慢性鼻竇炎小鼠建模研究進展

【摘要】 慢性鼻部炎癥如鼻炎、鼻竇炎是一類常見慢性疾病，長期影響人們的生活質量，其發病原因和致病機制仍尚不明確，動物模型的構建是探尋致病機制有效途徑，其中小鼠慢性鼻部炎癥模型的建立在近幾年得到快速發展。本綜述旨在總結國內外小鼠慢性鼻竇炎、過敏性鼻炎建模情況，特別是嗜酸性粒細胞性慢性鼻竇炎小鼠模型的進展，這對于開發防治慢性鼻部炎癥的新藥或進一步闡明其發病機制均有重要作用。

【關鍵詞】 小鼠模型；嗜酸性粒細胞；鼻息肉；慢性鼻竇炎；過敏性鼻炎

Research progress in the establishment of mouse models of chronic rhinosinusitis

CHEN Yuan， SHEN Yang， WANG Ji， LU Tao， ZHENG Bowen， YANG Yucheng

（Department of Otolaryngology， the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China）

Corresponding author： YANG Yucheng， E-mail： yychxh@163.com

【Abstract】 Chronic nasal inflammation， such as rhinitis and sinusitis， is a common chronic disease that affects people’s quality of life for a long period of time. Its pathogenesis and mechanism are still unclear. The establishment of animal models is an effective approach to explore the pathogenesis， among which the establishment of mouse models of chronic nasal inflammation has been rapidly developed in recent years. The aim of this review is to summarize the research status of chronic rhinosinusitis and allergic rhinitis modeling in mice at home and abroad， especially the progress in eosinophilic chronic rhinosinusitis mouse models， which plays an important role in the development of new drugs to prevent and control chronic nasal inflammation or further elucidation of its pathogenesis.

【Key words】 Mouse model； Eosinophil； Nasal polyps； Chronic rhinosinusitis； Allergic rhinitis

慢性鼻竇炎是常見的慢性疾病之一，流行病學數據表明，我國人群慢性鼻竇炎總體患病率為8%，略低于歐洲（10.9%）和美國（12%～14%）［1-3］。慢性鼻竇炎在臨床上被定義為鼻或鼻竇和黏膜的局部炎癥，主要癥狀為鼻塞、流涕、嗅覺喪失和面部疼痛，持續至少12周。其發病機制主要包括先天性鼻上皮屏障功能障礙、黏膜纖毛清除功能受損、免疫系統紊亂和病原體入侵等。動物模型的構建是模擬疾病的有效途徑，因此眾多學者致力于尋找一種能替代該疾病的動物模型，在基于飼養條件、飼養周期、飼養空間、藥品試劑以及疾病分子和基因水平上的研究需要，小鼠疾病模型的構建是最優選擇。從解剖方面看，小鼠的鼻竇結構與人類鼻竇結構有差異，但從鼻黏膜上皮細胞來看，小鼠的鼻黏膜上皮與人類是相同的，因此可以通過小鼠來展現人類慢性鼻竇炎患病過程中鼻上皮黏膜的損傷與修復的變化［3］。

在目前已有文章使用的慢性鼻竇炎動物模型中，主要是用小鼠、大鼠、兔和羊進行建模，建模方法包括滴鼻、腹腔注射、霧化吸入、手術填塞等，建模時間各有長短，其中小鼠是使用次數最多、方法最簡便、最經濟實惠的一種模型。慢性鼻竇炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CRSwNP）按照細胞學分型主要分為中性粒細胞浸潤、嗜酸性粒細胞浸潤、淋巴細胞浸潤、漿細胞浸潤為主的類型以及混合型。在之前綜述中主要是對嗜酸性粒細胞浸潤模型的方法概括，但對于其他炎癥細胞的浸潤以及過敏性鼻炎的模型構建方法的總結相對缺乏，因此在本文中，我們歸納整理了目前幾種用小鼠來構建慢性鼻竇炎模型的方法、周期、結果和意義，著重探討小鼠慢性鼻竇炎模型構建的方法和使用試劑的多樣性，同時對目前近十年已有文獻報道小鼠鼻竇炎伴或不伴息肉模型建模方法進行簡要概述，旨在為目前慢性鼻竇炎小鼠模型提供參考依據。

1 資料與方法

1.1 資料來源

檢索數據庫：外文數據庫包括PubMed、Web of Science、Embase、The Cochrane Library；中文數據庫包括中國生物醫學文獻服務系統、中國知網期刊全文數據庫（CNKI）、萬方數字化期刊全文數據庫、中國科技期刊數據庫（維普）數據庫。

