陳年六堡茶對Aβ25-35誘導的PC12細胞損傷的神經保護研究

摘要：通過建立β-淀粉樣蛋白25-35（Aβ25-35）誘導的PC12細胞損傷模型，以綠茶（GT）為對照，探討了陳年六堡茶（ALPT）對神經細胞的保護作用及機制。研究結果表明，Aβ25-35會導致PC12細胞的活性下降，誘發線粒體功能障礙、誘導有毒集聚物及其通路的形成。ALPT干預顯著提高了PC12細胞的存活率及其線粒體膜電位，并顯著抑制了有毒集聚物積累及其通路的形成。轉錄組分析顯示，ALPT處理組的基因表達整體趨勢與Aβ25-35組相反，上調基因與線粒體自噬、糖酵解、甘油磷脂代謝相關；下調基因主要參與細胞周期調控、核糖體功能、泛素介導的蛋白質水解及細胞衰老過程?？傮w而言，GT與ALPT均具有顯著抑制Aβ25-35誘導的PC12細胞損傷作用，在轉錄組水平上影響作用差別較大，這可能與ALPT活性成分具有更好的生物利用度有關。研究結果可為陳年六堡茶在神經退行性疾病預防和治療中的應用提供試驗依據。

關鍵詞：陳年六堡茶；β-淀粉樣蛋白25-35；PC12細胞；神經保護；線粒體功能

中圖分類號：S571.1；R741 " " " " " " " "文獻標識碼：A " " " " " " "文章編號：1000-369X（2024）06-1005-09

Neuroprotective Mechanisms of Aged Liupao Tea against Aβ25-35-induced PC12 Cell Damage

NIE Qing1， PANG Yuelan2*， WU Huan1， DING Shuqia1， ZHONG Keyu1，

LIU Zhonghua1， CAI Shuxian1*

1. National Research Center of Engineering and Technology for Utilization of Botanical Functional Ingredients， Key Lab of Education Ministry of Hunan Agricultural University for Tea Science， Changsha 410128， China; 2. Guangxi Research Institute of Tea Science， Guangxi Field Scientific Observation and Research Station for Tea Resources， Guilin 541004， China

Abstract： In this study， an Aβ25-35-induced PC12 cell damage model was established to investigate the neuroprotective effects and underlying mechanisms of aged Liupao tea （ALPT）， with green tea （GT） as a reference. The results show that Aβ25-35 significantly reduced PC12 cell viability， induced mitochondrial dysfunction， and promoted the formation of toxic aggregates and related pathways. ALPT markedly improved cell survival， increased mitochondrial membrane potential， and significantly inhibited the accumulation of toxic aggregates and the formation of related pathways. Furthermore， transcriptome analysis reveals that the overall gene expression pattern in the ALPT treatment group was the opposite to that in the Aβ25-35 group， with upregulated genes involved in mitophagy， glycolysis and glycerophospholipid metabolism， and downregulated genes associated with cell cycle regulation， ribosomal function， ubiquitin-mediated proteolysis and cellular senescence. Overall， both GT and ALPT exhibited significant protective effects against Aβ25-35-induced PC12 cell damage， though transcriptomic differences suggest that ALPT may have superior bioavailability due to its active components. This study provided experimental evidence for the potential application of ALPT in the prevention and treatment of neurodegenerative diseases.

Keywords： aged Liupao tea， Aβ25-35， PC12 cells， neuroprotective， mitochondrial function

阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）、帕金森病（Parkinson disease，PD）和亨廷頓?。℉untington disease，HD）等與衰老相關的神經退行性疾病的發病率逐年上升，給全球社會和經濟帶來了沉重的負擔[1]。研究表明，飲食干預可以通過調節腸道微生物群，改善腸-腦軸的功能聯系，進而調節大腦的認知和情感功能，延緩認知能力下降并抑制神經退行性疾病的進程[2]。飲茶有助于降低阿爾茨海默病等神經退行性疾病的發生風險[3]。大量研究證實，茶葉中的活性成分在延緩大腦衰老和提供神經保護方面具有顯著效果[4-6]。綠茶由于未經發酵，保留了鮮葉中的大部分活性成分，尤其是兒茶素和茶氨酸，能夠抑制β-淀粉樣蛋白（Amyloid β-protein，Aβ）聚集，具備抗炎、抗氧化及促進軸突生長的作用，有效延緩阿爾茨海默病的發生和發展[7-8]。其中，酯型兒茶素能夠調節超氧化物歧化酶與過氧化氫酶等抗氧化酶的活性，減少Aβ的產生，抑制Tau蛋白的過度磷酸化，并調節乙酰膽堿和谷氨酸等神經遞質的水平，從而通過多靶點、多途徑發揮神經保護作用[9]。

