UHPLC-MS/MS法同時(shí)測(cè)定調(diào)味品中5種脂溶性色素和5種罌粟殼生物堿的殘留量

摘要：建立了一種經(jīng)QuEChERS EMR（Enhanced Matrix Removal）-Lipid凈化結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）同時(shí)測(cè)定調(diào)味品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅5種脂溶性色素和罌粟堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、那可丁5種罌粟殼生物堿殘留量的高通量分析方法。罌粟堿、蒂巴因、那可丁和5種脂溶性色素在1～100 ng/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，定量限（LOQ）為1.0 μg/kg；嗎啡、可待因在8～100 ng/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，定量限（LOQ）為5.0 μg/kg；各化合物平均回收率為81.2%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～11.4%（n=6）。該方法簡(jiǎn)便、靈敏、穩(wěn)定、通量高、成本低，適用于香辛料調(diào)味油、火鍋底料及蘸料、麻辣燙底料等多種調(diào)味品的檢測(cè)質(zhì)控需求。

關(guān)鍵詞：QuEChERS EMR-Lipid；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；脂溶性色素；罌粟殼生物堿；調(diào)味品

中圖分類(lèi)號(hào)：TS201.2""""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A"""" 文章編號(hào)：1000-9973（2024）10-0179-07

Simultaneous Determination of Residual Amount of Five Lipid Soluble Pigments

and Five Poppy Husk Alkaloids in Seasonings by UHPLC-MS/MS Method

DING Wen-hui1， TIAN Hong-xia1， ZHU Wei-wei1， ZHANG Shuai2

（1.School of Food and Drug， Weifang Vocational College， Weifang 261000， China;

2.Anqiu Inspection and Testing Center Co.， Ltd.， Weifang 262100， China）

Abstract： A high-throughput analysis method is established for the simultaneous determination of residual amount of five lipid soluble pigments such as Sudan Red Ⅰ～Ⅳ and Para Red， as well as five poppy husk alkaloids such as papaverine， morphine， codeine， thebaine and narcotine in seasonings using QuEChERS EMR （Enhanced Matrix Removal）-Lipid purification combined with ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UHPLC-MS/MS）. Papaverine， thebaine， narcotine and five lipid soluble pigments show a good linear relationship within the range of 1～100 ng/mL， the correlation coefficients are all greater than 0.99， and the limit of quantification （LOQ） is 1.0 μg/kg.Morphine and codeine show a good linear relationship within the range of 8～100 ng/mL， the correlation coefficients are both greater than 0.99， and the limit of quantification （LOQ） is 5.0 μg/kg. The average recovery rates of each compound range from 81.2% to 104.5%， with the relative standard deviations between 2.9% and 11.4% （n=6）.The method is simple， sensitive， stable， high-throughput and low-cost， and it is suitable for the detection and quality control requirements of various seasonings such as" spice flavored oil， hotpot seasoning and dipping sauce， and Malatang seasoning.

Key words： QuEChERS EMR-Lipid; UHPLC-MS/MS; lipid soluble pigments; poppy husk alkaloids; seasoning

蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅是脂溶性偶氮類(lèi)工業(yè)染料，禁止用于食品染色。蘇丹紅及其代謝產(chǎn)物具有致癌性、遺傳毒性、致敏性；對(duì)位紅對(duì)眼睛、皮膚和呼吸系統(tǒng)有刺激性，其毒性尚不明確。由于此類(lèi)染料廉價(jià)易得、著色穩(wěn)定、添加后產(chǎn)品鮮艷光亮，故仍有不法商家在調(diào)味品中使用。罌粟殼生物堿屬于非食用違禁物質(zhì)，長(zhǎng)期食用會(huì)對(duì)人體神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)造成損害。根據(jù)整頓辦函[2011]1號(hào)和食品整治辦[2008]3號(hào)文件的要求：食品中不得檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ和罌粟殼生物堿成分。因此，建立一種先進(jìn)且通用易行的檢測(cè)方法是十分必要的。

蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅的檢測(cè)方法有薄層色譜法[1]、液相色譜法 [2-4]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 [5-6]；罌粟殼生物堿的檢測(cè)方法有氣相色譜-質(zhì)譜法[7]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8-10]。薄層色譜法重現(xiàn)性差且缺少有效的定性確認(rèn)手段；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法較液相色譜法具有更強(qiáng)的抗干擾能力，定性準(zhǔn)確、靈敏度高；較氣相色譜-質(zhì)譜法具有更高的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。目前，能夠同時(shí)測(cè)定脂溶性色素和罌粟殼生物堿殘留量的高通量檢測(cè)方法尚未見(jiàn)報(bào)道。

本研究采用增強(qiáng)型脂質(zhì)去除吸附劑（Enhanced Matrix Removal-Lipid，EMR-Lipid）QuEChERS凈化方法，一次預(yù)處理同時(shí)檢測(cè)脂溶性色素和罌粟殼生物堿殘留量，通過(guò)UHPLC-MS/MS進(jìn)行定性定量分析，方法高效準(zhǔn)確，為調(diào)味品中非法違禁添加物的檢測(cè)和質(zhì)量安全評(píng)價(jià)提供了技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1290Ⅱ高效液相色譜儀、6470三重四極桿質(zhì)譜儀（配鞘流電噴霧離子源AJS ESI，MassHunter質(zhì)譜工作站） 美國(guó)Agilent公司；ME240E分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司；HT-200多管旋渦混合儀 浙江賽德儀器設(shè)備有限公司；3K15冷凍離心機(jī) 德國(guó)Sigma公司；AS-E40UVT-R純水儀 重慶奧思德儀器設(shè)備有限公司。

乙腈、乙酸銨、甲酸（均為色譜純）：德國(guó)CNW公司；EMR-Lipid、EMR-Lipid Polish、陶瓷均質(zhì)子：美國(guó)Agilent公司；乙酸（分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；蘇丹紅Ⅰ（99.0%）、蘇丹紅Ⅱ（99.0%）、蘇丹紅Ⅲ（96.0%）、蘇丹紅Ⅳ（94.0%）、對(duì)位紅（99.9%）、蘇丹紅Ⅰ-D5（98.0%）、蘇丹紅Ⅲ-D6（98.0%）、蘇丹紅Ⅳ-D6（98.0%）：德國(guó)Dr.公司；嗎啡（100%）、嗎啡-D3（100%）、可待因-D3（100%）：美國(guó)Cerilliant公司；罌粟堿（99.9%）、可待因（100%）、蒂巴因（100%）、那可丁（99.6%）：英國(guó)政府化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室；蘇丹紅Ⅱ-D6（98.0%）：印度Clearsynth公司；實(shí)驗(yàn)室用超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)于10 mL容量瓶中，使用乙腈溶解并定容，制備1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。吸取各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別制備1 μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液及混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 樣品的制備

將粉狀及液體調(diào)味品混合均勻后，密封、標(biāo)記，于4 ℃冷藏存放；固體及半固體調(diào)味品經(jīng)粉碎后混合均勻，密封、標(biāo)記，于4 ℃冷藏存放。

1.4 樣品的前處理

1.4.1 提取

準(zhǔn)確稱(chēng)量5.0 g（精確至0.01 g）樣品于50 mL具塞離心管中，加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液150 μL。粉狀、固體及半固體樣品需提前加入5 mL H2O超聲處理5 min。加入2粒陶瓷均質(zhì)子、15 mL 0.2%甲酸乙腈溶液，渦旋5 min，超聲5 min，再次渦旋5 min，9 500 r/min離心1 min，待凈化。

1.4.2 凈化

向EMR-Lipid凈化管中加入5 mL H2O，快速振搖2 min。移取10 mL提取液至凈化管中，渦旋2 min，5 000 r/min離心1 min，移取全部上清液至EMR-Lipid Polish反萃管中，渦旋1 min，5 000 r/min離心1 min。移取5 mL上層有機(jī)相于10 mL玻璃管中，于40 ℃氮吹至干，加入1 mL 50%乙腈，復(fù)溶后過(guò)0.22 μm尼龍濾膜，待測(cè)定。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)加入法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

稱(chēng)取6份空白樣品于50 mL具塞離心管中，分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)工作液3，30，60，150，240，300 μL，加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液150 μL。參照1.4.1、1.4.2中前處理方法獲得質(zhì)量濃度分別為1，10，20，50，80，100 ng/mL的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，其內(nèi)標(biāo)濃度為50 ng/mL。