檢索文獻時限：2013年1月至2023年12月。

檢索文獻類型：研究性論文。

檢索詞：采用主題詞方式進行檢索，外文數據庫以PubMed為例，英文檢索詞為model of chronic sinusitis、nasal polyps、model of mouse；中文數據庫以CNKI為例，中文檢索詞為慢性鼻竇炎模型、息肉模型、小鼠建模。

檢索策略：以CNKI和PubMed為例，檢索公式分別如下：

#1慢性鼻竇炎模型

#2息肉模型

#3小鼠建模

#4 #1 AND #2

#5 #2 AND #3

#1 model of chronic sinusitis

#2 nasal polyps

#3 model of mouse

#4 #1 AND #2

#5 #2 AND #3

1.2 納入與排除標準

納入標準：①文章標題或摘要與主題詞相關；②文章內容涉及小鼠鼻息肉建模相關研究；③發表于權威雜志的文章；④研究內容完整充實，論點論據可靠可信。

排除標準：①研究內容與本專業疾病無關；②綜述或meta分析類型文章，檢索流程見圖1。

2 結 果

2.1 鼻息肉

CRSwNP是一種多因素異質性疾病，已知細菌超抗原等多種病原體可導致該病的發生，息肉樣病變常被定義為上皮增厚剝脫、基底膜增厚、腺體增生、間質水腫、免疫細胞浸潤［4］。現國際最常用表型分型即依據癥狀、內鏡檢查以及鼻竇CT結果將CRS分為2種主要表型：①CRSwNP，通常具有嗜酸性粒細胞成分；②慢性鼻竇炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis nasal polyps，CRSsNP）。在日本難治性嗜酸性粒細胞性慢性鼻竇炎流行病學調查研究中，通過在400倍顯微鏡下對鼻息肉進行組織學檢查，嗜酸性粒細胞性鼻息肉（eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps，ECRSwNP）的診斷標準：3個視野中嗜酸性粒細胞的平均數≥70［5］。ECRSwNP主要表現為2型免疫反應，伴隨免疫球蛋白E（immunoglobulin E，IgE）、白介素（interleukin，IL）-4、IL-5、IL-13、IL-25、IL-33、胸腺基質淋巴細胞生成素（thymicstromal lymphopoietin，TSLP）水平升高，以及嗜酸性粒細胞計數增多［6-7］。

鼻息肉即良性炎性包塊，起源于鼻竇和鼻黏膜的任何部分，可導致慢性鼻塞。這些息肉被認為是慢性鼻竇炎的一個亞組，臨床診斷是根據鼻腔中的息肉顯影和超過3個月的鼻腔鼻竇癥狀［8］。鼻黏膜顯示組織學重塑，有上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）和纖維蛋白沉積以及杯狀細胞增生［9-10］。CRSwNP的特征是繼發于輔助性T細胞（T helper cell，Th）2型的免疫反應，包括嗜酸性粒細胞浸潤和Th2型細胞炎癥因子的過度表達［11］。相比之下，在亞洲患者中，常出現的是與Th1型和Th17型反應相關的中性粒細胞鼻息肉，主要和基質金屬蛋白酶-7（matrix metalloproteinase 7，MMP-7）、MMP-9有關［12-13］。但有文獻顯示ECRSwNP臨床癥狀更為嚴重，按照指南治療3年內復發率高，對患者生活質量和經濟負擔造成嚴重影響，且我國慢性鼻竇炎有朝Th2型炎癥轉換的趨勢［1］。

鼻息肉的形成是個體易感性和環境因素共同作用的結果［14-15］，目前我國新版指南所推薦的針對CRSwNP的治療手段主要為以手術治療為主的綜合治療，總體療效尚可，但不乏療效不佳的患者，據報道，CRSwNP術后半年的總體復發率為35%，術后1年為38%［16-17］。從患者自身的角度，復發原因與患者的炎癥類型、變應性體質、細菌生物膜及環境因素等有關；從醫師角度，與藥物治療是否準確、充分、手術方式的選擇是否合理，術中、術后處理是否恰當有關，其根本原因在于CRSwNP致病因素混雜，患者存在較大的異質性，而我們目前對其認識有限，治療手段相對比較均一。