發酵茶，尤其是黑茶，具有顯著的抗氧化、抗炎、改善脂代謝和腦保護活性[10-13]。然而，關于發酵茶特別是黑茶的神經保護作用方面研究相對較少。本研究選用了陳年六堡茶，探索其在神經保護中的潛在機制。

PC12細胞是一種大鼠嗜鉻細胞瘤細胞系，廣泛用于神經元凋亡和分化的體外模型研究[7]。Aβ25-35是Aβ的活性核心區域，是最具神經毒性的肽片段，代表了Aβ1-40或Aβ1-42的神經毒性效應[14-15]，因此廣泛用于建立AD的體內外模型[16-18]。本研究通過構建Aβ25-35誘導的PC12細胞毒性模型，以綠茶為對照，結合分子生物學試驗，探究了陳年六堡茶抑制神經退行性病變的潛在分子機制。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

試驗材料：傳統綠茶（Green tea，GT）由湘西古丈縣古陽河茶業有限責任公司提供；15年陳六堡茶（Aged Liupao tea，ALPT）由廣西梧州茶廠有限公司贈送。

試劑：PC12細胞系購自北京協和醫學院細胞庫，Dulbecco改良Eagle培養基（DMEM）、胎牛血清（FBS）購自Biological Industries（美國），Aβ25-35、噻唑藍（MTT）和二甲基亞砜（DMSO）均購自Sigma（美國），蛋白酶抑制劑混合物、抗熒光淬滅劑（含DAPI）及RIPA裂解液購自上海碧云天生物技術有限公司，anti-GAPDH購自Cell Signaling（美國），anti-multi ubiquitin購自MBL（日本），anti-sequestosome-1（p62）購自Epitomics（美國），anti-RAGE購自Santa Cruz Biotechnology（美國）。二抗（Rabbit anti-Goat IgG-HRP、Goat anti-Rabbit IgG-HRP、Goat anti-Mouse IgG-HRP）購自愛必信（上海）生物科技有限公司?；瘜W發光底物（ECL）、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、ECL試劑盒購自Millipore（美國），酶聯免疫吸附測定（ELISA）試劑盒購自江蘇飛亞生物科技有限公司，二喹啉甲酸（BCA）試劑盒購自Pierce（美國）。

1.2 茶提取物及Aβ25-35蛋白樣品制備

為模擬飲茶對神經的保護作用，采用泡茶法與冷凍干燥法相結合制備茶提取物。稱取100 g茶葉樣品，置于1 L沸水中，100 ℃水浴浸提45 min，過濾得到濾液，重復浸提1次后合并兩次濾液。待濾液冷卻至室溫后預凍48 h，再冷凍干燥，得到茶提取物，﹣20 ℃保存。

將Aβ25-35粉末與茶提取物分別溶于無菌水中，用0.22 μm PVDF膜過濾，配制1 mmol·L-1 Aβ25-35母液、1 mg·mL-1綠茶母液和1 mg·mL-1六堡茶母液。將各母液進行適當稀釋，然后將50 μmol·L-1的Aβ25-35分別與不同質量濃度（1、5、10、25、50、100、150、200 mg·mL-1）的綠茶、六堡茶提取物在37 ℃恒溫培養箱中預孵育7 d，獲得不同濃度的Aβ25-35/GT和Aβ25-35/ALPT蛋白[19]，具體信息見表1。

1.3 細胞培養

PC12細胞在含有10% FBS、100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1鏈霉素的DMEM中培養，置于含5% CO2的37 ℃恒溫培養箱內，每2 d傳代1次。

1.4 細胞活力檢測

MTT試驗中，當細胞融合率達60%～70%時，將PC12細胞以每孔1×104個的密度接種于96孔板中培養24 h，處理組分別采用1.2章節制備的不同Aβ25-35蛋白樣品孵育細胞，模型組（Model）僅加入50 μmol·L-1 Aβ25-35，對照組（CK）僅加入等量無菌水。孵育24 h后去除上清液，加入含0.5 g·mL-1 MTT的培養基，孵育4 h。隨后除去上清液，每孔加入150 μL DMSO，在多功能酶標儀上，以570 nm波長測量吸光度。細胞活力以處理組與對照組吸光度的平均百分比表示，對照組活力設定為100%。

