動(dòng)物園禽源奇異變形桿菌對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥分子機(jī)制

摘 要 為研究觀賞禽類中分離的奇異變形桿菌（Proteus mirabilis）對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥機(jī)制，于2019年從河南省某動(dòng)物園禽類養(yǎng)殖區(qū)綠孔雀（Pavo muticus）、紅綠金剛鸚鵡（Ara chloroptera）、火雞（Meleagris gallopavo）、帽子雞（polish chicken）和非洲鴕鳥(niǎo)（Struthio camelus）5 種觀賞禽類中分離17 株奇異變形桿菌，經(jīng)藥物敏感性試驗(yàn)、blaCTX-M基因檢測(cè)、全基因組測(cè)序、PFGE和RT-qPCR等探明受試菌對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：共有6株受試菌對(duì)第三代頭孢菌素耐藥，除1株（6D）攜帶超廣譜β-內(nèi)酰胺酶blaCTX-M-14和1株（106A）攜帶AmpC酶blaACT-16外，其余4株經(jīng)PFGE檢測(cè)證實(shí)為同一克隆型，且細(xì)菌體內(nèi)雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)CpxAR、BaeSR和EnvZ/OmpR的表達(dá)量顯著高于敏感菌，主要通過(guò)抑制耐藥菌細(xì)胞膜上OmpC和OmpF的表達(dá)減少藥物吸收，同時(shí)促進(jìn)OmpW表達(dá)加速藥物外排，從而減少菌體內(nèi)藥物濃度，進(jìn)而導(dǎo)致其對(duì)第三代頭孢菌素類耐藥。研究表明，動(dòng)物園禽類養(yǎng)殖區(qū)的奇異變形桿菌對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥機(jī)制復(fù)雜多樣，散播機(jī)制主要為染色體介導(dǎo)的克隆傳播，應(yīng)引起重視。

關(guān)鍵詞：禽源奇異變形桿菌；頭孢菌素類；耐藥基因；膜孔蛋白；雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)

中圖分類號(hào)：S852. 61

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：2310 - 1490（2024）- 04 - 0811 - 08

DOI：10.12375/ysdwxb.20240414

變形桿菌屬（Proteus）細(xì)菌在自然界中廣泛存在，在人體內(nèi)生存和繁殖的能力較強(qiáng)，臨床上可引起腹瀉、膿毒癥、呼吸系統(tǒng)問(wèn)題和尿路感染等疾病；奇異變形桿菌（P. mirabilis，PM）是公認(rèn)的導(dǎo)致人類和動(dòng)物感染的主要病原體之一［1］。近年來(lái)，人源和動(dòng)物源奇異變形桿菌的臨床分離率日趨增多，且臨床分離菌株多呈現(xiàn)明顯耐藥［2］。β-內(nèi)酰胺類為人醫(yī)和獸醫(yī)臨床常用抗生素，但是，隨著近年來(lái)第三代頭孢菌素類藥物在臨床中的廣泛應(yīng)用，耐藥菌也逐漸增多，尤其是質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extendedspectrum β-lactamases，ESBLs）和AmpC酶的出現(xiàn)［3］，給臨床有效防控耐藥菌感染造成極大困難。細(xì)菌中的雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)（two-component signal trans?duction system，TCS）可調(diào)控多種基因（如細(xì)菌細(xì)胞膜上的膜孔蛋白或外排泵相關(guān)基因）的表達(dá)，從而參與細(xì)菌耐藥性的形成［4］。