鼻黏膜是人體與外界環境直接接觸的器官，是宿主抵御病原體的重要組成部分，是人體的第一道防御屏障，鼻黏膜表面定植的細菌群落對宿主健康有深遠影響，鼻腔正常菌群在抵抗病原菌侵襲、維護人體與微生物之間的內環境穩態中發揮重要作用，鼻腔菌群的失衡與多種疾病的發生關系密切，但其中關鍵菌群標志物在疾病發生發展中的作用機制有待闡明。

小鼠模型鼻息肉的形成主要是通過2種途徑實現的。一種方法是在缺氧誘導因子、炎癥因子等多種因素的作用下，細胞外基質分泌增加，鼻黏膜增厚受損并脫落進入竇腔，鼻竇黏膜與浸潤的炎癥細胞聚集形成組織團塊，在增生的基底膜環包下重塑形成鼻息肉。另一種方法是鼻黏膜受反復的炎癥刺激，局部組織增殖和隆起，進而發展為息肉。鼻息肉形成標準包括黏膜厚度增加、腺體結構增生、嗜酸性粒細胞浸潤、局部有明顯突起呈息肉樣病變。因此造模要求理想的動物模型應該滿足以下要求：①沒有直接損害竇腔；②符合鼻源性鼻竇炎的病理生理要求；③這些模型復制來的鼻竇炎具有向其他鼻竇侵犯的能力；④在病理學上具有炎癥分期分級的征象；⑤方法簡便，造模成功率高［3］。

2.2 中性粒細胞性慢性鼻竇炎伴鼻息肉小鼠模型的建立

脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是細菌內毒素的主要化學成分之一，是革蘭陰性菌細胞壁的基本成分，位于其細胞壁的外層。LPS除了其毒性作用外，還可以通過Toll樣受體（toll-like receptor，TLR）4識別和信號傳導，是免疫系統的強效激活劑。已知LPS可誘導強烈的氣道炎癥和促進局部中性粒細胞聚集，一些研究已經使用小鼠模型報道了LPS可誘導中性粒細胞浸潤。Kim等［18］通過在大鼠鼻腔中滴注LPS建立慢性鼻竇炎動物模型，連續滴鼻4 d后，觀察到大鼠鼻竇黏膜明顯增厚。Wang等［19］通過鼻內持續滴注LPS建立了中性粒細胞性鼻息肉模型，表明TLR4信號通路可促進Th1和Th17相關反應的增強［20］。TLR4已被證明在調節中性粒細胞的遷移、活化和壽命中起關鍵作用［21-22］。盡管中性粒細胞性鼻息肉與多種細菌感染有關，但難治性鼻息肉已被證實與革蘭陰性菌感染密切相關，且革蘭陰性菌釋放的內毒素和LPS被認為是重要的致病機制［23］。

聚肌苷酸：聚胞苷酸［poly（I： C）］是一種人工合成的病毒類似物，主要通過啟動TLR3信號通路，在抗病毒免疫的啟動中發揮著至關重要的作用。在Clarke等［24］研究中顯示哮喘小鼠模型引起以中性粒細胞浸潤為主的炎癥。Bae等［25］在鼻炎小鼠模型的建立中使用poly（I： C）觸發了中性粒細胞性炎癥。Wee等［26］的研究探討了細菌和病毒來源的LPS和poly（I： C）是否影響中性粒細胞性鼻息肉的形成，為LPS 與TLR4串聯、IL-17表達和中性粒細胞浸潤之間的關系提供進一步的支持證據。

2.3 嗜酸性粒細胞性慢性鼻竇炎伴鼻息肉小鼠模型的建立

有研究報道，67%的CRSwNP患者鼻腔定植金黃色葡萄球菌，在幾乎一半的鼻息肉組織勻漿中發現了抗金黃色葡萄球菌腸毒素的特異性IgE［27］。金黃色葡萄球菌被認為是人鼻黏膜上皮細胞中重要的炎癥誘導劑，其分泌的5種毒素作為超抗原可放大免疫反應，激活TLR2，將炎癥向Th2型轉變，這種炎癥類型的主要病理變化為嗜酸性粒細胞浸潤和活化。嗜酸性粒細胞呈圓形，胞質內充滿粗大、均勻、略帶折光性的嗜酸性粒細胞顆粒，可以被蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosinstaining，HE）染色染成橘紅色，細胞核常分為2～3葉，呈凹形或腎形，著色較淺。金黃色葡萄球菌腸毒素B型（Staphylococcus aureus enterotoxin B，SEB）是金黃色葡萄球菌分泌的一種內毒素，與主要組織相容性復合物Ⅱ類和T細胞受體結合來激活免疫系統，造成T細胞的激活和促炎因子的全身釋放。煙曲霉菌是另一種致病抗原，誘導鼻腔鼻竇上皮細胞釋放IL-33，增強Th2型炎癥［28］。