1.5 ATP含量測定

將PC12細胞以每孔1.5×105個的密度接種于6孔板，按照1.3章節的方法培養細胞，并加入孵育后的不同濃度蛋白（GT10、GT25、GT50、ALPT10、ALPT25、ALPT50）進行處理，吸出上清液，并用預先冷卻的PBS沖洗細胞兩次，添加200 μL裂解液，4 ℃、12 000 r·min-1離心5 min收集上清液，測定ATP含量。

1.6 JC-1熒光染色檢測

將細胞以每孔5×104個的密度接種于24孔培養板中的細胞爬片上，按照1.3章節中的方法培養細胞，并加入孵育后的不同濃度蛋白進行處理，處理組茶提取物的質量濃度為10、25、50 μg·mL-1。然后吸出上清液，添加預冷的PBS

表1 Aβ25-35蛋白樣品

Table 1 Aβ25-35 protein samples

清洗細胞兩次，每孔中添加250 μL細胞培養基，再向每孔中添加250 μL JC-1染色工作液，在37 ℃細胞培養箱中孵育20 min。添加300 μL的JC-1染色緩沖液（1×）清洗細胞兩次，隨后用抗熒光猝滅劑（含DAPI）封鎖載玻片，最后使用熒光顯微鏡（Zeiss，Axio scope. A1）和ZEN軟件拍照并測量圖像的平均熒光強度，每次測量區域大小相同，共測量3次。

1.7 蛋白質印跡分析

將細胞按照每皿6×105個的密度接種于10 cm細胞培養皿中，按1.3章節中的方法進行細胞培養，并加入50 μmol·L-1 Aβ25-35蛋白以及GT50和ALPT50蛋白進行處理。隨后去除上清液，使用預冷的PBS沖洗細胞兩次，加入500 μL含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，然后在4 ℃、12 000 r·min-1條件下離心20 min，收集上清液。使用BCA蛋白質分析試劑盒測定蛋白質濃度，然后在8%～10% SDS-PAGE凝膠上分離等量的蛋白質。將凝膠中的蛋白質轉移到PVDF膜上，在含有5%脫脂奶粉的TBST緩沖液中封閉膜45 min，然后在4 ℃用稀釋比為1∶500～1∶2 000的一抗過夜培養。清洗后使用TBST稀釋后的二抗在室溫下孵育90 min，使用增強化學發光（ECL）檢測試劑盒檢測信號，并使用Image-J軟件進行蛋白質印跡灰度分析。

1.8 RNA測序及基因表達分析

根據1.7章節的方法，細胞培養24 h后，收集細胞放入液氮中速凍2 min，隨后通過干冰運輸至深圳華大基因股份有限公司進行轉錄組測序（RNA-seq）分析?；虮磉_水平經過歸一化處理后，采用FPKM計算每個基因的表達量。根據|Fold Change|≥1.2，Q值≤0.05篩選不同處理組的差異表達基因（DEGs），并進行相關性分析，評估不同處理組間相關基因的表達模式。為全面解析轉錄組層面的分子通路和網絡，進一步對差異基因進行熱圖和基因相互作用分析，并通過熱圖可視化各區塊中的DEGs。所有數據分析由BGI提供的網絡生物信息技術系統Dr.Tom（biosys.bgi.com）完成。

1.9 統計分析

數據分析使用GraphPad Prism 8.01軟件，通過單因素方差分析（ANOVA）結合Turkey多重比較法評估數據的顯著性差異，結果以平均值±標準差（ ±SD）表示，P＜0.05和P＜0.01分別表示差異顯著和差異極顯著。

2 結果與分析

2.1 GT和ALPT干預對PC12細胞活力的影響

本研究顯示（圖1A），不同濃度的GT和ALPT能明顯抑制Aβ25-35的毒性，提高PC12細胞的活力，當茶提取物的質量濃度為10、25、50 μg·mL-1時，細胞活力呈劑量依賴性增加，其中50 μg·mL-1的抑制效果最佳。因此，選取10、25、50 μg·mL-1進行后續試驗，以50 μg·mL-1作為WB檢測的最佳質量濃度。

Aβ25-35誘導的神經元退化主要源于其引發的聚集體累積和自噬功能下降，導致細胞膜和線粒體等細胞器膜完整性受損，進而影響氧化磷酸化過程并減少ATP生成[20-21]。通過JC-1熒光染色和ATP檢測發現，Aβ25-35處理組的線粒體膜電位（MMP）和ATP水平極顯著下降（Plt;0.01）。而25 μg·mL-1和50 μg·mL-1的GT和ALPT處理組MMP和ATP顯著增加（P＜0.05），均在50 μg·mL-1時效果最佳（圖1B、1H和1I）。以上結果表明，Aβ25-35會導致線粒體功能損傷和細胞能量代謝下降，而GT和ALPT處理能夠保護線粒體功能并增強代謝活性。

