生豬宰前口蹄疫檢測技術探究及應用

摘要：口蹄疫嚴重影響畜牧業的健康發展和人身健康，危害公共衛安全，對口蹄疫病毒的檢測方法有多種，但使用準確快捷的檢測方法鑒別感染活病毒和注射滅活疫苗動物，防止FMD的發生、活畜檢疫等方面都是十分必要的，采用非結構蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗進行口蹄疫監督檢驗，對生豬口蹄疫免疫信息能夠作出正確的判斷，對免疫工作具有積極的推動作用。

關鍵詞：生豬；宰前；檢測技術；探究

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒導致的以偶蹄動物（牛、水牛、牦牛、綿羊、山羊、豬及所有野生反芻和豬科）為主均易感染的一種急性、熱性高度傳染性疫病，為人畜共患病，被世界動物衛生組織（WOAH）列為必須報告的動物傳染病，我國農業農村部發布明確規定《一、二、三類動物疫病病種名錄》為一類傳染病及《人畜共患傳染病》中列為人畜共患病。口蹄疫在國際貿易中被世界各國所關注，影響國際貿易的往來。

1 口蹄疫的流行病學

口蹄疫于1514年首次在意大利發現，口蹄疫傳播快發病率高，易造成巨大的經濟損失，曾廣泛流行于世界各國，一般幼畜的易感性較老畜大，特別是哺乳的犢牛和仔豬常呈惡性，死亡率較高，病畜是主要傳染源，甚至在出現癥狀前帶病排毒，可通過分泌物、排泄物排毒，特別是發病初期排毒量最大、毒力最強，病豬以破潰的蹄水泡皮病毒最多，其次是呼出的氣體、糞便，甚至豬牛精液也含有病毒，并能傳染疾病，本病的感染途徑主要是消化道，特別是口腔黏膜，此外還可經眼結膜、鼻黏膜、乳管、外生殖器黏膜以及損傷的皮膚而感染。病畜及其產品的流動調運，被污染的車船、水源、牧地、飼養工具、飼料等以及人員和非易感動物都是重要的傳播媒介，空氣也是一種傳播媒介，近年來隨著我國畜牧業和對外貿易的發展，口蹄疫暴發流行的危險也相應增加。

2 口蹄疫的危害和對其防控措施

動物的疫病是影響其產品質量安全的重要因素，動物疫病、特別是重大動物疫病及人畜共患病一直被認為是威脅人類生存與健康，阻礙社會及經濟發展的最主要危害之一。動物疫病的防治是關系到國家食品安全和公共衛生安全， 動物疫病監測工作是貫徹落實《中華人民共和國動物防疫法》，全面提升獸醫公共衛生服務和為社會負責的服務水平，口蹄疫高致病禽流感等16種是我國優先防治的動物疫病，加強重大動物疫病和人畜共患病的防控，強化風險管理，強化源頭防治，從而有效的控制、凈化、消滅重點疫病。對重點動物疫病的監測工作，農業農村部制定頒布了《國家動物疫病監測與流行病學調查計劃（2021—2025）》（農牧發〔2021〕11號）、《全國畜間人畜共患病防治規劃》（2022—2030），省、市縣都做出了部署，要求做好動物疫病的普查和監測工作，為人畜健康和畜牧業發展及社會經濟可持續性發展的重要保證。加強動物疫病的防控，做好人畜共患病的源頭監管，保證畜牧業生產安全、公共安全和國家生物安全，推動構建人類衛生健康共同體，為獸醫衛生事業全面融入國家公共衛生體系，推動畜間人畜共患病防治工作，落實關鍵防治措施，實施科學精準防治和有效防控。重大動物傳染病嚴重影響了動物源性食品衛生與獸醫公共衛生，認識、研究動物傳染病的現狀和發展趨勢，并充分發揮獸醫公共衛生的第一防線作用，諸城市嚴格執行《中華人民共和國動物防疫法》《重大動物疫情應急條例》《病害動物和病害動物產品生物安全處理規范》和農業農村部制定的各種動物疫病防治技術規范，加強動物傳染病的監測，通過監測信息平臺隨時掌握動物傳染病（包括人畜共患病）分布及流行情況，以便及時制定必要的防治措施，對病害動物及其產品進行無害化處理，避免傳播、蔓延，同時為制定科學管理方法和措

施提供依據，對保障畜牧業的發展和人類的健康都有十分重要的意義。

我國一直高度重視口蹄疫疫病的防控工作，積極開展防制，采取“早、快、嚴、小”的措施，為做好動物疫病的防控、凈化、撲滅工作，出臺了法律法規和有關規定，如《中華人民共和國動物防疫法》《口蹄疫疫病防治技術規范》《突發重大動物疫情應急預防案》等，為了做好口蹄疫疫病的早發現、早處理，國內外科技研究人員經過多年來的努力，將口蹄疫診斷技術從最早的病毒分離鑒定到血清學試驗再到分子生物學技術，逐漸實現敏感特異、快捷方便，又經濟的檢測技術[1]。諸城市是全國畜牧養殖業大市，2023年諸城市已連續十七年榮獲全國生豬調出大縣榮譽稱號，其中全市生豬存欄126.6萬頭、出欄261萬頭，諸城有7家生豬屠宰企業，年屠宰生豬近400萬頭。口蹄疫是一種對人畜危害嚴重的重大動物疫病，傳播迅速快，可形成大流行，給養豬業造成巨大經濟損失，并影響當地的地方經濟發展，造成社會的恐慌和威脅著人身健康，給人民生活造成困難。在某些流行過程中口蹄疫病毒還可發生變異，也給防控和消毒帶來困難。為此，諸城市畜牧業發展中心作為諸城市畜禽屠宰行業主管單位，為保證進入流通市場的畜產品質量，確保屠宰企業出廠的產品質量安全，加強動物疫病監督檢測，到目前為止，諸城市屠宰企業出廠的產品未發生過質量安全事件。