Yoon等［29］的研究證明SEB還參與ECRSwNP患者上皮細胞內質網應激反應、活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產生、線粒體功能的破壞和鼻上皮細胞結構的變化。Kim等［30］報道SEB通過激活TLR2導致IL-6和IL-8的產生。在Didehdar等［31］的研究中，SEB可能誘導與鼻竇炎相關的低氣道高敏感個體產生持續的Th2反應，Th2極化的細胞因子如IL-4可觸發漿細胞產生IgE。隨后，IgE覆蓋的嗜酸性粒細胞可以與SEB結合并導致陽離子蛋白的釋放、嗜酸性粒細胞脫顆粒和局部嗜酸性炎癥。為此，有研究報道ECRSwNP患者中嗜酸性粒細胞陽離子蛋白與抗原特異性IgE呈正相關［32］。以往的研究顯示金黃色葡萄球菌在中國人群的鼻腔中有定植，并且在Cheng等［33］發表的一項研究中，所有36例CRSwNP患者的鼻腔組織（鼻甲和息肉）中SEB水平均顯著增加。在Cheng等［34］的研究中，嗜酸性粒細胞性CRSwNP和非嗜酸性粒細胞性CRSwNP組織與正常上皮組織相比，均觀察到總IgE、SEA和SEB的增加。Okano等［35］發現將SEB作用于鼻息肉細胞時，IL-5和IL-13等細胞因子水平都有上升，這些細胞因子募集嗜酸性粒細胞，管理嗜酸性粒細胞的分化，引起嗜酸性粒細胞性炎癥。Khalmuratova等［36］使用3%卵清蛋白（ovalbumins，OVA）加用10 ng SEB作用于BALB/C

小鼠來建立ECRSwNP，與使用相同劑量磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）的對照組相比，實驗組顯示黏膜增厚并伴有息肉樣病變，破骨細胞和成骨細胞以及竇壁的不規則增厚。Rouyar等［37］研究證明連續使用22周SEB加屋塵螨會誘導小鼠的Th2型炎癥反應，并且通過食物埋藏試驗證明影響了未成熟嗅覺神經元但不影響嗅覺。Martens等［27］使用SEB對小鼠鼻部進行刺激，觀察到了鼻黏膜上皮屏障功能的損害，并降低了緊密連接蛋白1 （zona occludens1，ZO-1）和閉合蛋白（occludin，OCLN）mRNA的表達。金黃色葡萄球菌產生的腸毒素不僅可以誘導特異性IgE，還可以作為超抗原，促進T細胞釋放Th2型細胞因子［38］。Shin等［39］在ECRSwNP患者中發現缺氧誘導因子1（hypoxia inducible factor 1，HIF-1）高表達，并用SEB建立的ECRSwNP模型驗證了HIF-1 通路通過誘導上皮-間質轉化促進了鼻息肉的發生，提出了HIF-1抑制劑或HIF-1通路可能成為治療和預防嗜酸性粒細胞性慢性鼻竇炎的潛在靶點。

Kagoya等［40］使用卡泊三醇（calcipotrol，MC903）維生素D3的類似物，在19 d內建立了ECRSwNP小鼠模型，在此模型中嗜酸性粒細胞和M2巨噬細胞都有增加，IL-4、IL-5、IL-13、TSLP等炎癥因子都有顯著升高，趨化因子11（chemokine CC-motif ligand 11，CCL11）和CCL24的表達也升高。同時，在ECRSwNP小鼠模型中觀察到嗅覺上皮變薄和成熟嗅覺感覺神經元減少。

總而言之，我們可以合理推測金黃色葡萄球菌分泌的SEB可能在ECRSwNP的發病機制中起重要作用，并且SEB主要誘導Th2型炎癥，調節Th2型炎癥因子的產生，通過抑制調節性T細胞，增強嗜酸性粒細胞和肥大細胞功能來損傷和重塑組織［41］。前列腺素E2（prostaglandin E2，PGE2）可以調節原代鼻上皮細胞對SEB刺激后嗜酸性粒細胞相關細胞因子/趨化因子的產生［42］。SEB破壞上皮細胞的完整性，抑制ZO-1和Occludin的表達，而殼聚糖-葡聚糖凝膠、PGE2、地塞米松和鈣通道阻滯劑等抗炎劑可以抑制SEB誘導的促炎細胞因子，發揮抗炎作用［27］。