2.2 蛋白質印跡分析結果

p62和泛素-蛋白酶體系統（UPS）的積累是自噬障礙的標志，其結構中的多個結構域能夠與自噬和UPS連接，使p62在細胞增殖、凋亡和存活中發揮重要作用[22]。在神經炎癥及神經變性過程中，晚期糖基化終產物受體（RAGE）已被證明與多種神經退行性疾病相

關[23]。蛋白質印跡分析結果顯示，在Aβ25-35組細胞中，UPS、p62、RAGE和β-amyloid的表達量極顯著增加（P＜0.01），50 μg·mL-1的GT和ALPT處理顯著降低了UPS、p62、RAGE和β-amyloid修飾蛋白的表達，并抑制了RAGE通路的活性（圖1C～1G）。

2.3 轉錄組的DEGs分析

基于|Fold Change|≥1.2和Q≤0.05的篩選標準，分析了各處理組的DEGs。由圖2A可知，與對照組相比，Aβ25-35處理后的PC12細胞中共鑒定出872個DEGs，其中497個基因上調，375個基因下調。Aβ25-35/GT組與Aβ25-35組相比，共鑒定出1 723個DEGs，其中731個基因上調，992個基因下調；而Aβ25-35/ALPT組與Aβ25-35組相比，共鑒定出3 942個DEGs，其中1 690個基因上調，2 252個基因下調。以上結果表明，與Aβ25-35組相比，Aβ25-35/GT組和Aβ25-35/ALPT組的DEGs數量顯著增加。

花瓣圖顯示，各處理組共有12 410個共表達基因（圖2B）。熱圖分析進一步顯示，不同處理組的DEGs表達模式顯著不同，值得注意的是，Aβ25-35/ALPT組的基因表達趨勢與模型組相反，而Aβ25-35/GT組除某些基因的表達與模型組呈現相反趨勢，其他基因表達趨勢一致（圖2C）。以上結果表明，50 μg·mL-1的GT和ALPT處理顯著改變了PC12細胞的轉錄組表達，尤其是ALPT對基因表達的調控效果更為顯著，說明其在抑制Aβ25-35誘導的毒性過程中具有潛在的作用。

2.4 DEGs的相互作用網絡分析

以Aβ25-35/GT組的DEGs作為聚類熱圖的參考，并對不同模塊的DEGs進行PPI分析和通路富集分析。結果顯示，Aβ25-35/GT組的DEGs與Aβ25-35組呈現出相反的表達趨勢，部分DEGs的表達趨勢與Aβ25-35/ALPT組相似。根據基因相對表達量的高低，DEGs可分為3個主要模塊。在Aβ25-35/GT組中，顯著上調的DEGs主要富集于神經營養因子信號通路、B細胞受體信號通路和Wnt信號通路，而下調的DEGs主要富集在細胞周期、p53信號通路、細胞衰老、核糖體、阿爾茨海默病及神經變性相關通路（圖2D）。

對于Aβ25-35/ALPT組，基于DEGs的聚類分析和相互作用網絡分析顯示（圖2E），基因表達可分為上調和下調兩個主要區塊，且整體趨勢與Aβ25-35組相反。PPI分析和功能注釋表明，上調基因與線粒體自噬、糖酵解、甘油磷脂代謝相關；下調基因主要參與細胞周期調控、核糖體功能、泛素介導的蛋白質水解及細胞衰老過程。

以上結果表明，Aβ25-35處理顯著破壞了細胞代謝，導致蛋白質、脂質及碳水化合物代謝紊亂，并引發細胞周期異常及炎癥反應增強。而GT和ALPT對Aβ25-35誘導的毒性具有明顯的保護作用，能調節多條細胞代謝和信號傳導通路，發揮了多重保護效應。

3 討論

本研究采用模擬泡茶法和冷凍干燥技術，最大限度地保留了茶葉中的有效成分。研究結果表明，GT和ALPT能夠通過多種機制有效抑制Aβ誘導的神經毒性應激。其核心作用機制是抑制毒性聚集體的形成，下調炎癥通路，保護線粒體，調節細胞代謝，從而起到神經保護的作用。