隨著“One Health”理念的推廣及普及，耐藥菌在人與動(dòng)物間的水平傳播越來(lái)越受到人們的關(guān)注和重視。動(dòng)物園是人與動(dòng)物密切接觸和互動(dòng)的一個(gè)重要場(chǎng)所。游客與動(dòng)物互動(dòng)（如接觸或喂食）在教育和娛樂(lè)方面有一定價(jià)值，同時(shí)也可能增加病原菌或耐藥菌的散播，但是，截至目前相關(guān)研究較少。課題組曾在某動(dòng)物園禽類散養(yǎng)場(chǎng)分離獲得1株染色體介導(dǎo)的替加環(huán)素耐藥不動(dòng)桿菌（Acinetobacter indicus），其可通過(guò)同源重組的方式進(jìn)行水平散播［5］。本研究從河南省某動(dòng)物園禽類養(yǎng)殖區(qū)分離獲得17株禽源奇異變形桿菌，經(jīng)藥物敏感性試驗(yàn)、耐藥基因檢測(cè)、全基因組測(cè)序、PFGE和RT-qPCR，研究受試菌對(duì)第三代頭孢菌素的耐藥機(jī)制和散播機(jī)制，為臨床控制第三代頭孢菌素耐藥菌的傳播提供參考依據(jù)，并為評(píng)估動(dòng)物園禽類散養(yǎng)場(chǎng)中人獸共患耐藥菌在人與動(dòng)物間的水平傳播風(fēng)險(xiǎn)提供理論支撐。

1 材料與方法

1. 1 菌株來(lái)源

2019年7月，在河南省某動(dòng)物園禽類養(yǎng)殖區(qū)，采集綠孔雀（Pavo muticus）、紅綠金剛鸚鵡（Ara chlorop?tera）、火雞（Meleagris gallopavo）、帽子雞（polishchicken）和非洲鴕鳥(niǎo)（Struthio camelus）5種觀賞禽類糞便或肛拭子樣品，對(duì)于死體采集其肝臟或心臟組織樣本，一只動(dòng)物僅收集保存1份有效樣品。細(xì)菌經(jīng)常規(guī)分離、純化及全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀鑒定，共獲得17株禽源奇異變形桿菌，詳細(xì)分離動(dòng)物及菌株命名見(jiàn)表1。

1. 2 主要藥品

除頭孢噻肟和頭孢噻呋購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司外，其他藥物，包括阿米卡星、多西環(huán)素、氟苯尼考和恩諾沙星，均購(gòu)自河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司。藥品使用時(shí)均在有效期內(nèi)。

1. 3 藥物敏感性試驗(yàn)

采用微量肉湯稀釋法檢測(cè)頭孢噻肟、頭孢噻呋、阿米卡星、多西環(huán)素、氟苯尼考和恩諾沙星對(duì)17株禽源奇異變形桿菌的最小抑菌濃度（minimum inhibi?tory concentration，MIC），藥敏結(jié)果按照美國(guó)臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）判讀［6］。試驗(yàn)重復(fù)3 次，以Escherichia coli ATCC? 25922為質(zhì)控菌。

1. 4 blaCTX-M基因的檢測(cè)

根據(jù)藥敏結(jié)果，對(duì)頭孢噻肟耐藥卻不攜帶耐藥基因的臨床菌株用煮沸法提取DNA，由北京擎科生物科技有限公司合成blaCTX-MU、blaCTX-M-1 和blaCTX-M-9 的引物序列［7］，PCR 檢測(cè)blaCTX-M 相關(guān)基因。PCR 產(chǎn)物送至北京擎科生物技術(shù)有限公司測(cè)序，結(jié)果經(jīng)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)序列比對(duì)后確定基因亞型。

1. 5 PFGE 檢測(cè)

根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果，參照PFGE 標(biāo)準(zhǔn)程序說(shuō)明書(shū)對(duì)耐頭孢噻肟但不攜帶blaCTX-M基因的奇異變形桿菌進(jìn)行PFGE分型。用DNA限制性內(nèi)切酶XbaⅠ對(duì)受試菌進(jìn)行酶切，沙門(mén)氏菌H9812作為參考菌株。

