浙江龍王山安吉小鯢的產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇與卵孵化的影響因素

摘 要 全球兩棲動(dòng)物種群的急劇衰退已成為保護(hù)生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)核心問題。產(chǎn)卵場(chǎng)選擇是兩棲動(dòng)物生活史中至關(guān)重要的過程，受到多種環(huán)境因素的影響，直接關(guān)系到后代的存活率和親本的適合度。安吉小鯢（Hynobius amjiensis）為國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物，分布范圍狹窄、種群數(shù)量極少，目前缺乏對(duì)該物種產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的相關(guān)研究。2023年11月—2024年3月，本研究團(tuán)隊(duì)在浙江安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)內(nèi)的14個(gè)潛在繁殖池監(jiān)測(cè)了安吉小鯢的產(chǎn)卵和孵化過程，并采用主成分分析和廣義相加混合模型分析了該物種產(chǎn)卵場(chǎng)選擇偏好、卵孵化成功率以及孵化時(shí)長(zhǎng)等主要影響因素。結(jié)果表明：安吉小鯢依據(jù)多種環(huán)境因子選擇筑巢地點(diǎn)，其中，在繁殖池內(nèi)的相對(duì)位置（水體深度、距水面距離、距岸邊距離）和繁殖池水質(zhì)（水體pH、水體溶解性總固體、水體氧含量）是影響安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的關(guān)鍵因素；水體溫度、水體氧含量和水深等對(duì)卵孵化率具有顯著影響；卵孵化時(shí)長(zhǎng)顯著受到水體溫度和水體pH的影響。研究結(jié)果揭示了安吉小鯢對(duì)繁殖場(chǎng)的選擇偏好，可為安吉小鯢種群的復(fù)壯提供數(shù)據(jù)支持。

關(guān)鍵詞：小鯢屬；微生境選擇；產(chǎn)卵位點(diǎn)；有尾目

目前，全球正經(jīng)歷生物多樣性喪失和第六次物種大滅絕，物種的滅絕率比歷史已知的物種背景滅絕率高8 ～ 100倍，全球生物多樣性的持續(xù)下降是21世紀(jì)人類面臨的最為嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)之一［1?2］。盡管這個(gè)問題已經(jīng)引起了各國(guó)科學(xué)家們的廣泛關(guān)注，但在過去的幾十年里，物種瀕危的趨勢(shì)仍沒有得到有效緩解［3］。特別是兩棲類，其48%的物種被評(píng)估為受脅物種，已然成為受威脅程度最高的脊椎動(dòng)物類群之一［4?5］。兩棲類具有復(fù)雜的生活史，其生命周期中的不同階段對(duì)環(huán)境的需求有所不同，掌握兩棲類，特別是瀕危兩棲類物種基本的生活史信息可為其保護(hù)管理提供重要的科學(xué)依據(jù)［6?7］。

繁殖是兩棲類生活史中最為重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，產(chǎn)卵場(chǎng)微生境不僅影響親本的適合度，也決定胚胎的孵化成功率和后代存活率［8?9］。大多數(shù)兩棲動(dòng)物都是卵生，常缺少親本的照顧，整個(gè)胚胎發(fā)育過程暴露在外部環(huán)境中，極易受到環(huán)境條件變化帶來的不利影響［10］。因此，為了提高繁殖成功率，成體在產(chǎn)卵前會(huì)評(píng)估并選擇最佳的產(chǎn)卵場(chǎng)微生境［11?14］。兩棲動(dòng)物通常根據(jù)繁殖微環(huán)境中的非生物因素來選擇產(chǎn)卵場(chǎng)地，包括物理特征（如池塘表面積［15］、水深［16?17］、水體溫度［18］）、化學(xué)特性（如pH［19］、溶解氧）等。掌握兩棲類產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇偏好對(duì)于瀕危兩棲類物種的保護(hù)至關(guān)重要。

安吉小鯢（Hynobius amjiensis）隸屬于兩棲綱（Amphibia）有尾目（Caudata）小鯢科（Hynobiidae）小鯢屬（Hynobius），在中國(guó)僅在十分狹窄的3個(gè)區(qū)域有所分布，即浙江安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)、浙江清涼峰國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)和安徽清涼峰國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)［20?21］。由于安吉小鯢種群稀少，成活率低，加上其棲息地面積和質(zhì)量的持續(xù)衰退，該物種被IUCN瀕危物種紅色名錄評(píng)估為瀕危（EN）等級(jí)［22］，并在2021年3月發(fā)布的《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》中被列為國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物［23］。安吉小鯢一般生活在富含泥炭蘚腐殖質(zhì)的沼澤地中［24］。前期研究初步表明，安吉小鯢的繁殖期大致為每年11月下旬—次年4月［24?25］，每只雌鯢產(chǎn)1條卵袋并將其粘在水坑邊的枯枝和水草上。然而，安吉小鯢如何選擇產(chǎn)卵場(chǎng)微生境，具體涉及到哪些環(huán)境因素，目前仍不清楚。浙江安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)為安吉小鯢的模式產(chǎn)地［26］，對(duì)于安吉小鯢的繁殖生態(tài)學(xué)研究及其保護(hù)工作具有重要意義。