1.5 實(shí)驗(yàn)條件

1.5.1 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（3.0 mm×50 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相：A為5 mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸），B為乙腈；流速：0.5 mL/min；梯度洗脫程序：0～1.00 min，5% B；1.00～3.50 min，5%～80% B；3.50～3.60 min，80%～98% B；3.60～6.00 min，98% B；6.00～6.01 min，98%～5% B；6.01～7.00 min，5% B；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：1 μL。

1.5.2 質(zhì)譜條件

采用三重四極桿質(zhì)譜儀；檢測(cè)模式：正離子動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（+DMRM）；干燥氣溫度325 ℃，干燥氣流速7 L/min；鞘氣溫度300 ℃，鞘氣流速10 L/min；霧化器壓力276 kPa；毛細(xì)管電壓3 000 V；噴嘴電壓0 V；Delta EMV（+）400；干燥氣：氮?dú)猓慌鲎矚猓焊呒兊獨(dú)狻８骰衔锒ㄐ远侩x子對(duì)、碎裂電壓、碰撞能量及極性見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理?xiàng)l件優(yōu)化

2.1.1 提取方式的選擇

含有動(dòng)物油脂的火鍋底料、部分香辛料調(diào)味油十分黏稠，制樣冷藏后易結(jié)塊，樣品在振蕩過(guò)程中易成球狀，渦旋提取不充分。目前，多采用均質(zhì)器均質(zhì)提取的方式，但均質(zhì)后需用提取液清洗刀頭并合并提取液。多個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行前處理時(shí)，為避免交叉污染，需對(duì)刀頭充分清洗，增加了工作量和試劑使用量[11]。本研究將陶瓷均質(zhì)子（經(jīng)惰性化處理，對(duì)目標(biāo)化合物無(wú)吸附）置于離心管中，代替均質(zhì)器均質(zhì)，并對(duì)兩種方式進(jìn)行比較。選取制樣均勻的牛油火鍋底料，取樣12份，加入等量混合標(biāo)準(zhǔn)工作液200 μL，渦旋混合均勻后冷藏保存48 h。將其分成兩組：一組采用陶瓷均質(zhì)子提取，二組采用均質(zhì)器提取。提取回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、提取時(shí)間及溶劑使用量見(jiàn)表2。結(jié)果表明，一組回收率為82.2%～102.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0%～8.5%；二組回收率為55.1%～91.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為8.9%～21.7%。陶瓷均質(zhì)子提取提高了萃取效率且溶劑使用量少、提取過(guò)程簡(jiǎn)單，可最大程度地減少技術(shù)人員操作誤差，具有較好的重復(fù)性。因此，本研究選用陶瓷均質(zhì)子分散樣品。

2.1.2 凈化方式的選擇與基質(zhì)效應(yīng)

調(diào)味品中含有大量的油脂和多種色素，為降低基質(zhì)干擾且充分發(fā)揮儀器性能，需對(duì)樣品進(jìn)行凈化。目前，樣品凈化多采用QuEChERS（C18/PSA）法[7]，該法成本低、效率高、通量高、操作簡(jiǎn)便，可實(shí)現(xiàn)多類(lèi)別不同化合物的同時(shí)凈化[11]，但此法對(duì)顏色深、高脂類(lèi)樣品基質(zhì)的凈化效果不理想。本研究比較了QuEChERS EMR-Lipid凈化、QuEChERS（C18/PSA）凈化和未凈化樣品提取液的LC-MS/MS全掃描譜圖，其基質(zhì)凈化效果見(jiàn)圖1。由圖1可知，經(jīng)QuEChERS EMR-Lipid凈化后離子流圖背景潔凈度高，降低了基質(zhì)干擾，提高了方法的靈敏度和積分的準(zhǔn)確性。通過(guò)對(duì)全掃描譜圖積分，計(jì)算得出QuEChERS EMR-Lipid和QuEChERS（C18/PSA）的基質(zhì)去除率分別為94.9%和50.4%。因此，本研究選用QuEChERS EMR-Lipid法對(duì)樣品進(jìn)行凈化。

