EMS誘變的水稻不同位點突變體對ALS抑制劑類除草劑抗性差異

摘要：稻田雜草嚴重威脅水稻生長，培育抗除草劑水稻新品種，是高效解決稻田雜草危害的重要途徑之一。本研究利用甲基磺酸乙酯（EMS）對華占水稻進行化學誘變，創建突變體，利用乙酰乳酸合成酶（ALS）抑制劑類除草劑甲咪唑煙酸（20 g/hm²，有效成分）對突變體進行篩選，獲得抗甲咪唑煙酸突變體材料，并對上述突變體的OsALS基因序列進行分析，明確其突變類型。最后對不同突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的交互抗性進行分析。結果表明，華占水稻經EMS誘變和甲咪唑煙酸篩選后共獲得11株抗甲咪唑煙酸突變體材料，其突變類型為Pro171Leu、Ser627Cys、Ser627Asn和Gly628Glu 4種。其中，Ser627Cys為首次發現的突變類型。4種突變類型對甲咪唑煙酸的抗性水平存在一定的差異，Ser627Asn、Ser627Cys、Pro171Leu、Gly628Glu突變類型的抗性指數分別為8.71、5.16、3.28和3.69。4種突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的抗性亦存在顯著差異。其中，Ser627Asn突變類型對甲氧咪草煙的抗性最高，抗性指數為20.57，Gly628Glu對甲基二磺隆抗性最高，抗性指數為5.11。綜上，本研究通過EMS誘變獲得了4種抗ALS抑制劑類除草劑的華占水稻突變類型，并鑒定了其對甲咪唑煙酸的抗性差異及對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的交互抗性，為進一步的抗除草劑水稻品種培育和除草劑輪換使用提供依據。

關鍵詞：水稻；ALS抑制劑類除草劑；EMS誘變；抗除草劑突變體

中圖分類號：S511.035.2文獻標識碼：A文章編號：1000-4440（2024）07-1153-08Differences in ALS inhibitor herbicide resistance among rice mutants with different loci induced by EMS mutagenesisZHOU Jiawei WANG Xinkai TANG Zhaocheng LING Xitie ZHANG Baolong

（1.College of Tropical Agriculture and Forestry， Hainan University， Haikou 570228， China;2.Institute of Germplasm Resources and Biotechnology， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Jiangsu Provincial Key Laboratory of Agrobiology， Nanjing 210014， China）

Abstract：Weeds in paddy fields seriously threaten the growth of rice. Breeding new varieties of herbicide-resistant rice is one of the important ways to effectively solve the harm of weeds in paddy fields. In this study， ethyl methane sulfonate （EMS） was used as a chemical mutagen to induce Huazhan rice to create mutants. The mutants were screened by the acetolactate synthase （ALS） inhibitor herbicide imazapic （20 g/hm²） to obtain resistant mutant materials. The OsALS gene sequences of the above mutants were analyzed to clarify the mutation type. Finally， the cross-resistance of different mutant types to imazamox and mesosulfuron-methyl was analyzed. The results showed that 11 imazapic-resistant mutants were obtained from Huazhan rice by EMS mutagenesis and imazapic screening. The mutation types were Pro171Leu， Ser627Cys， Ser627Asn and Gly628Glu. Among them， Ser627Cys mutation type was first reported. The resistance levels of the four mutation types to imazapic were different. The resistance indices of Ser627Asn， Ser627Cys， Pro171Leu and Gly628Glu were 8.71， 5.16， 3.28 and 3.69， respectively. There were also significant differences in the resistance of the four mutation types to imazamox and mesosulfuron-methyl. The resistance of Ser627Asn to imazamox was the highest， and the resistance index was 20.57. The resistance of Gly628Glu to mesosulfuron-methyl was the highest， and the resistance index was 5.11. In summary， four Huazhan rice mutant types resistant to ALS inhibitor herbicides were obtained by EMS mutagenesis， and their resistance differences to imazapic and the cross-resistance to imazamox and mesosulfuron-methyl were identified， which provided a basis for further cultivation of herbicide-resistant rice varieties and rotation of herbicides.