由于安吉小鯢種群數(shù)量少、規(guī)模小和生存壓力大等原因，迫切需要對(duì)已發(fā)現(xiàn)的種群進(jìn)行更為詳細(xì)的產(chǎn)卵場(chǎng)選擇研究，明確影響安吉小鯢繁殖成功率的關(guān)鍵因素，提出相應(yīng)的保護(hù)建議，以提升該物種保護(hù)的有效性。本研究旨在調(diào)查安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)微生境的環(huán)境變量，進(jìn)一步量化評(píng)估該物種對(duì)繁殖場(chǎng)的選擇偏好，為保護(hù)、改造和重建安吉小鯢自然繁殖生境提供科學(xué)依據(jù)。同時(shí)，通過建立模型確定影響安吉小鯢孵化成功率以及孵化時(shí)長(zhǎng)的主要因素，從而為安吉小鯢種群的復(fù)壯提供數(shù)據(jù)支持。

1 研究方法

1. 1 調(diào)查地點(diǎn)

浙江安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)（圖1A）地處浙江省西北部安吉縣境內(nèi)（30°22′32″—30°25′12″ N，119°23′48″—119°26′38″ E），總面積1 242. 5 hm2，屬于森林和野生動(dòng)物類型的自然保護(hù)區(qū)，生物多樣性十分豐富［21］。保護(hù)區(qū)坐落在天目山脈北麓的龍王山區(qū)域，是西苕溪和太湖的重要水源地，其主峰為浙北地區(qū)的第一高峰，海拔1 587. 4 m。區(qū)內(nèi)共有維管植物1 478種、脊椎動(dòng)物278種和昆蟲1 740種，其中國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)植物一級(jí)12種、二級(jí)72種［27］，是浙江省乃至我國(guó)東部亞熱帶北緣及長(zhǎng)三角地區(qū)生物多樣性最為豐富的區(qū)域之一。

1. 2 野外調(diào)查

本研究調(diào)查的安吉小鯢繁殖生境區(qū)域?yàn)楹０渭s1 300 m 的山頂溝谷處沼澤地（圖1B），植被繁茂，水坑散布，每個(gè)水坑水深50 ～ 100 cm。該區(qū)域?yàn)楸Ｗo(hù)區(qū)的核心區(qū)，可排除人為活動(dòng)干擾。在2023年11月，研究人員首先對(duì)濕地中安吉小鯢的繁殖場(chǎng)生境進(jìn)行了全面調(diào)查，記錄了潛在繁殖池的位置信息，并每隔2 ～ 3 d對(duì)其進(jìn)行復(fù)查，將發(fā)現(xiàn)有卵袋的水池標(biāo)記為繁殖樣方。隨后，實(shí)時(shí)記錄新發(fā)現(xiàn)卵袋的發(fā)育狀態(tài)（包括存活、死亡、發(fā)霉、干癟）以及窩卵數(shù)，并于每天12：00—16：00完成微生境因子的測(cè)量和描述工作，包括每個(gè)繁殖池的情況（面積、水體基質(zhì)類型、水位特征）和每條卵袋的微生境信息［15，17?18］（水體情況、位置信息、卵袋信息），測(cè)量指標(biāo)及方法見表1。此外，為了確定卵袋的最終孵化率，研究團(tuán)隊(duì)跟蹤記錄每條卵袋內(nèi)卵的發(fā)育情況。正常發(fā)育的胚胎呈透明狀，可清晰觀察到其內(nèi)部結(jié)構(gòu)；壞死的胚胎則形態(tài)不完整，并呈現(xiàn)白色渾濁的外觀。每天記錄1次壞死卵粒的數(shù)量，具體測(cè)量指標(biāo)以及方法見表2。