根據(jù)斜率法[12]基質(zhì)效應(yīng)公式ME（%）=（基質(zhì)標(biāo)曲的斜率/溶劑標(biāo)曲的斜率－1）×100%，若|ME|＜20%，屬弱基質(zhì)效應(yīng)；若20%≤|ME|≤50%，屬中等基質(zhì)效應(yīng)；若|ME|＞50%，屬?gòu)?qiáng)基質(zhì)效應(yīng)[11]。本研究對(duì)質(zhì)量濃度為1～100 ng/mL的基質(zhì)標(biāo)曲與溶劑標(biāo)曲分別進(jìn)樣，根據(jù)上述公式得蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、對(duì)位紅、罌粟堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、那可丁的|ME|值分別為13.2%、8.8%、9.8%、11.4%、19.7%、11.7%、14.2%、7.5%、12.6%、10.1%，均小于20%，屬弱基質(zhì)效應(yīng)，說(shuō)明凈化效果較好。

2.1.3 提取溶劑的選擇

蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅易溶于正己烷[3-4]、乙腈[5-6，9]、丙酮[13]等有機(jī)溶劑；罌粟殼生物堿可通過(guò)乙腈[9]、甲酸乙腈[8]或0.1 mol/L鹽酸[10]提取。乙腈可兼容兩類(lèi)化合物，在乙腈中添加甲酸能夠促進(jìn)目標(biāo)化合物與樣品解離，改善提取效果。本研究比較了乙腈、0.1%甲酸乙腈、0.2%甲酸乙腈、0.5%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈、2%甲酸乙腈、5%甲酸乙腈的回收率。隨著甲酸濃度的增加，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅的回收率沒(méi)有明顯改變，維持在85.6%～102.3%。罌粟堿、嗎啡、可待因、蒂巴因、那可丁的回收率見(jiàn)圖2。

由圖2可知，因嗎啡、可待因可通過(guò)內(nèi)標(biāo)校正，回收率較穩(wěn)定；而罌粟堿、蒂巴因、那可丁在甲酸含量為0.2%時(shí)回收率最高，此后隨著甲酸濃度的升高而降低，這與甲酸導(dǎo)致化合物離子化趨勢(shì)增大有關(guān)，使一部分目標(biāo)物被分配至水相中。因此，本研究選擇0.2%甲酸乙腈作為提取溶劑。

2.1.4 復(fù)溶溶劑的選擇

樣品經(jīng)鹽析后直接以乙腈相進(jìn)樣，樣液的洗脫強(qiáng)度明顯高于初始流動(dòng)相。進(jìn)入色譜柱后，擴(kuò)散到流動(dòng)相中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫，而樣液中的目標(biāo)物因強(qiáng)溶劑洗脫導(dǎo)致移動(dòng)速度快、目標(biāo)物峰形扭曲、峰展寬或峰分裂。為進(jìn)一步抑制溶劑效應(yīng)，本研究采用分取濃縮并復(fù)溶的方式，對(duì)比5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%乙腈水溶液作為復(fù)溶溶劑的回收率及溶劑效應(yīng)對(duì)峰形的影響。

由圖3中a可知，當(dāng)乙腈比例小于40%時(shí)，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅的溶解性差，回收率偏低；當(dāng)乙腈比例大于60%時(shí)，因強(qiáng)溶劑比例較高，出峰較早的嗎啡出現(xiàn)溶劑效應(yīng)，出現(xiàn)嚴(yán)重峰分裂，難以定性定量。由圖3中b可知，當(dāng)乙腈比例為50%時(shí)，可有效抑制柱外擴(kuò)散，目標(biāo)物峰形細(xì)長(zhǎng)，無(wú)峰分裂。且當(dāng)乙腈比例為50%時(shí)，目標(biāo)物的溶解性好，回收率均高于80%。因此，本研究對(duì)提取液適當(dāng)濃縮后選用50%的乙腈水溶液作為復(fù)溶溶劑。

2.2 色譜條件優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇

本研究比較了Kinetex HILIC色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）、ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（3.0 mm×50 mm，1.8 μm）、ZORBAX SB-Aq色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）的保留行為[14]。結(jié)果表明，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ、對(duì)位紅在HILIC色譜柱上無(wú)保留，這與蘇丹紅類(lèi)藥物分子中氫原子易與相鄰氮原子形成分子內(nèi)氫鍵而極性較弱有關(guān)；在SB-Aq色譜柱上能夠獲得較強(qiáng)的分離與保留，但填料粒徑過(guò)大且色譜柱較長(zhǎng)，限制了超高效液相性能的發(fā)揮，18 min左右完成進(jìn)樣；而在Plus C18色譜柱上各化合物分離及保留適中，峰形尖銳，7 min左右完成進(jìn)樣。因此，本研究選用Plus C18色譜柱。