1. 6 全基因組測(cè)序

根據(jù)PFGE 分型結(jié)果，利用天根（TIANGEN）細(xì)菌全基因組提取試劑盒提取代表性受試菌的總基因組DNA（gDNA）。通過(guò)Illumina 高通量測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序，將獲得的序列數(shù)據(jù)經(jīng)SOAP、SPAdes和ABySS進(jìn)行序列拼接、組裝和比對(duì)。使用CISA軟件整合拼接結(jié)果，并對(duì)整合后的結(jié)果進(jìn)行最終的優(yōu)化處理，確保基因組序列的質(zhì)量和準(zhǔn)確性。使用ResFinder 4. 1在線分析工具（https：//www. genomicepidemiology.org/services/）對(duì)得到的基因組序列進(jìn)行耐藥基因的查找。

1. 7 RT-qPCR 檢測(cè)

為進(jìn)一步確認(rèn)耐頭孢噻肟卻不攜帶耐藥基因的奇異變形桿菌耐藥機(jī)制，以敏感菌株作為對(duì)照菌，RT-qPCR檢測(cè)耐藥菌株的膜孔蛋白及相關(guān)調(diào)控蛋白的相對(duì)表達(dá)量。使用異硫氰酸胍-酚法抽提待測(cè)菌株的總RNA，測(cè)定其濃度及純度后，按照HiScript?Ⅲ RT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）反轉(zhuǎn)錄試劑盒（諾唯贊，中國(guó)）的說(shuō)明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，16S rRNA為內(nèi)參基因，通過(guò)RT-qPCR對(duì)樣品中待測(cè)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行定量檢測(cè)，反應(yīng)條件為：95 ℃，30 s；（95 ℃，10 s；60 ℃，30 s）40個(gè)循環(huán)；95 ℃，15 s；60 ℃，60 s；95 ℃，15 s。結(jié)果采用2?ΔΔCt法計(jì)算，每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1. 8 數(shù)據(jù)分析

利用GraphPad Prisim 8. 0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性分析，組內(nèi)采用t 檢驗(yàn)，*為P lt; 0. 05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；**為P lt; 0. 01為差異顯著；***和****分別為P lt; 0. 001和P lt; 0. 000 1，均為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2. 1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

17株奇異變形桿菌對(duì)5種受試抗菌藥的敏感性結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，受試菌對(duì)多西環(huán)素和恩諾沙星的耐藥率高達(dá)88. 2%（15/17），僅有2株菌（39B和106A）對(duì)其敏感；對(duì)頭孢噻肟和頭孢噻呋的耐藥率為35. 3%（6/17）、對(duì)氟苯尼考的耐藥率為23. 5%（4/17）；對(duì)阿米卡星耐藥率較低，僅1株（22B）呈現(xiàn)耐藥。有9株菌為多重耐藥菌株，占52. 9%，其中菌株6D除對(duì)阿米卡星敏感外，對(duì)頭孢噻肟、頭孢噻呋、多西環(huán)素、氟苯尼考和恩諾沙星均高度耐藥。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)9株多重耐藥菌均分離自健康禽類，說(shuō)明游客在動(dòng)物園與健康動(dòng)物間的互動(dòng)也存在耐藥菌的水平散播風(fēng)險(xiǎn)。

2. 2 blaCTX-M基因檢測(cè)結(jié)果

用PCR檢測(cè)6株對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的禽源奇異變形桿菌是否攜帶blaCTX-M基因（圖1），經(jīng)測(cè)序和序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，6 株耐藥菌株中僅有1 株（6D）為blaCTX-M陽(yáng)性，其亞型為blaCTX-M-14，說(shuō)明該動(dòng)物園禽類散養(yǎng)場(chǎng)中禽源奇異變形桿菌對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的原因復(fù)雜多樣，需進(jìn)一步研究。