ALPT在保護PC12細胞免受Aβ25-35誘導的神經退行性變化方面不僅具有與GT相似的機制，而且在保護線粒體、抑制DNA損傷和聚集物形成方面表現出更優越的效果。p62是一種抗氧化應激的應激誘導支架蛋白，當細胞的泛素和自噬降解系統受損，p62和UPS修飾的蛋白質會在細胞內聚集，進一步介導氧化應激和炎癥反應[22]。在神經炎癥及神經變性過程中，配體與RAGE結合后，氧化應激增加，RAGE的過度表達會導致神經炎癥[23]。ALPT對Aβ25-35誘導的分化神經細胞損傷的保護效果主要是通過提高線粒體膜電位和ATP含量，

降低活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）、β-amyloid、UPS和p62修飾蛋白的表達，并抑制RAGE通路，表明ALPT可能具有更高的生物利用度。

轉錄組分析顯示，ALPT處理組的基因表達變化趨勢與Aβ25-35組相反，GT和ALPT對Aβ25-35誘導的細胞損傷呈現出不同的保護機制，ALPT對轉錄組具有更廣泛的影響，調控了更多基因的表達，尤其在自噬、糖酵解和線粒體功能恢復方面具有顯著的上調作用。這一發現表明，ALPT不僅能夠修復Aβ25-35對線粒體造成的損傷，還能通過抑制淀粉樣毒性應激、調節各種代謝過程、促進細胞進入靜息狀態與維護蛋白質穩態等，進一步減少神經炎癥和氧化應激的發生。

GT雖然也具有抑制Aβ25-35誘導的神經毒性作用，但在基因調控和代謝通路的廣度上遜色于ALPT。這一差異可能與兩種茶的發酵程度及其活性成分的生物利用度有關。ALPT中富含的茶多酚類物質在發酵過程中發生化學變化，生成了更多具有生物活性的衍生物，這可能解釋了其在調控神經保護通路中的獨特優勢。

盡管本研究在體外模型中揭示了ALPT的神經保護潛力及其對自噬、糖酵解等通路的調控作用，但具體的活性成分及其分子機制仍不清晰，需要進一步聚焦于ALPT中的關鍵活性成分及其作用機制，并通過體內動物試驗進一步驗證，以期為神經退行性疾病的臨床干預提供更為精準的理論依據。

參考文獻

[1] 余鋒， 賈芳芳. 飲食干預腸道微生物調控認知和神經退行性疾病的作用機制[J]. 中國食品學報， 2022， 22（6）： 403-413.

Yu F， Jia F F. Mechanism of dietary intervention gut microbiota in regulating cognition and neurodegenerative diseases [J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology， 2022， 22（6）： 403-413.

[2] 曹雨欣， 張彥青， 戚務勤， 等. 食源性天然產物調控線粒體自噬預防神經退行性疾病的研究進展[J]. 食品科學， 2024， 45（1）： 301-312.

Cao Y X， Zhang Y Q， Qi W Q， et al. Food-derived natural products prevent neurodegenerative diseases by regulating mitophagy： a review of research progress [J]. Food Science， 2024， 45（1）： 301-312.

[3] Chao A C， Chen C H， Wu M H， et al. Roles of Id1/HIF-1 and CDK5/HIF-1 in cell cycle reentry induced by amyloid-beta peptide in post-mitotic cortical neuron [J]. Biochimica et Biophysica Acta， 2020， 1867（4）： 118628. doi： 10.1016/j.bbamcr.2019.118628.

[4] Hidalgo F J， Delgado R M， Zamora R. Protective effect of phenolic compounds on carbonyl-amine reactions produced by lipid-derived reactive carbonyls [J]. Food Chemistry， 2017， 229： 388-395.

[5] Pan H B， Gao Y， Tu Y Y. Mechanisms of body weight reduction by black tea polyphenols [J]. Molecules， 2016， 21（12）： 1659. doi： 10.3390/molecules21121659.

[6] Schimidt H L， Garcia A， Martins A， et al. Green tea supplementation produces better neuroprotective effects than red and black tea in Alzheimer-like rat model [J]. Food Research International， 2017， 100（Part1）： 442-448.

[7] Deb S， Dutta A， Phukan B C， et al. Neuroprotective attributes of L-theanine， a bioactive amino acid of tea， and its potential role in Parkinson's disease therapeutics [J]. Neurochemistry International， 2019， 129： 104478. doi： 10.1016/j.neuint.2019.104478.