2.2.2 流動(dòng)相的選擇及梯度設(shè)定

本研究以乙腈為流動(dòng)相（有機(jī)相部分），比較了0.1%甲酸水溶液和5 mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）作為流動(dòng)相（水相部分）時(shí)目標(biāo)物的分離效果和響應(yīng)值。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相中未添加乙酸銨時(shí)，目標(biāo)物的分離度及峰形較差；當(dāng)添加乙酸銨后，減少了次級(jí)保留，目標(biāo)物的分離度及峰形得到明顯改善，提高了響應(yīng)值。因此，本研究選用乙腈-5 mmol/L乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）作為流動(dòng)相。

因兩類(lèi)化合物的極性差別較大，故采用梯度洗脫方式。在1.00 min內(nèi)，設(shè)置95%的水相并緩慢增加有機(jī)相比例至3.50 min，使強(qiáng)極性的嗎啡保留時(shí)間在色譜柱的死時(shí)間外，保證準(zhǔn)確定量；當(dāng)罌粟殼生物堿被完全洗脫后，迅速提高有機(jī)相比例至98%并恒流2.4 min，使弱極性的脂溶性色素被快速洗脫并獲得良好的分離效果。在此條件下各化合物的色譜圖見(jiàn)圖4。

2.3 質(zhì)譜條件優(yōu)化

在正離子模式下通過(guò)全掃描獲得各化合物分子離子峰，以此為母離子優(yōu)化碎裂電壓；隨后進(jìn)行選擇離子掃描，選取豐度較高、干擾較小的離子為定量和定性離子；最后在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下優(yōu)化各子離子的碰撞電壓[15]。為進(jìn)一步提高化合物的響應(yīng)強(qiáng)度，按鞘氣溫度、鞘氣流速、噴嘴電壓、毛細(xì)管電壓、霧化器壓力、干燥器溫度、干燥器流速的順序進(jìn)一步優(yōu)化相關(guān)參數(shù)，優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。將各參數(shù)設(shè)成標(biāo)準(zhǔn)MRM采集方式并在優(yōu)化好的色譜條件下進(jìn)樣，利用設(shè)備軟件自帶的Update DMRM Method功能轉(zhuǎn)換成DMRM（動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）采集模式。DMRM采集方式只在化合物窗口寬度內(nèi)掃描，可有效減少同時(shí)采集的離子對(duì)數(shù)目并在一定程度上增加了駐留時(shí)間，使每種化合物的色譜峰所采集的點(diǎn)數(shù)不少于20～30個(gè)，保證定量的準(zhǔn)確性。因此，本研究選用DMRM采集方式，設(shè)置每條離子對(duì)的保留時(shí)間和窗口寬度[11]，各化合物的保留時(shí)間由標(biāo)準(zhǔn)MRM獲取并可在方法轉(zhuǎn)換時(shí)自動(dòng)識(shí)別；窗口寬度通常為1 min。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 線(xiàn)性關(guān)系和定量限

對(duì)質(zhì)量濃度為1，8，10，20，50，80，100 ng/mL的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行測(cè)定，由MassHunter Quantitative（B.07.00）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)完成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制，以各標(biāo)曲點(diǎn)質(zhì)量濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)，以定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，得到線(xiàn)性回歸方程。對(duì)陰性樣品加標(biāo)，以S/N≥10、精密度≤21%、回收率60%～120%為依據(jù)，得到罌粟堿、蒂巴因、那可丁和5種脂溶性色素的方法定量限為1.0 μg/kg；嗎啡、可待因的方法定量限為5.0 μg/kg，本方法能夠滿(mǎn)足殘留檢測(cè)需求。各化合物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍、線(xiàn)性方程、相關(guān)系數(shù)（r）及定量限見(jiàn)表3。在1～100 ng/mL或8～100 ng/mL范圍內(nèi)，r均大于0.99，符合方法確證要求。

2.4.2 回收率和精密度

分別向空白辣椒粉、辣椒油、火鍋底料、火鍋蘸料中添加1倍、2倍、5倍定量限標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行低、中、高三水平添加回收試驗(yàn)，平行測(cè)定6次，方法的回收率和精密度見(jiàn)表4。方法的平均回收率為81.2%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.9%～11.4%，方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析要求。