3 生豬宰前口蹄疫的優選檢測方法及應用

口蹄疫檢測方法分為病原學檢測法和血清學檢測法。病原學主要檢測法：ELISA（OIE標準方法）、RT-PCR、RIHA和病毒分離鑒定；血清學主要檢測法：中和試驗、液相阻斷酶聯免疫吸附試驗、非結構蛋白ELISA檢測法、IHA。諸城市充分發揮科技引領作用，緊跟時代的發展，不斷學習國內外先進的動物疫病防控技術和措施，對動物疫病的檢測方法進行試驗比對，探討快速、方便、準確、經濟、最適宜的動物疫病的檢驗檢測技術方法，為保證屠宰動物及其產品質量安全合格做出了應有的貢獻，根據試驗比對分析和具體實際工作，最終確定生豬宰前口蹄疫病毒檢測最佳的方法為3ABC-I-ELISA試驗檢測技術。非結構蛋白3ABC抗體間接ELESA檢測方法不但可以檢測隱性感染動物，而且可以區分感染動物和免疫動物，將感染動物和隱性帶毒動物與疫苗免疫動物加以區分，能夠對產地動物口蹄疫免疫和感染情況作出評價，為口蹄疫的防控工作提供科學的依據。在對生豬屠宰企業入場的生豬進行動物疫病的監督檢驗中，做到逢宰必檢，確保所屠宰的生豬健康，出廠的產品合格。諸城市畜牧業發展中心嚴格按照《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》標準NYT541—2002和《獸醫實驗室生物安全管理規范》等技術標準規范對全市7家生豬屠宰企業所屠宰的400多萬頭生豬按批次5%的比例抽檢（每批次至少抽檢2頭）。樣品制備取動物全血，按常規方法制備血清，無溶血。采用非結構蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗進行口蹄疫監督檢驗，檢驗結果合格。其具體試驗操作方法步驟：所用的主要儀器是恒溫培養箱ZCXMJC/YB-021、移液器ZCXMJC/YB-029、酶標儀ZCXMJC/YB-022；檢驗依據為本實驗室作業指導書；主要操作步驟是在血清稀釋板上將待檢血清和陽性、陰性對照按1∶21倍稀釋，陰、陽對照血清平行加兩孔，混勻；取出反應板，標記號樣品和對照的位置；將樣品和陰陽血清按次序轉移至ELISA板上，每孔100 μL，37 ℃結合30 min；取掉封板膜，每孔加滿洗滌液，洗滌5次，最后一次拍干；每孔加入1∶100的酶標抗體100 μL，封板，37 ℃結合30 min；取掉封板膜，每孔加滿洗滌液，洗滌5次，最后一次拍干；每孔加入100 μL底物，封板，37 ℃避光作用15 min；每孔加入100 μL終止液，測定波長450 nm吸光值。結果判定方法和依據是陽性對照平均值應＞0.6，陰性對照平均OD值應＜0.2，此次試驗成立。樣品效價＝（OD樣品-OD陰性）/（OD陽性-OD陰性）。效價＜0.2，為陰性；效價介于0.2～0.3之間為可疑；效價＞0.3為陽性[2]。

采用非結構蛋白3ABC抗體間接ELESA試驗進行口蹄疫監督檢驗，檢驗結果合格。檢驗報告舉例如圖1。

4 結語

我國近幾年來未發生A型口蹄疫，2022年我國口蹄疫以O型為主，疫情風險點主要存在免疫環節，對口蹄疫疫情的監測是預防疫情發生和流行的必要措施和方法，能夠對牲畜口蹄疫免疫成效作出評價，采用有效的口蹄疫病毒檢測技術方法是關鍵，檢測 FMDV 非結構蛋白 3ABC 抗體的 ELISA 方法不但可以檢測隱性感染動物，而且可以區分感染動物和免疫動物。諸城市嚴格執行農業農村部《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《獸醫實驗室生物安全管理規范》加強獸醫實驗室建設，按要求儀器設施配備標準配齊了儀器設備，建立和完善動物疫病診斷和監測實驗室，并達到國家實驗室標準，能夠按照國家、省、市動物疫病普查和監測方案的要求積極開展工作，加強對養殖場、屠宰廠動物疫病的診斷和監測及動物疫情分析評估。

參考文獻：

[1] 胡曉亮，林歡，姜騫等.口蹄疫診斷技術的研究進展[J].黑龍江畜牧獸醫，2011（17）：31-33.DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2011.17.064.

[2] 孫甲川.甘肅省四地區家畜口蹄疫流行病學調查[D].甘肅農業大學，2010.