2.4 變應性鼻炎小鼠模型的建立

由于變應性鼻炎確切的發病機制不明，建立能夠更好模擬人類變應性鼻炎的動物模型有助于研究工作的開展及深入。國內外學者已經用不同的變應原建立了多種穩定可靠的變應性鼻炎的動物模型，如Tofukuji等［43］使用特異性過敏原免疫療法花粉病來構建小鼠過敏性鼻炎模型，該模型可有效模擬人類疾病。Takahashi等［44］用OVA建立了過敏性鼻炎的小鼠模型，國內也有用蒿屬花粉變應原、蛔蟲變應原、豚草花粉變應原等建立過敏性鼻炎動物模型的報道。用OVA激發小鼠造模已是一種被國內外學者廣泛采取相當成熟的方法。因此選用OVA作為變應原，行腹腔注射致敏，滴鼻激發，建立小鼠過敏性鼻炎模型，經過實驗證明致敏效果良好。

小鼠變應性鼻炎模型的鼻黏膜組織形態學表現為光鏡下可見鼻黏膜水腫，黏膜下血管擴張，腺體增生，黏膜固有層見大量嗜酸性粒細胞及淋巴細胞浸潤，纖毛有脫落現象，其與人類變應性鼻炎的病理學表現相似。激發后鼻黏膜中嗜酸性粒細胞比例增高明顯。嗜酸性粒細胞在鼻黏膜內聚集和激活后，釋放白三烯和血小板凝集因子，引起肥大細胞釋放組胺和趨化因子，吸引更多的嗜酸性粒細胞聚集，形成一種周而復始的持續性炎癥反應，這種病理變化與人類季節性變應性鼻炎花粉癥的速發相和遲發相反應相似。

小鼠鼻炎模型建模見表1。

3 小鼠鼻竇炎模型結果檢測

3.1 蘇木精-伊紅染色

HE染色法是石蠟包埋后切片常用的染色方法。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核酸著紫藍色，伊紅染液為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。在HE染色的小鼠頭顱切片組織中，可以觀察到上皮黏膜形態與分布，從外到內分別為纖毛層、杯狀細胞層、上皮細胞層和基底層以及包裹在中心的骨骼組織。在Th2型炎癥誘導的慢性鼻竇炎伴息肉中就有嗜酸性粒細胞的浸潤，嗜酸性粒細胞的計數也常用于對這類疾病進行分類，若一個高倍視野下的嗜酸性粒細胞個數超過總炎癥細胞的10%則為ECRSwNP［5］，也是較非ECRSwNP更為嚴重的一個類型，其臨床癥狀更加嚴重，治療后也有更高的復發風險，因此區分ECRSwNP和非ECRSwNP是為了更好地為患者提供有效的治療和恰當的預后，取病理組織做HE染色則是簡便易行的操作流程，也是組織學、病理學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。在HE染色中，嗜酸性粒細胞呈現細胞核紫色分葉狀，嗜酸性粒細胞的浸潤與機體發揮過敏反應和防御寄生蟲的作用，在小鼠鼻息肉模型建立中，HE染色也呈現跟人鼻息肉一樣的特征變化。

3.2 過碘酸雪夫染色

過碘酸雪夫染色（periodic acidc shiff，PAS）是糖原染色，通常染糖原時會與酸性黏多糖產生反應呈藍色，與中性多糖不反應。PAS染色可用于糖原的鑒定和黏液的顯示，在研究中常被用來觀察杯狀細胞的黏液物質，計數杯狀細胞的數量［19］。杯狀細胞是上皮的屏障細胞，鼻息肉的形成常伴有杯狀細胞和黏液細胞的增殖，因此在小鼠鼻竇炎鼻息肉模型中染色杯狀細胞可以更直觀地展現上皮的變化。

3.3 酶聯免疫吸附試驗

酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunoso-rbent assay，ELISA）通過抗原或抗體的固相化來量化樣品中特定目標分子的含量，ELISA常用于檢測包括血清、血漿、細胞培養上清液、尿液、唾液或其他液體樣本，ELISA在小鼠鼻竇炎鼻息肉模型中常用于檢測鼻腔灌洗液中的炎癥因子水平，同時與實驗干預組和人類鼻腔灌洗液中炎癥因子水平進行對比。使用導管從小鼠氣管開口的后方插入，收集鼻腔灌洗液至少1 mL用于ELISA檢測，檢測指標包括纖維細胞生長因子、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、轉化生長因子-β（transforming growth factor，TGF-β）、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、IL-17等各種炎癥因子的水平以及血清總IgE。