2.5 實(shí)際樣品分析

對(duì)從山東省各大超市及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)隨機(jī)采購(gòu)的60批調(diào)味品用本研究方法進(jìn)行檢測(cè)，樣品包括10批火鍋底料、10批火鍋蘸料、10批辣椒粉、10批辣椒油、10批辣椒醬、10批香辛料醬，其中1批火鍋底料檢出嗎啡3.6 μg/kg，未到定量限，其余項(xiàng)目均未檢出；檢測(cè)過(guò)程中按2倍定量限加標(biāo)質(zhì)控，回收率在80%～110%之間，保證定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3 結(jié)論

本研究建立了一種增強(qiáng)型脂質(zhì)去除凈化技術(shù)結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定5種脂溶性色素和5種罌粟殼生物堿的檢驗(yàn)方法。該方法采用QuEChERS EMR-Lipid凈化，可獲得與固相萃取相當(dāng)?shù)膬艋Ч|(zhì)去除率達(dá)94.9%。該方法前處理簡(jiǎn)單快速、回收率高、精密度好，為調(diào)味品中非法違禁添加物質(zhì)的檢測(cè)和質(zhì)量安全評(píng)價(jià)提供了技術(shù)支持。

參考文獻(xiàn)：

[1]馮華，王樣培，王世俊，等.辣椒粉中非法添加蘇丹紅色素快速檢驗(yàn)分析[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（13）：3421-3426.

[2]胡思怡，薛昆鵬，周勇，等.改進(jìn)分子印跡固相萃取——高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定辣椒制品中4種蘇丹紅含量[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2019，10（2）：494-499.

[3]苗翠.高效液相色譜法測(cè)定禽蛋中蘇丹紅殘留量[J].現(xiàn)代食品，2018（16）：124-126，141.

[4]朱浩，李小平，鄒寶波，等.分散固相萃取/高效液相色譜法測(cè)定雞蛋中對(duì)位紅與蘇丹紅染料殘留[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2013，32（11）：1379-1383.

[5]劉俊，朱呂，陸春燕，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)禽蛋中的角黃素、對(duì)位紅和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2018，9（18）：4953-4958.

[6]張艷俠，尹麗麗，薛霞，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食品中柑橘紅2號(hào)和蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ染料[J].食品工業(yè)科技，2018，39（23）：286-292.

[7]彭文浩.QuEChERs-氣質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定火鍋湯料中的罌粟堿和嗎啡[J].海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2019，25（4）：60-62.

[8]寧煥焱，黃秀麗，賴(lài)政煬，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定調(diào)味料中5種罌粟殼生物堿殘留量[J].中國(guó)釀造，2019，38（11）：190-193.

[9]張子臣，杜國(guó)輝，曹寧，等.超高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食品中罌粟殼成分[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2019，10（23）：8111-8114.

[10]花露，葉平，陸杰，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定辣條中的5種罌粟堿[J].中國(guó)調(diào)味品，2018，43（8）：142-146.

[11]劉新輝，王情情，張瑗，等.Oasis PRiME HLB凈化法測(cè)定動(dòng)物源性食品中的獸藥多殘留[J].農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量與安全，2019（5）：15-20.

[12]KITTLAUS S， SCHIMANKE J， KEMPE G， et al. Assessment of sample cleanup and matrix effects in the pesticide residue analysis of foods using postcolumn infusion in liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Journal of Chromatography A，2011，1218（46）：8399-8410.

[13]王永姣，孫曉，劉靜，等.辣椒粉中非法添加蘇丹紅的測(cè)定方法研究[J].西北藥學(xué)雜志，2017，32（6）：683-686.

[14]國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法：GB/T 19681—2005[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2005.

[15]魏莉莉，薛霞，劉艷明，等.親水作用色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蜂蜜中鏈霉素和雙氫鏈霉素殘留[J].色譜，2019，37（7）：735-741.

收稿日期：2024-04-08

基金項(xiàng)目：山東省重大科技創(chuàng)新工程項(xiàng)目（2019JZZY011014）；濰坊市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2021GX020）

作者簡(jiǎn)介：丁文慧（1988—），女，講師，博士，研究方向：食品加工與安全、教育管理學(xué)。