[8] Zhao T T， Li C， Wang S， et al. Green tea （Camellia sinensis）： a review of its phytochemistry， pharmacology， and toxicology [J]. Molecules， 2022， 27（12）： 3909. doi： 10.3390/molecules27123909.

[9] 李玥， 王屹豪， 張靜聿， 等. 茶葉功能成分治療阿爾茨海默病分子作用機制的研究進展[J]. 中國當代醫藥， 2023， 30（31）： 19-23.

Li Y， Wang Y H， Zhang J Y， et al. Research progress on the molecular mechanism of functional components of tea in the treatment of Alzheimer's disease [J]. China Modern Medicine， 2023， 30（31）： 19-23.

[10] Cai S X， Yang H， Wen B B， et al. Inhibition by microbial metabolites of Chinese dark tea of age-related neurodegenerative disorders in senescence-accelerated mouse prone 8 （SAMP8） mice [J]. Food amp; Function， 2018， 9（10）： 5455-5462.

[11] Pan W J， Li W S， Wu H， et al. Aging-accelerated mouse prone 8 （SAMP8） mice experiment and network pharmacological analysis of aged Liupao tea aqueous extract in delaying the decline changes of the body [J]. Antioxidants， 2023， 12（3）： 685. doi： 10.3390/antiox12030685.

[12] Wan J， Feng M Y， Pan W J， et al. Inhibitory effects of six types of tea on aging and high-fat diet-related amyloid formation activities [J]. Antioxidants， 2021， 10（10）： 1513. doi： 10.3390/antiox10101513.

[13] Li B Y， Mao Q Q， Xiong R G， et al. Preventive effects of different black and dark teas on obesity and non-alcoholic fatty liver disease and modulate gut microbiota in high-fat diet fed mice [J]. Foods， 2022， 11（21）： 3457. doi： 10.3390/foods11213457.

[14] Song Y X， Li P， Liu L， et al. Nanostructural differentiation and toxicity of amyloid-β25-35 aggregates ensue from distinct secondary conformation [J]. Scientific Reports， 2018， 8（1）： 765. doi： 10.1038/s41598-017-19106-y.

[15] Tikhonova L A， Kaminsky Y G， Reddy V P， et al. Impact of amyloid β25-35 on membrane stability， energy metabolism， and antioxidant enzymes in erythrocytes [J]. American Journal of Alzheimer's Disease and Other Dementias， 2014， 29（8）： 685-695.

[16] Couly S， Denus M， Bouchet M， et al. Anti-amnesic and neuroprotective effects of fluoroethylnormemantine in a pharmacological mouse model of Alzheimer's disease [J]. The International Journal of Neuropsychopharmacology， 2021， 24（2）： 142-157.

[17] Pang Q Q， Kim J H， Choi J M， et al. Cirsium japonicum var. Maackii improves cognitive impairment under amyloid β25-35-induced Alzheimer's disease model [J]. BioMed Research International， 2022： 4513998. doi： 10.1155/2022/4513998.

[18] Zhang Y Y， Bao H L， Dong L X， et al. Silenced lncRNA H19 and up-regulated microRNA-129 accelerates viability and restrains apoptosis of PC12 cells induced by Aβ25-35 in a cellular model of Alzheimer's disease [J]. Cell Cycle， 2021， 20（1）： 112-125.

[19] 鄭新. 茶黃素延緩細胞衰老效應研究[D]. 長沙： 湖南農業大學， 2021.

Zheng X. Study on the effect of theaflavins in delaying cell senescence [D]. Changsha： Hunan Agricultural University， 2021.

[20] Crouch P J， Harding S M， White A R， et al. Mechanisms of Aβ mediated neurodegeneration in Alzheimer's disease [J]. The International Journal of Biochemistry amp; Cell Biology， 2008， 40（2）： 181-198.

[21] Strope T A， Birky C J， Wilkins H M. The role of bioenergetics in neurodegeneration [J]. International Journal of Molecular Sciences， 2022， 23（16）： 9212. doi： 10.3390/ijms23169212.

[22] Fan X L， Huang T T， Tong Y D， et al. p62 works as a hub modulation in the ageing process [J]. Ageing Research Reviews， 2022， 73： 101538. doi： 10.1016/j.arr.2021.101538.

[23] Tóbon-Velasco J C， Cuevas E， Torres-Ramos M A. Receptor for AGEs （RAGE） as mediator of NF-κB pathway activation in neuroinflammation and oxidative stress [J]. CNS amp; Neurological Disorders Drug Targets， 2014， 13（9）： 1615-1626.