1. 3 數(shù)據(jù)分析

1. 3. 1 環(huán)境因素選擇偏好

由于安吉小鯢的卵袋通常產(chǎn)在水體中，因此后續(xù)研究主要集中于水體及其相關(guān)位置的實(shí)測(cè)微生境因子，同時(shí)關(guān)注地表上的溫度和濕度條件。其他描述性的微環(huán)境因子僅用于頻率統(tǒng)計(jì)分析，并未進(jìn)行相關(guān)性分析。為了探究主導(dǎo)安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)選擇的影響因素，采用主成分分析法（principal componentsanalysis，PCA）對(duì)繁殖場(chǎng)各環(huán)境因子分別進(jìn)行分析。計(jì)算喜好系數(shù)（P*）［28］，以判斷安吉小鯢對(duì)不同生境因子的選擇性，其計(jì)算公式為P* =（ o - e） /（ o + e），式中：o 為觀察值，e 為期望值。P*的取值為［-1，1］，其中，-1 lt; P* lt; 0表示不選擇（NS），P*接近0表示隨機(jī)選擇（RS），0 lt; P* lt; 1表示選擇（S）。

1. 3. 2 卵孵化影響因素

為了量化不同預(yù)測(cè)變量與卵孵化成功率之間的關(guān)系，使用廣義相加混合模型（generalized additivemixed model，GAMM）檢驗(yàn)水體pH、水體導(dǎo)電率、水體TDS、水體溫度、水體氧含量、水體深度、卵袋距水面距離和卵袋距岸邊距離等因子對(duì)于孵化率的影響，并將繁殖池編號(hào)作為隨機(jī)截距（以控制不同繁殖池之間的隨機(jī)效應(yīng)）。從一個(gè)完整模型開始，該模型以卵孵化成功率作為應(yīng)變量，并包括1個(gè)平滑 的固定效應(yīng)，即繁殖池編號(hào)。根據(jù)皮爾遜等級(jí)相關(guān)分析，所有預(yù)測(cè)變量不存在高度共線性，相關(guān)系數(shù)均 lt;0. 8。為了提升后續(xù)建模的準(zhǔn)確性，本研究在建模之前對(duì)所有因子都進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化處理。使用限制最大似然法擬合所有模型，并根據(jù)Akaike信息準(zhǔn)則（AIC）理論方法對(duì)所有候選模型進(jìn)行排序。包含13個(gè)預(yù)測(cè)變量的所有可能組合的模型（總計(jì)2 048個(gè)模型）被排序，與最佳模型相比ΔAIC ≤ 2的模型被認(rèn)為是高度支持的［29］。然后，根據(jù)ΔAIC最小的模型方程建立唯一的最優(yōu)模型。最后，根據(jù)最優(yōu)模型的結(jié)果分析主要影響因子。為了減少過擬合的風(fēng)險(xiǎn)，使用十折交叉驗(yàn)證［30］對(duì)模型的泛化能力進(jìn)行評(píng)估。另外，使用相同方法探究不同環(huán)境變量與孵化時(shí)長(zhǎng)之間的關(guān)系。

所有連續(xù)變量數(shù)據(jù)均采用“平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。所有分析均在R 4. 3. 2［31］中的gamm4、mgcv、vis?reg、dplyr和MuMIn軟件包中進(jìn)行。

2 結(jié)果

2. 1 產(chǎn)卵場(chǎng)微生境因子偏好

2023年11月—2024年3月，共在調(diào)查區(qū)域發(fā)現(xiàn)14個(gè)潛在繁殖水池，繁殖水池之間的距離為6. 9 ～107. 7 m。繁殖池均為淤泥基底，面積為（6 690. 90 ±2 082. 06）cm2，最低水位為（75. 90 ± 10. 31）cm，最高水位為（97. 10 ± 13. 16）cm。但是，只在11個(gè)繁殖池內(nèi)監(jiān)測(cè)到了71個(gè)安吉小鯢的卵袋，18. 31%（13個(gè)）的卵袋產(chǎn)在水面處，5. 63%（4個(gè)）的卵袋產(chǎn)在近水層表面位置，40. 85%（29 個(gè)）的卵袋產(chǎn)在水層中部，35. 21%（25 個(gè)）卵袋產(chǎn)在水層底部位置，而且74. 65%（53個(gè)）的卵袋附著在植物根莖上，18. 31%（13個(gè)）的卵袋未附著任何物體，剩余7. 04%（5個(gè)）的卵袋附著在塑料袋等人工制品上。每條卵袋的長(zhǎng)度為（430. 37 ± 14. 36）mm，寬度為（32. 98 ± 0. 49）mm。

