山東濱州羊布魯氏菌的實驗室檢測及防治措施

摘要：對濱州市6家有規(guī)模的養(yǎng)殖場采集羊耳靜脈血離心血清進行試劑檢測，對濱州羊布魯氏菌病的防控提供了有力支持。隨著抗生素的濫用和耐藥菌株的出現(xiàn)，動物和人的健康也深受其害。布魯氏菌病是由布魯氏菌引起的，羊、牛、豬、人等均可感染。可引起懷孕母畜死胎或流產(chǎn)、公畜睪丸炎。導(dǎo)致人間歇性發(fā)熱、失眠、全身無力、肌肉酸疼、頸腹部淋巴結(jié)腫大，睪丸腫大。可導(dǎo)致女性發(fā)生卵巢炎、乳腺炎、子宮內(nèi)膜炎、孕婦發(fā)生流產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：羊；布魯氏菌；實驗室檢測；防治措施

1 材料與方法

1.1 調(diào)查內(nèi)容

采集羊血清樣品進行布魯氏菌病檢測。

1.2 虎紅平板凝集試驗

虎紅平板凝集實驗的原理是用已知的抗原來檢測液體中未知的抗體，抗原抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合呈現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)。具體步驟：將采取的血液用離心機4 000 r/min離心5 min，用移液搶加25 μL被檢血清于潔凈玻片上，虎紅抗原試劑用前搖勻，然后加入25 μL 的虎紅平板抗原，用棉簽充分搖勻，在5 min內(nèi)判定結(jié)果。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：呈現(xiàn)均勻粉紅色，沒有凝集塊，為陰性（圖1），有明顯的凝集塊現(xiàn)象，為陽性（圖2）。

1.3試管凝集試驗

1）稀釋被檢血清

稀釋液配制：用石炭酸和氯化鈉溶液配制成0.5%石炭酸生理鹽水。

①每份被檢血清用4支試管，標(biāo)記編號，第1管加入1.15mL稀釋液，在2～4管分別加入0.5 mL稀釋液。

②從第1管中吸取0.5 mL加入第2管，混合均勻后，再從第2管吸取0.5 mL加入第3管中，如此倍比稀釋到第4管，從第4管中吸取0.5 mL 棄去，稀釋完畢。

③稀釋完畢后從第1管至第4管的血清稀釋度分別為1∶12.5、1∶25、1：50、1∶100。

2）反應(yīng)

試管充分振蕩后，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱反應(yīng)20 h，出現(xiàn)++以上凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度為血清凝集價，血清凝集效價在1∶50以上為陽性[1]。

1.4 免疫膠體金法

樣品稀釋液，10～20 min內(nèi)觀察結(jié)果，20 min后檢驗結(jié)果無效。

1）陽性：在T（檢測線）和C（質(zhì)控線）各出現(xiàn)一條紅色線。

2）陰性：在T（檢測線）出現(xiàn)一條紅色線，C（質(zhì)控線）不顯色。

3）無效：在T（檢測線）和C（質(zhì)控線）都不顯色。

2 結(jié)果分析

虎紅平板試驗檢測出20份陽性樣品；用膠體金法檢測出陽性18份；符合率90%。虎紅平板陰性試驗檢測出的80份陰性樣品，膠體金法檢測出80份陰性，符合率100%。試管凝集法實驗檢出的18份陽性樣品，膠體金法檢出陽性18份，符合率100%。

3 三種檢驗方法區(qū)別

通過對三種試驗方法比較，膠體金法和試管凝集結(jié)果相同，虎紅平板實驗和膠體金法結(jié)果接近。虎紅平板實驗操作簡單而且價格便宜、能快速檢測，適用于大群體的檢疫。試管凝集實驗是較常用的血清學(xué)診斷方法之一，其敏感性、特異性高，但操作步驟煩瑣。并且試管凝集實驗和虎紅平板實驗不能現(xiàn)場檢測，而膠體金法可以現(xiàn)場檢測，節(jié)省了時間，提高了檢測效率。并且具有良好的特異性、穩(wěn)定性、敏感性等優(yōu)點[2]。

4 細(xì)菌微生物檢驗

4.1 細(xì)菌分離培養(yǎng)