Key words：rice;ALS inhibitor herbicide;EMS mutagenesis;herbicide-resistant mutant

水稻（Oryza sativa L.）是全球最重要的糧食作物之一。稻田雜草與水稻爭奪生長發育所需的營養成分是制約水稻生產的重要生物因子，且同為稻屬的雜草稻不受現有稻田除草劑影響，嚴重影響水稻的產量和品質[1-2]。目前稻田雜草防除主要通過化學除草的方法實現。化學除草具有效率高、成本低的特點，但單一除草劑的長期使用容易導致雜草產生抗藥性，同時除草劑的過量使用還會對水稻造成藥害[3]。目前生產中，常通過除草劑的輪換和混合使用延緩雜草對除草劑抗性的產生。近年來，抗除草劑水稻種質的培育為稻田雜草的防除提供了新的手段[4-5]。

纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸等支鏈氨基酸（Branched chain amino acids，BCAA）是植物生長發育必需的氨基酸，乙酰乳酸合酶（ALS）是合成BCAA的關鍵酶[6]。ALS抑制劑類除草劑能與植物ALS形成復合物，阻礙其與底物結合，抑制ALS活性，從而減少支鏈氨基酸的合成，最終導致植物死亡。ALS抑制劑類除草劑主要包括咪唑啉酮類（Imidazolidinones，IMI）、磺酰脲類（Sulfonylureas，SU）、三唑并嘧啶類（Triazole pyrimidines，TP）、嘧啶水楊酸類（Pyrimidinylthio-benzoates，PTB）、磺酰胺基羰基三唑并嘧啶類（Sulfonylamino-carbonyltriazolinones，SCT）[7-8]。

ALS氨基酸突變能使植物獲得對ALS抑制劑類除草劑的抗性。水稻ALS基因第96、122、171、197、548、627和628位點突變能使水稻對ALS抑制類除草劑產生抗性[9-10]。Croughan[11]和Powles等[12]通過化學誘變AS3510和Cypress 2個水稻品種，分別用咪唑乙煙酸和甲咪唑煙酸對M2代進行篩選，獲得ALS基因第627位點突變（編碼的氨基酸由絲氨酸突變為天冬酰胺）的抗除草劑水稻品種CL121、CL141和第628位點突變（編碼的氨基酸由甘氨酸突變為谷氨酸）的抗除草劑水稻品種CL161、XL8，并用于商業化生產。Shoba等[13]通過EMS誘變旱稻品種N22，獲得第152位點突變（編碼的氨基酸由甘氨酸突變為谷氨酸）的抗咪唑啉酮類除草劑咪草煙材料HTM-N22。Gealy等[14]通過EMS誘變水稻品種IRGA417，獲得第96位點突變（編碼的氨基酸由丙氨酸突變為蘇氨酸）的抗咪唑啉酮類除草劑水稻品種PUIT INTA CL。Okuzaki等[15]利用雙草醚篩選水稻花藥衍生的愈傷組織，獲得第95位點突變（編碼的氨基酸由甘氨酸突變為丙氨酸）的抗磺酰脲類除草劑水稻品種。Chen等[16]通過EMS誘變水稻品種黃華占獲得第548位點、第96位點、第627位點、第628位點突變的抗除草劑水稻系列品種，其中，第548位點突變的材料經過回交和除草劑篩選獲得能穩定遺傳的抗除草劑水稻品種JTD-001。Piao等[17]利用CRISPR/Cas9技術定點突變南粳9108的OsALS基因，獲得第628位點突變（編碼的氨基酸由甘氨酸突變為色氨酸）的抗除草劑水稻品種；王芳權等[18]利用除草劑對7 000多個水稻品種進行篩選，獲得1個抗咪唑乙煙酸除草劑水稻品種金粳818，其ALS基因突變類型為Ser627Asn。

目前對于抗ALS抑制劑類除草劑水稻的研究主要集中在材料創制方面，而同一突變位點對不同ALS抑制劑類除草劑是否存在交互抗性、同一遺傳背景下的ALS不同突變位點對ALS抑制劑類除草劑的抗性是否存在差異的研究較少。本研究利用甲基磺酸乙酯（EMS）對恢復系水稻品種華占進行化學誘變，構建突變體庫，并利用甲咪唑煙酸對突變體庫進行篩選，獲得抗甲咪唑煙酸突變體材料，并對上述突變體的OsALS基因序列進行分析，明確其突變類型。最后分析不同類型突變體對甲咪唑煙酸、甲氧咪草煙、甲基二磺隆的抗性，為抗ALS抑制劑類除草劑水稻種質的培育和除草劑輪換使用提供依據。

