相B為90%～15%；8.1～10 min，流動相B為15%。柱溫為25℃，流速為0.2 mL/min，進樣量為5μL。

質譜條件：ESI掃描方式為正負離子掃描。離子源溫度為300℃，毛細管溫度為350℃；ESI+模式下毛細管電壓為+4.0 kV，ESI-模式下毛細管電壓為-2.0 kV；12種真菌毒素質譜優化參數見表1。

1.3樣品的制備

稱取樣品固體粉末5 g，精密加入甲醇（體積分數為70%）溶液25 mL，超聲處理30 min，離心5 min。精密量取上清液5 mL，加水稀釋至20 mL。取3 mL混合液通過HLB柱，后用3 mL甲醇洗脫，在40℃氮氣下緩慢吹至近干，用乙腈（體積分數為50%）溶液稀釋至1 mL，過濾后進行測定。

2結果與分析

2.1線性關系、檢測限（LOD）和定量限（LOQ）的考察

精密移取1.1項下的混合標準溶液適量，用乙腈（體積分數為50%）溶液稀釋并定容，配制成系列梯度混合標液，以各目標物質量濃度對應的峰面積進行最小二乘線性回歸繪制標準曲線，并根據斜率和平方相關系數（R2）對結果進行評價。此外，根據3倍信噪比（S/N=3）計算LOD，10倍信噪比（S/N=10）計算LOQ。12種真菌毒素的線性方程、相關系數、線性范圍、檢出限和定量限結果見表2。各真菌毒素在一定濃度范圍內線性關系良好（R2>0.995）。各真菌毒素的LOD為0.1～3.8μg/kg，LOQ為0.3～8.5μg/kg。

2.2回收率實驗

稱取一定質量的空白樣品木香，添加適量真菌毒素混合標準溶液，制成不同濃度水平的樣品，計算方法的回收率（見表3）。12種真菌毒素的加標回收率范圍為81.6%～100.5%，相對標準偏差（RSD）為6%～6.81%，說明方法回收率良好。

2.3方法的精密度

稱取空白基質的樣品各6份，加入混合標準溶液4.0 mL，制成精密度樣品溶液進行測定。12種真菌毒素含量的RSD為0.3%～2.7%，表明精密度良好。

2.4樣品溶液的穩定性

取空白基質加標供試品溶液1份，分別于0、4、8、12、16、20、24 h進行測定。12種真菌毒素含量的RSD為0.3%～2.1%，表明樣品溶液在24 h內穩定。

2.5樣品的測定

利用已建立的方法對三峽庫區51批木香藥材進行測定（檢出的結果見表4），共檢出陽性樣品5份，檢出率為9.8%。其中，FB2毒素的檢出平均值最高，為12.05μg/kg，其次為T-2、FB1和ZEN，分別為5.83μg/ kg、1.58μg/kg和0.69μg/kg。檢出率最高的真菌毒素是ZEN，為9.8%，其次為T-2和FB1，均為3.9%。綜上，木香的真菌毒素污染情況值得關注，在關注毒性較強的四種黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的同時，仍然需要重點監督藥材中伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和T-2毒素這三種真菌毒素。

3結束語

本文建立了同時測定三峽庫區道地藥材木香中12種真菌毒素的分析方法。結果表明，該方法檢測快速、結果準確、操作簡單，適用于基質復雜的中藥材中多種真菌毒素的檢測。

參考文獻

[1]敦靜怡.三峽庫區消落帶土壤氮垂直遷移轉化特征研究[D].重慶：重慶三峽學院，2023.

[2]張鑫，賀儀，劉素娟，等.陳皮“陳久者良”原因探究[J].食品科技，2017，42（1）：90-95.

作者簡介

王文婷，女，1992年出生，工程師，碩士，研究方向為藥品質量檢測。

賀靈芝，女，1986年出生，工程師，碩士，研究方向為中藥質量分析，155303935@qq.com。

（編輯：李鈺雙，收稿日期：2024-06-27）