2. 3 PFGE 結(jié)果

根據(jù)前期試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)5株耐第三代頭孢菌素但不攜帶blaCTX-M 基因的禽源奇異變形桿菌進(jìn)行PFGE 分型。如圖2 所示，菌株17B、21A、25B 和29B2具有完全相同的譜型，表明為同一克隆型，且這4株菌分別來(lái)自不同禽類樣本，說(shuō)明該動(dòng)物園禽類散養(yǎng)場(chǎng)內(nèi)對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的禽源奇異變形桿菌存在明顯的克隆散播。

2. 4 全基因組測(cè)序結(jié)果

為進(jìn)一步研究不攜帶blaCTX-M但對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的禽源奇異變形桿菌的耐藥機(jī)制，選取17B和106A進(jìn)行全基因組測(cè)序，將獲得的序列數(shù)據(jù)經(jīng)拼接、組裝和比對(duì)后發(fā)現(xiàn)耐藥菌106A除攜帶β-內(nèi)酰胺類耐藥基因blaACT-16外，還同時(shí)攜帶多個(gè)耐藥基因，包括sul1、dfrA14、dfrA27、aph（3'）-Ia、aph（6）-Id、aph（3″）-Ib、aac（3）-IId、aadA16、mph（A）、qnrB6、qnrB91、aac（6'）-Ib-cr、tet（J）、tet（A）、cat 和floR，其中，blaACT-16屬于AmpC酶。AmpC酶能水解除第四代頭孢菌素和碳青霉烯類之外的多數(shù)β-內(nèi)酰胺類藥物的β-內(nèi)酰胺環(huán)而導(dǎo)致菌株耐藥［8］，說(shuō)明菌株106A對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的原因是其產(chǎn)生了AmpC型blaACT-16 酶。耐藥菌株17B雖然對(duì)頭孢噻肟耐藥，但未檢測(cè)到對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的相關(guān)已知基因，暗示其可能通過(guò)其他機(jī)制，如外排泵、膜通透性改變等對(duì)第三代頭孢菌素耐藥，其耐藥機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

2. 5 RT-qPCR 結(jié)果

2. 5. 1 膜孔蛋白相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量

任選1株對(duì)頭孢噻肟敏感的禽源奇異變形桿菌12B 作為對(duì)照株，采用RT-qPCR 檢測(cè)耐藥菌株17B的染色體編碼膜孔蛋白相關(guān)基因的表達(dá)量，引物見(jiàn)表2，通過(guò)2-ΔΔCt法計(jì)算其膜孔蛋白基因ompA、ompC、ompF 和ompW 的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果顯示，菌株17B 的ompC 和ompF 的相對(duì)表達(dá)量極顯著降低，其中ompC 的相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照菌12B 下降了約93. 4%；而ompA 和ompW 的相對(duì)表達(dá)量極顯著升高（圖3）。

2. 5. 2 雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量

為探究引起外膜蛋白表達(dá)量變化的原因，以敏感菌株12B為對(duì)照菌，采用RT-qPCR檢測(cè)耐藥菌株17B 的相關(guān)雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)基因（cpxA、cpxR、baeS、baeR、envZ 和ompR）的相對(duì)表達(dá)水平。圖4結(jié)果顯示，與對(duì)照菌12B相比，耐藥菌17B的cpxA和cpxR 的相對(duì)表達(dá)量分別增加5倍和4倍，而baeS、baeR 和envZ、ompR 的相對(duì)表達(dá)量均增加2倍左右。有文獻(xiàn)［9］證明，CpxAR雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)ompF和ompC 的表達(dá)具有負(fù)向調(diào)節(jié)作用，BaeSR雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)ompW 為正調(diào)控、對(duì)ompC 和ompF 均為負(fù)調(diào)控，而EnvZ/OmpR雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)ompC正調(diào)控作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，耐藥菌17B的雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)CpxAR、BaeSR 和EnvZ/OmpR 的表達(dá)量顯著高于敏感對(duì)照菌，其抑制OmpC和OmpF表達(dá)而減少藥物吸收，促進(jìn)OmpW表達(dá)而加速藥物外排，減少耐藥菌體內(nèi)的藥物濃度，進(jìn)而對(duì)第三代頭孢菌素類藥物產(chǎn)生耐藥。