抽取虎紅平板試驗和膠體金法試驗都呈現(xiàn)陽性的血液15 mL血液培養(yǎng)瓶在血培養(yǎng)分析儀中培養(yǎng)，血培養(yǎng)分析儀報警表示血液中有細(xì)菌存在，將血液接種在血瓊脂平板放于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，可形成灰色圓形、微小凸起的光滑型菌落。

4.2 革蘭染色及油鏡鏡檢

取一滴生理鹽水于潔凈載玻片上，然后取單個菌落于載玻片涂抹成約蠶豆大菌膜，用手試熱烤干并固定，滴加結(jié)晶紫染色一分鐘水洗，盧戈氏碘媒染一分鐘水洗，95%乙醇脫色30 s水洗，稀釋復(fù)紅復(fù)染一分鐘水洗[3]，干燥后鏡檢，布氏桿菌呈現(xiàn)紅色革蘭陰性球桿菌，其他細(xì)菌呈現(xiàn)藍(lán)色。

5 預(yù)防措施

1）疫苗接種使用布魯氏菌活疫苗進行預(yù)防免疫，如S2株、M5株或BA0711株，可通過注射或口服方式進行免疫接種，提高羊群的整體免疫力。免疫計劃應(yīng)當(dāng)根據(jù)疫情風(fēng)險、地區(qū)政策和羊群狀況制定，確保免疫密度和持續(xù)時間的有效性[4]。

2）檢疫與監(jiān)測定期對羊群進行布魯氏菌病的檢疫檢查，發(fā)現(xiàn)陽性個體后及時剔除。引入羊群需確保來自無疫區(qū)，且經(jīng)過嚴(yán)格的檢疫和隔離觀察才能混入羊群中。

3）飼養(yǎng)管理加強飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生，定期消毒，避免水源和飼料受到污染。規(guī)范擠奶流程，嚴(yán)禁食用未經(jīng)巴氏消毒的生鮮奶產(chǎn)品。減少人員與病羊接觸，若必須接觸則需采取防護措施。

6 治療措施

目前布魯氏菌病在羊群中并無特效治療方法，一旦羊只感染，因其難以根治且有較強的傳染性，常常采取淘汰和撲殺病羊的方式，而非藥物治療。在某些情況下，對于珍貴品種或特殊情況下的個體，可嘗試使用抗生素治療，但療效有限且須遵守嚴(yán)格的法規(guī)要求。

7 抗菌療法

如果確有必要進行治療，可使用的抗生素包括多西環(huán)素、慶大霉素、鏈霉素等，但需遵照獸醫(yī)指導(dǎo)，并配合監(jiān)控藥物敏感性測試的結(jié)果，確保治療的有效性。抗生素治療主要用于減少體內(nèi)布魯氏菌的數(shù)量，但不能保證徹底清除，也無法防止再次感染或消除病羊的傳染性[5]。

8 總結(jié)

綜上所述，對于羊布魯氏菌病，重點在于預(yù)防為主，通過疫苗接種、檢疫監(jiān)測、改善飼養(yǎng)環(huán)境和規(guī)范管理等手段，降低感染的發(fā)生和傳播風(fēng)險。對于已感染的羊只，主要依靠撲殺和淘汰策略，輔以必要時的抗生素治療，并嚴(yán)格按照政府和獸醫(yī)部門的要求執(zhí)行各項防控措施。■

參考文獻：

[1] 張新華.一起羊布魯氏菌病的診斷及防控措施[J].福建畜牧獸醫(yī)，2015，37（6）：66-67.

[2] 吳清民.動物布魯氏菌病防控技術(shù)研究對策[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2010（3）：21-23.

[3] 何彥春，李克生，賀奮義，等.膠體金法和平板及試管凝集檢測羊布魯氏菌病的比較[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2016，35（5）：100-101.

[4] 鄭風(fēng)英.山東沾化多個中型養(yǎng)羊場布魯桿菌的分離鑒定與耐藥性分析[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014（12）：99-100.

[5] 王俊江，張嵐.當(dāng)前奶牛布氏桿菌病防控工作存在的問題及對策[J].中國畜牧獸醫(yī)，2007（3）：109.