主成分分析結(jié)果顯示，水體深度、距水面距離、距岸邊距離和水體pH等是影響安吉小鯢繁殖場(chǎng)選擇的主要環(huán)境因子。安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的各主成分的特征值及相應(yīng)貢獻(xiàn)率見表3。前3個(gè)主成分特征值均大于1，提取前5個(gè)主成分時(shí)，累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)85. 90%，說明前5個(gè)主成分包含了8個(gè)變量指標(biāo)的主要信息（表3）。對(duì)第一主成分影響較大的是水體深度、水體pH 和距水底距離，其貢獻(xiàn)率為19. 43%、18. 64% 和13. 91%，主要反映了安吉小鯢在繁殖池內(nèi)的產(chǎn)卵位置和卵對(duì)水體水質(zhì)的要求。在第二主成分中，影響較大的是地表溫度、水體溫度，其貢獻(xiàn)率為25. 61%、24. 48%，主要反映的是安吉小鯢卵發(fā)育對(duì)溫度的依賴性。第三主成分中水體TDS影響較大，其貢獻(xiàn)率為44. 67%，反映安吉小鯢卵對(duì)水體溶解物含量的需求。第四主成分中距水底距離影響較大，其貢獻(xiàn)率為28. 93%，反映安吉小鯢在繁殖池內(nèi)的產(chǎn)卵位置。對(duì)第五主成分影響較大的是水體氧含量，其貢獻(xiàn)率為42. 30%，主要反映安吉小鯢卵發(fā)育對(duì)氧氣含量的敏感性（圖2）。

安吉小鯢喜好的產(chǎn)卵場(chǎng)生態(tài)因子類型見表4：水體pH為6 ～ lt;7 （P* = 0. 33），水體導(dǎo)電率為9 ～ lt;28 μS/cm（P* = 0. 42），水體溫度為0 ～ lt;8 ℃（P* =0. 21），地表溫度為4 ～ lt;15 ℃（P* = 0. 15），地表濕度為75% ～ lt;97%（P* = 0. 23），水體氧含量為7 ～ lt;12 mg/L（P* = 0. 23），水體深度為71 ～ lt;128 cm（P* = 0. 15），距水底距離為64 ～ lt;122 cm（P* =0. 21），距水面距離為0 ～ lt;44 cm（P* = 0. 41），距岸邊距離為4 ～ lt;26 cm（ P* = 0. 27）。

2. 2 繁殖微生境因子與繁殖成功率的相關(guān)性

根據(jù)安吉小鯢繁殖成功率的監(jiān)測(cè)結(jié)果，71個(gè)卵袋中有42個(gè)的孵化結(jié)果明確，其余卵袋因所處繁殖池的水面結(jié)冰而不得不中斷觀察。根據(jù)赤池信息準(zhǔn)則（AIC）選擇的最受支持的最優(yōu)模型（ΔAIC ≤ 2）中有 8個(gè)變量出現(xiàn)：水體pH、水體導(dǎo)電率、水體溫度、地表溫度、地表濕度、水體氧含量、水體深度和距岸邊距離。以此建立模型，模型的調(diào)整R2為0. 988，解釋度為99. 6%。通過在訓(xùn)練數(shù)據(jù)上分割數(shù)據(jù)集并重復(fù)擬合模型，得出的平均均方誤差為0. 092，這表明模型能夠在不同數(shù)據(jù)子集上保持較好的預(yù)測(cè)精度。結(jié)果表明，繁殖成功率與大多數(shù)預(yù)測(cè)因子顯著相關(guān)，但水體pH（P = 0. 099，圖3）除外。水體導(dǎo)電率、地表溫度、水體氧含量、水深、地表濕度和距岸距離對(duì)卵孵化率具有極顯著影響，水體溫度對(duì)卵孵化率具有顯著影響。導(dǎo)電率（P lt; 0. 001，圖3B）和水體溫度（P lt; 0. 001，圖3C）對(duì)卵孵化率表現(xiàn)出正相關(guān)。相反，地表濕度（P lt; 0. 001，圖3E）和水深（P lt; 0. 001，圖3G）和距岸邊距離（P lt; 0. 001，圖3H）與卵孵化率呈負(fù)相關(guān)。地表溫度（P lt; 0. 001，圖3D）、水體氧氣含量（P lt; 0. 001，圖3F）與卵孵化率呈非線性關(guān)系。