3 討論

目前國(guó)內(nèi)的一些動(dòng)物園為吸引游客，會(huì)增設(shè)觸摸或者喂食等游客與動(dòng)物互動(dòng)的活動(dòng)。雖然這些活動(dòng)在教育和娛樂(lè)方面具有一定的價(jià)值，但這些行為也增加了人獸共患病病原體的傳播風(fēng)險(xiǎn)，具有嚴(yán)重的公共衛(wèi)生安全隱患［10?11］。本研究結(jié)果表明，河南省某動(dòng)物園禽源奇異變形桿菌對(duì)頭孢噻肟和頭孢噻呋的耐藥率均為35. 3%（6/17），其中2株分離自腹瀉禽類糞便樣品，1株分離自死亡禽類的新鮮組織樣品，其余均來(lái)自于健康禽類肛門(mén)拭子。由此可見(jiàn)，除患病禽類外，健康禽類機(jī)體也會(huì)攜帶耐藥菌，這給臨床治療帶來(lái)了困難，需要引起重視。因此，動(dòng)物園應(yīng)加強(qiáng)動(dòng)物的管理和監(jiān)測(cè)，以保障人類和動(dòng)物健康。其次，游客也應(yīng)提高自我防護(hù)意識(shí)，在動(dòng)物園與動(dòng)物直接或間接接觸后需做好消毒措施，以減少病原微生物的感染概率。此外，政府和相關(guān)部門(mén)也應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物園的監(jiān)管和管理，確保其嚴(yán)格遵守公共衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

奇異變形桿菌是臨床感染中常見(jiàn)的陰性菌，其耐藥性近年來(lái)隨著廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用逐漸升高，甚至出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象［12］。頭孢噻肟屬于第三代頭孢菌素類藥物，是至關(guān)重要的人獸共用抗菌藥物。然而，blaCTX-M基因的出現(xiàn)導(dǎo)致奇異變形桿菌對(duì)第三代頭孢菌素產(chǎn)生耐藥性［13］。早在2013年潘玉善等［14］已發(fā)現(xiàn)禽源奇異變形桿菌中存在blaCTX-M-65基因，且CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因在禽源奇異變形桿菌中的存在已經(jīng)比較普遍。AmpC酶是β-內(nèi)酰胺酶的一個(gè)重要分支，由染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)，呈現(xiàn)出多樣化的基因型趨勢(shì)［15］。AmpC酶的產(chǎn)生使細(xì)菌能夠水解頭孢菌素類藥物，進(jìn)而失去抗菌活性，也是奇異變形桿菌對(duì)第三代頭孢耐藥的重要原因之一［12］。葛強(qiáng)等［16］對(duì)分離得到的21株豬源奇異變形桿菌進(jìn)行耐藥基因擴(kuò)增發(fā)現(xiàn)，豬源奇異變形桿菌中攜帶ESBLs或AmpC的菌株比例較高，分別為57. 1%和14. 3%，同時(shí)攜帶ESBLs 和AmpC 的菌株占14. 3%，其中ESBLs菌株為blaTEM型、blaCTX-M型或blaTEM型和blaCTX-M 型。本研究測(cè)序結(jié)果顯示，1株（6D）攜帶耐藥基因blaCTX-M-14，1 株（106A）攜帶耐藥基因blaACT-16，與耐藥表型一致。