3.4 天狼星紅染色

嗜酸性粒細胞是炎癥細胞之一，在變態反應疾病中發揮作用，嗜酸性粒細胞質中含次級顆粒，這種顆粒中主要含有堿性蛋白，比如嗜酸性粒細胞陽離子、嗜酸性粒細胞衍生神經素、嗜酸性粒細胞過氧化物酶等，這些次級顆?？梢员粔A性染料著色。天狼星紅染色法可以將嗜酸性粒細胞胞質染成紅色，核呈藍色，相比于HE染色著色更加強烈，對比更加明顯，更容易區分組織中其他炎癥細胞。因此很多研究者都曾使用天狼星紅染色評估嗜酸性粒細胞的浸潤，如Rouyar等［37］使用天狼星紅染色法對小鼠建模組織進行染色，觀察到了明顯的紅色細胞質的嗜酸性粒細胞浸潤。

3.5 免疫熒光與免疫組化

免疫熒光是標記免疫技術中發展最早的一種。根據抗原抗體反應的原理，先將已知的抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內的相應抗體（或抗原），從而確定目標蛋白的性質、定位以及定量。通過對石蠟切片進行烤片、脫蠟復水、洗滌、抗原修復、一抗二抗孵育等步驟來制作熒光切片，檢測目的蛋白的含量與表達。Ryu等［49］使用小鼠鼻竇部分石蠟切片做了免疫熒光與免疫組化，證實了IL-17A和白細胞分化抗原68 （cluster of differentiation 68，CD68）細胞計數的高表達差異。

3.6 蛋白免疫印跡

蛋白免疫印跡法（western blotting，WB）是電泳分離后的蛋白質從凝膠轉移到酸纖維素膜（nitrocellulose membrane，NC）或聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，PVDF）上，然后通過特異性抗體檢測某特定蛋白的技術，可實現目標蛋白的定量分析。通過提取小鼠鼻黏膜組織蛋白，使用WB檢測目的蛋白含量是一種十分有效且能證明觀點的實驗方法，Kim等［42］提取鼻腔組織蛋白進行WB實驗測量目的蛋白的表達差異性，證明白藜蘆醇不僅抑制活性氧的產生，還阻止炎癥介質的釋放。

3.7 實時熒光定量PCR

實時熒光定量PCR（quantitative real time PCR，

qPCR）是利用模板DNA經過變性、退火和延伸3個基本反應過程來檢測目的蛋白核酸的表達，可通過對小鼠鼻部組織進行RNA的提取、逆轉和擴增來確定靶基因或靶蛋白的表達水平。Kim等［45］從鼻組織中提取總RNA，使用qPCR分析發現CD19、CD138和膜輔蛋白的表達增高。

各檢測方法匯總表見表2。

4 結語與展望

本文總結了近幾年來CRSwNP的小鼠模型建立方法和研究現狀，動物模型是研究疾病發生發展的重要工具，對挖掘慢性鼻竇炎-鼻息肉疾病的形成機制有著重要作用，為針對性治療提供強有力的理論基礎。在慢性鼻竇炎小鼠模型這方面還亟待解決的問題：目前多數文獻利用的慢性鼻竇炎伴或不伴鼻息肉造模方法持續時間長達3個月，相對于其他疾病的造模時間成本太高，不利于前期藥物的篩選及機制的驗證。但由于鼻竇炎是慢性炎癥性疾病，如果縮短造模時間，就無法更直觀地呈現慢性炎癥的病理過程，所以既能呈現慢性炎癥又能縮短時間的動物模型研究迫在眉睫。

慢性鼻竇炎是一種多因素異質性疾病，眾多科學家在近年來對其進行持續的深入研究，雖然取得了一些研究成果，提供了一部分治療的靶點，但慢性鼻竇炎小鼠模型在國際上仍然沒有金標準，各種造模方法均不能完全模擬人類慢性鼻竇炎病理生理變化過程。但相信隨著學術界同仁的不懈努力，動物模型會越來越完善，具有代表性，從而接近人類慢性鼻竇炎疾病的本質。這些模型的發展將有助于我們進一步揭秘慢性鼻竇炎這一疾病的確切病理生理機制，為疾病的精準治療及管理提供新的思路。

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（責任編輯：鄭巧蘭）