2. 3 繁殖微生境因子與孵化時(shí)長(zhǎng)的相關(guān)性

在42個(gè)卵袋中，有一條卵袋最后沉在水底，其上所有的卵均因霉菌感染而死亡。根據(jù)剩余41個(gè)卵袋孵化時(shí)長(zhǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果，采用AIC值選擇最受支持的模型（ΔAIC ≤ 2）中，有4個(gè)變量出現(xiàn)：水體pH、水體溫度、地表濕度和水體深度。在控制了繁殖池的影響后，以此建立最優(yōu)模型，模型的調(diào)整R2為0. 770，解釋度為84. 0%。結(jié)果表明，卵孵化時(shí)長(zhǎng)與大多數(shù)預(yù)測(cè)因子顯著相關(guān)，但水體深度（P = 0. 071，圖4D）除外。水體溫度（P lt; 0. 001，圖4B）與卵孵化時(shí)長(zhǎng)呈負(fù)相關(guān)，水體pH（P lt; 0. 001，圖4A）、地表濕度（P lt; 0. 001，圖4C）與卵孵化時(shí)長(zhǎng)呈非線性關(guān)系。

3 討論

兩棲動(dòng)物生活史具有水生胚胎發(fā)育的階段，只有在受精卵完成孵化長(zhǎng)成幼體后才能自由活動(dòng)，再逐步發(fā)育為成體，因此，產(chǎn)卵位置的選擇對(duì)其親本以及后代的生存率都影響極大。安吉小鯢在浙江安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)內(nèi)的棲息地僅限于一塊0. 02 km2的高山濕地，本研究共發(fā)現(xiàn)14個(gè)潛在的繁殖池，它們的地形、坡度等環(huán)境因子均十分相似。其中3個(gè)繁殖池內(nèi)未觀察到安吉小鯢的卵袋，這可能是它們距離溪流非常近，僅約2 m。與之相比，其他11 個(gè)繁殖池與溪流的平均距離則大得多，約為23 m。繁殖池越靠近溪流，就越容易受到溪水的侵蝕，從而不利于卵的安全孵化。研究團(tuán)隊(duì)全程記錄了11個(gè)有卵袋的繁殖池的微生境因子，整理并分析相關(guān)數(shù)據(jù)，最終揭示了安吉小鯢在選擇產(chǎn)卵地點(diǎn)時(shí)對(duì)微生境的偏好性。

安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的決定因素，首先是卵袋在繁殖池內(nèi)的相對(duì)位置，其次是水質(zhì)。主成分分析顯示，第一主成分的主要影響因素是水體深度、距水底距離，這些因素反映了卵袋在繁殖池內(nèi)的相對(duì)位置。在水平方向上，安吉小鯢偏好在繁殖池近岸處產(chǎn)卵，具體而言，產(chǎn)卵區(qū)域主要分布在距岸邊4 ～ lt;26 cm的范圍內(nèi)（P* = 0. 27）。這種分布可能與岸邊豐富的植物根莖有關(guān)，這些根莖可為卵袋提供大量的附著點(diǎn)。在垂直方向上，安吉小鯢更傾向于選擇接近水面的位置產(chǎn)卵，產(chǎn)卵高度通常位于水面下0 ～ lt;44 cm（P* = 0. 41）。這種傾向性可能是近水面區(qū)域的含氧量較高，且具有適宜的光照強(qiáng)度，更有利于胚胎的正常發(fā)育［32］。產(chǎn)卵位置通常位于繁殖池的中部，水體深度為71 ～ lt;128 cm（P* = 0. 15）。此深度屬于中等水位，既能確保充足的水量，又有利于氧氣的供給。在半永久性或永久性池塘中，兩棲類適合的產(chǎn)卵位置可以較好地保證卵始終處于水體環(huán)境中而不受干旱的影響，長(zhǎng)期的較高水位還可以確保后續(xù)幼體的生長(zhǎng)和發(fā)育［33］。同時(shí)，安吉小鯢的繁殖池基底均為淤泥，這在旱季也有利于減緩池塘干涸的速度。在調(diào)查期間，研究區(qū)域的氣溫驟降至-17 ℃，導(dǎo)致繁殖池面臨結(jié)冰的風(fēng)險(xiǎn)。安吉小鯢選擇在繁殖池水體中央集中產(chǎn)卵的策略，顯著降低了卵遭受冰凍的可能性。另一方面，安吉小鯢的產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇還受水質(zhì)的影響。在第一成分中，水體pH也是主要影響因素之一。這些因素反映了卵對(duì)水體水質(zhì)的需求，這可能是水質(zhì)會(huì)影響卵孵化率以及后期的幼體發(fā)育。例如，安吉小鯢偏好在pH為6 ～ 7的水體中集中產(chǎn)卵（P* = 0. 33），表明這一pH范圍是最適宜的。另外，研究團(tuán)隊(duì)檢測(cè)到11個(gè)具有卵袋的繁殖池水體pH 為4. 58 ～ 7. 30，而已有研究揭示了堿性水體（pH gt; 7）會(huì)增加兩棲類早期胚胎的死亡率［34］，因此，這些呈現(xiàn)酸性或中性的水體更適合安吉小鯢產(chǎn)卵。