本研究中4 株同一克隆型頭孢噻肟耐藥菌（17B、21A、25B 和29B2）RT-qPCR 結(jié)果表明，3個(gè)雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)共同調(diào)節(jié)膜孔蛋白基因（ompA、ompC、ompF 和ompW）的表達(dá)，結(jié)果導(dǎo)致禽源奇異變形桿菌對(duì)頭孢噻肟的抗性。OmpC和OmpF為革蘭陰性菌細(xì)胞膜上的主要孔道蛋白，在抗菌藥透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入菌體的過(guò)程中發(fā)揮重要作用［17］，其表達(dá)量下降時(shí)會(huì)導(dǎo)致抗菌藥的吸收減少，從而降低菌體內(nèi)藥物濃度而導(dǎo)致耐藥。OmpA常與β-內(nèi)酰胺酶或多藥外排泵一起作為非特異性慢孔外排蛋白而促進(jìn)菌體內(nèi)藥物的外排，Tsai et al.［18］證明ompA 缺失株使厄他培南、亞胺培南、美羅培南、多尼培南、萘啶酸、阿米卡星和黏菌素的敏感性增加2 ～ 3倍。OmpW 屬于小的外膜孔蛋白家族，可作為一種動(dòng)態(tài)變化的孔通道參與某些外排蛋白的外排功能，如與小多重耐藥蛋白EmrE 共同作用促進(jìn)特異性底物的泵出［9］。雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是菌體內(nèi)常見(jiàn)的調(diào)控元件，通過(guò)調(diào)控膜孔蛋白的表達(dá)來(lái)影響藥物的流入與排出，進(jìn)而產(chǎn)生耐藥［4，9］。Masi et al.［19］研究表明，CpxA分別調(diào)節(jié)OmpF孔蛋白和AcrD外排泵的表達(dá)，以CpxR依賴性方式賦予菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類藥物的抗性，證明CpxAR雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)對(duì)ompF的負(fù)向調(diào)節(jié)作用。Hu et al.［20］通過(guò)回補(bǔ)baeR 基因發(fā)現(xiàn)OmpW在抗性菌株R200中的表達(dá)恢復(fù)正常水平，并且還完全恢復(fù)了對(duì)頭孢曲松的耐藥性，證明BaeSR雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)正向調(diào)控OmpW表達(dá)。Adler et al. ［21］發(fā)現(xiàn)envZ 突變降低OmpF 的豐度，但OmpC 的表達(dá)水平增加，證明EnvZ/OmpR 雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)能負(fù)調(diào)控ompC 的表達(dá)。

ESBLs的表達(dá)是導(dǎo)致第三代頭孢菌素耐藥的主要機(jī)制，在ESBLs中，CTX-M酶因其廣泛流行和高效耐藥特性而備受關(guān)注，其既可通過(guò)接合型質(zhì)粒、插入序列、轉(zhuǎn)座子等進(jìn)行水平散播，也可以通過(guò)克隆進(jìn)行垂直傳播［22］，其中ST131型大腸桿菌攜帶blaCTX-M-15在全球不同國(guó)家和地區(qū)的克隆傳播和大流行，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成了嚴(yán)重威脅［23］。本研究發(fā)現(xiàn)，分離自不同品種禽類樣本的第三代頭孢菌素耐藥菌（17B、21A、25B和29B2）具有相同的譜型，表明該動(dòng)物園禽類散養(yǎng)場(chǎng)對(duì)第三代頭孢菌素耐藥的奇異變形桿菌存在著克隆傳播，為控制該克隆傳播，禽類散養(yǎng)場(chǎng)應(yīng)在加強(qiáng)飼養(yǎng)管理的同時(shí)，嚴(yán)格消毒。盡管本研究檢出的克隆傳播菌株未攜帶CTX-M酶，但其仍對(duì)第三代頭孢菌素耐藥，如不能嚴(yán)格消毒，阻斷耐藥菌的克隆傳播，不僅會(huì)造成在禽類散養(yǎng)場(chǎng)區(qū)域內(nèi)流行散播，而且可能通過(guò)與游客的互動(dòng)等直接或間接的接觸造成更大范圍的流行散播，故應(yīng)引起人們的足夠重視。

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基金項(xiàng)目：河南省高校科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)支持計(jì)劃項(xiàng)目（23IRTSTHN021）；河南省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（232300421111）