安吉小鯢卵的孵化成功率與孵化時(shí)長(zhǎng)受到多種環(huán)境因素的影響。其中，水體溫度可能通過加速卵的孵化速率來提高孵化成功率。水體溫度在加速和最大化兩棲動(dòng)物胚胎發(fā)育及其存活率中起到關(guān)鍵作用，尤其對(duì)于偏好在深且溫暖池塘中產(chǎn)卵并孵化后代的蛙類物種來說更是如此［32］，如冬季水生繁殖的南方雙帶河溪螈（Eurycea cirrigera）等物種的繁殖地點(diǎn)選擇受水體溫度影響［18］。在本研究中，安吉小鯢卵的孵化成功率與孵化時(shí)長(zhǎng)均受到水體溫度的影響，但呈現(xiàn)完全相反的關(guān)系，即水體溫度（P lt; 0. 001，圖3C）與卵孵化成功率表現(xiàn)出正相關(guān)關(guān)系，而與卵孵化時(shí)長(zhǎng)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P lt; 0. 001，圖4B）。安吉小鯢在一年中最冷的季節(jié)（11月—次年3月）繁殖，而較高的水體溫度可以加快胚胎的發(fā)育速度，縮短孵化時(shí)間，并能影響后代個(gè)體的新陳代謝和存活率［35?36］。盡管水體pH對(duì)卵孵化率沒有明顯影響，但它與卵的孵化時(shí)長(zhǎng)顯著相關(guān)（P lt; 0. 001，圖4A），表現(xiàn)為非線性關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，布萊斯河蛙（Limnonectes blythii）等物種繁殖地的水體pH顯著高于非繁殖地，且隨著pH的升高，發(fā)現(xiàn)卵塊的概率也隨之增加［19］。這種現(xiàn)象的發(fā)生可能是在水體pH為5及以下的酸性環(huán)境中，兩棲動(dòng)物的死亡率會(huì)有所增加［37?38］，因此這類環(huán)境不適宜產(chǎn)卵。

本研究表明，水體中的相對(duì)位置和水質(zhì)是影響安吉小鯢產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的最關(guān)鍵因素，水體導(dǎo)電率、水體溫度、水體氧含量、水體深度、地表溫度、地表濕度和距岸邊距離對(duì)卵孵化率具有顯著影響，而卵孵化時(shí)長(zhǎng)受到水體溫度、pH以及地表濕度的顯著影響。這些發(fā)現(xiàn)為提高安吉小鯢繁殖成功率以及制定有效的就地和遷地保護(hù)措施提供了重要的數(shù)據(jù)支持。未來研究將深入探討安吉小鯢繁殖生態(tài)學(xué)的其他方面，如影響幼體上岸成功率的因素和生物因素（如捕食者）對(duì)產(chǎn)卵場(chǎng)微生境選擇的影響等，為安吉小鯢及其他類似瀕危物種的保護(hù)工作提供進(jìn)一步的理論指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ CEBALLOS G， EHRLICH P R， BARNOSKY A D， et al. Accel?erated modern human-induced species losses： entering the sixthmass extinction［ J］. Science Advances， 2015， 1（5）： e1400253.

［2］ CEBALLOS G， EHRLICH P R， DIRZO R. Biological annihila?tion via the ongoing sixth mass extinction signaled by vertebratepopulation losses and declines ［J］. Proceedings of the NationalAcademy of Sciences of the United States of America， 2017， 114（30）： E6089-E6096.

［3］ RADA S， SCHWEIGER O， HARPKE A， et al. Protected areasdo not mitigate biodiversity declines： a case study on butterflies［J］. Diversity and Distributions， 2019， 25（2）： 217-224.

［4］ PIMM S L， JENKINS C N， ABELL R， et al. The biodiversity ofspecies and their rates of extinction， distribution， and protection［J］. Science， 2014， 344（6187）： 1246752.

［5］ BISHOP P J， ANGULO A， LEWIS J P， et al. The amphibian ex?tinction crisis：What will it take to put the action into the AmphibianConservation Action Plan？ ［J］. Sapiens， 2012， 5（n°2）：97-111.

［6］ MIMS M C， MOORE C E， SHADLE E J. Threats to aquatic taxain an arid landscape： knowledge gaps and areas of understandingfor amphibians of the American southwest ［J］. WIREs Water，2020， 7（4）： e1449.

［7］ GUERRA V， JARDIM L， LLUSIA D， et al. Knowledge statusand trends in description of amphibian species in Brazil ［J］. Eco?logical Indicators， 2020， 118： 106754.

［8］ DENO?L M， DALLEUR S， LANGRAND E， et al. Dispersal andalternative breeding site fidelity strategies in an amphibian ［J］.Ecography， 2018， 41（9）： 1543-1555.

［9］ CAYUELA H， VALENZUELA-SáNCHEZ A， TEULIER L， etal. Determinants and consequences of dispersal in vertebrateswith complex life cycles： a review of pond-breeding amphibians［J］. The Quarterly Review of Biology， 2020， 95（1）： 1-36.

［10］ VáGI B， SZéKELY T. Diversity of reproductive strategies in theamphibia ［M］//MORENO-RUEDA G， COMAS M. Evolutionaryecology of amphibians. Boca Raton： CRC Press， 2023：158-174.

［11］ RUDOLF V H W， R?DEL M O. Oviposition site selection in acomplex and variable environment： the role of habitat quality andconspecific cues［ J］. Oecologia， 2005， 142（2）： 316-325.

［12］ GOULD J， CLULOW J， RIPPON P， et al. Complex trade-offs inoviposition site selection in a cannibalistic frog ［J］. Animal Be?haviour， 2021， 175： 75-86.

［13］ KLOSKOWSKI J. Better desiccated than eaten by fish： distribu?tion of anurans among habitats with different risks to offspring［J］. Freshwater Biology， 2020， 65（12）： 2124-2134.

［14］ SáNCHEZ-OCHOA D J， PéREZ-MENDOZA H A， CHARRUAUP. Oviposition site selection and conservation insights of twotree frogs （Agalychnis moreletii and A. callidryas） ［J］. South American Journal of Herpetology， 2020， 17（1）： 17-28.

［15］ MILLIKIN A R， COSTER S S， WELSH A B， et al. Pool ageand local habitat are associated with effective number of breedersin spotted salamander populations colonizing created vernal pools［J］. Diversity， 2023， 15（2）： 124.

［16］ LIND A J， WELSH H H， WHEELER C A， Jr. Foothill yellowleggedfrog （Rana boylii） oviposition site choice at multiple spa?tial scales［ J］. Journal of Herpetology， 2016， 50（2）： 263-270.

［17］ KERN M M， NASSAR A A， GUZY J C， et al. Oviposition siteselection by spotted salamanders （Ambystoma maculatum） in anisolated wetland ［J］. Journal of Herpetology， 2013， 47（3）：445-449.

［18］ OSWALD H R， WALDRON J L， WELCH S M， et al. Environ?mental effects on southern two-lined salamander （Eurycea cirrig?era） nest-site selection［ J］. Copeia， 2015， 103（1）： 7-13.

［19］ SRIDHAR V V， BICKFORD D. Oviposition site selection in theMalayan giant frog （Limnonectes blythii） in Singapore： conserva?tion implications ［J］. Asian Herpetological Research， 2015， 6（3）： 184-188.

［20］ 李永民， 吳孝友， 方國(guó)富， 等. 安徽發(fā)現(xiàn)安吉小鯢［ J］. 動(dòng)物學(xué)雜志， 2013， 48（4）： 526-528.

LI Y M， WU X Y， FANG G F， et al. Hynobius amjiensis foundin Anhui Province， China ［J］. Chinese Journal of Zoology，2013， 48（4）： 526-528.

［21］ 俞立鵬， 汪賢挺， 郎澤東， 等. 1979年以來5個(gè)時(shí)期安吉小鯢生境變化分析及預(yù)測(cè) ［J］. 濕地科學(xué)， 2022， 20（3）：303-310.

YU L P， WANG X T， LANG Z D， et al. Analysis and predic?tion on changes of Hynobius amjiensis habitat for 5 periods since1979［ J］. Wetland Science， 2022， 20（3）： 303-310.

［22］ IUCN SSC Amphibian Specialist Group. Hynobius amjiensis［J/OL］. The IUCN Red List of Threatened Species， 2021： e.T59089A63876823［2024-07-11］. https：//dx. doi. org/10. 2305/IUCN. UK. 2021-3. RLTS. T59089A63876823. en.

［23］ 國(guó)家林業(yè)和草原局，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部. 國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄（2021年2月1日修訂）［J］. 野生動(dòng)物學(xué)報(bào)， 2021， 42（2）：605-640.

National Forestry and Grassland Administration， Ministry of Ag?riculture and Rural Affairs. List of national key protected wildanimals （revised on February 1， 2021） ［J］. Chinese Journal ofWildlife， 2021， 42（2）： 605-640.

［24］ 顧輝清， 馬小梅， 王玨， 等. 安吉小鯢種群數(shù)量和數(shù)量動(dòng)態(tài)的研究［ J］. 四川動(dòng)物， 1999， 18（3）： 104-106.

GU H Q， MA X M， WANG J， et al. Research on populationnumber and dynamics of Hynobius amjiensis ［J］. Sichuan Jour?nal of Zoology， 1999， 18（3）： 104-106.

［25］ 葉林駿. 安吉小鯢生存現(xiàn)狀及其繁殖期生境特征研究［ D］.金華：浙江師范大學(xué)， 2012.

YE L J. Research of the suryival status and habitat charcateris?tice of Anji hynobiid ［D］. Jinhua： Zhejiang Normal Univer?sity， 2012.

［26］ 顧輝清. 小鯢屬一新種：安吉小鯢［ M］//錢燕文， 趙爾宓， 趙肯堂. 動(dòng)物科學(xué)研究：祝賀張孟聞教授九秩華誕紀(jì)念文集.北京： 中國(guó)林業(yè)出版社，1992： 39-43.

GU H Q. A new species of the genus Hynobius： Hynobius amjien?sis ［M］//QIAN Y W， ZHAO E M， ZHAO K T. Animal scienceresearch： issued to celebrate the ninetieth birthday of the professorZHANG Mengwen. Beijing： China Forestry Publishing House，1992： 39-43.

［27］ 浙江省林業(yè)局. 安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)入選中國(guó)首批全球生物多樣性關(guān)鍵區(qū)［EB/OL］. （2024-08-20） ［2024-09-21］. http：//lyj. zj. gov. cn/art/2024/8/20/art_1285508_59076677. html.

Zhejiang Forestry Bureau： Anji Salamander National Nature Re?serve selected as one of China’s first key global biodiversity ar?eas ［EB/OL］. （2024-08-20） ［2024-09-21］. http：//lyj. zj. gov.cn/art/2024/8/20/art_1285508_59076677. html.

［28］ 夏昕， 李媛， 楊道德， 等. 寒露林蛙繁殖期生境特征及影響其生境選擇的主要因子［J］. 生態(tài)學(xué)雜志， 2022， 41（9）：1740-1745.

XIA X， LI Y， YANG D D， et al. Habitat characteristics andmain factors influencing habitat selection of Rana hanluica dur?ing breeding period ［J］. Chinese Journal of Ecology， 2022， 41（9）： 1740-1745.

［29］ ZHANG L， ROHR J， CUI R N， et al. Biological invasions facili?tate zoonotic disease emergences ［J］. Nature Communications，2022， 13（1）： 1762.

［30］ BATES S， HASTIE T， TIBSHIRANI R. Cross-validation： Whatdoes it estimate and how well does it do it？ ［J］. Journal of theAmerican Statistical Association， 2024， 119（546）： 1434-1445.

［31］ R Core Team. R： a language and environment for statistical com?puting［CP/OL］. Vienna： R Foundation for Statistical Computing（2023-10-31）［2024-05-20］. https：//www. R-project. org/.

［32］ RUCHIN A B. Effect of illumination on fish and amphibian： de?velopment， growth， physiological and biochemical processes［J］. Reviews in Aquaculture， 2021， 13（1）： 567-600.

［33］ SHI D L， BOUCAUT J C. The chronological development of theurodele amphibian Pleurodeles waltl （Michah） ［J］. The Interna?tional Journal of Developmental Biology， 1995， 39（3） ：427-441.

［34］ LUNDSGAARD N U， CRAMP R L， FRANKLIN C E， et al. Ef?fects on the embryonic and larval development of cane toads（Rhinella marina） reared in alkaline artesian spring water ［J］.Austral Ecology， 2021， 46（8）： 1186-1191.

［35］ BACHMANN K. Temperature adaptations of amphibian embryos［J］. The American Naturalist， 1969， 103（930）： 115-130.

［36］ BRADFORD D F. Incubation time and rate of embryonic devel?opment in amphibians： the influence of ovum size， temperature，and reproductive mode ［J］. Physiological Zoology， 1990， 63（6）： 1157-1180.

［37］ FREDA J， DUNSON W A. Effects of low pH and other chemicalvariables on the local distribution of amphibians ［J］. Copeia，1986，1986（2）： 454-466.

［38］ PIERCE B A. Acid tolerance in amphibians ［J］. BioScience，1985， 35（4）： 239-243.

基金項(xiàng)目：安吉小鯢國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理中心項(xiàng)目（TCGK2023-007）