1材料與方法

1.1材料與試劑

供試水稻材料為秈稻品種華占（品種權號：CNA20080059.0）。化學誘變劑甲基磺酸乙酯（EMS）購自Sigma-aldrich公司，4%甲氧咪草煙（咪唑啉酮類除草劑）購自江蘇省農用激素工程技術研究中心有限公司，30 g/L甲基二磺隆（磺酰脲類除草劑）購自富美實農業科技有限公司，240 g/L甲咪唑煙酸（咪唑啉酮類除草劑）購自德國巴斯夫公司。DNA提取和PCR擴增所用試劑購自南京諾維贊科技有限公司，引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，DNA測序由南京擎科生物科技有限公司完成。

1.2抗甲咪唑煙酸除草劑水稻突變體篩選

華占突變體種子庫的構建：選取顆粒飽滿華占水稻種子200 kg晾曬后用清水浸種2 h，再用質量濃度5 g/L的EMS溶液常溫浸種14 h，然后加入25 g/L的硫代硫酸鈉進行中和反應15 min，倒掉廢液，用自來水清洗種子5次，每次清洗5 min。EMS誘變處理后的種子按60 kg/hm²播種量直播在大田，正常肥水管理，于成熟期混收種子，收獲的種子即為華占突變體種子庫。

從EMS誘變獲得的華占突變體種子庫中隨機選取243 kg種子，以900 kg/hm²高密度撒播于大田苗床，播種面積為0.27 hm²。于秧苗3葉期全田噴施有效成分為20 g/hm²的甲咪唑煙酸，噴藥后14 d觀察苗床植株存活情況，生長正常的植株作為具有抗性的突變體單株移栽至溫室，單株收種用于后續試驗。

1.3抗除草劑水稻突變體OsALS基因序列分析

單株剪取篩選得到的突變體及野生型華占植株葉片1 g，使用DNA試劑盒提取突變體及野生型DNA。根據在NCBI（美國國家生物信息中心）網站上檢索得到的水稻OsALS基因保守序列，設計特異性引物 OsALS-F和OsALS-R，引物序列分別為5′-TCGCCCAAACCCAGAAACCC-3′和5′-CTCTTTATGGGTCATTCAGGTC-3′。利用B-96型梯度PCR儀（杭州博日科技股份有限公司產品）對突變體和野生型植株的OsALS基因進行PCR擴增，PCR擴增體系為：DNA 1.0 μL、引物OsALS-F、OsALS-R各1.0 μL、Phanta Max 高保真 DNA 聚合酶1.0 μL、2×Phanta Max Buffer 25.0 μL、dNTP Mix（10 mmol/L）1.0 μL、5% 二甲基亞砜（DMSO）2.5 μL、雙蒸水（ddH2O）補至50.0 μL。擴增程序為預變性95 ℃ 2 min；變性95 ℃ 15 s，退火58 ℃ 15 s ，延伸72 ℃ 2 min，35個循環。擴增產物送南京擎科生物科技有限公司測序，采用SnapGene 4.1.8軟件對測序結果進行分析比對。

1.4抗性突變體對甲咪唑煙酸的抗性鑒定

參照文獻[19]的方法對突變體和野生型水稻對甲咪唑煙酸的抗性水平測定。選取均勻一致的突變體種子、野生型水稻種子，播種到盛有土壤的穴盤中，每穴播種10粒。在水稻2葉期間苗，每穴保留生長一致的幼苗5株。于水稻3葉期時，利用3WP-2000型行走式噴霧塔進行甲咪唑煙酸噴霧處理，噴液壓力0.275 mPa，噴液量450 L/hm²。野生型水稻噴施甲咪唑煙酸劑量（有效成分）分別為0 g/hm²、14.4 g/hm²、21.6 g/hm²、32.4 g/hm²、48.6 g/hm²、72.6 g/hm²、109.4 g/hm² 、164.0 g/hm² 8個處理，突變體噴施甲咪唑煙酸劑量（有效成分）分別為0 g/hm²、14.4 g/ hm²、21.6 g/hm²、32.4 g/hm²、48.6 g/hm²、72.6 g/hm²、109.4 g/hm²、164.0 g/hm²、246.0 g/hm²、369.1 g/hm² 、553.6 g/hm²共11個處理，每個處理4個重復。施藥后21 d時剪取各處理的植株地上部存活組織，稱取鮮重[20]。

1.5抗性突變體和野生型植株對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的交互抗性鑒定參照抗性突變體對甲咪唑煙酸的抗性水平測定方法，于水稻3葉期開展突變體和野生型水稻對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的交互抗性鑒定。甲氧咪草煙和甲基二磺隆有效成分的梯度處理如表1所示。每個處理設4個重復。

1.6數據處理及分析

利用Sigmaplot 14. 0軟件進行圖、表的制作。利用Logistic方程擬合不同處理下突變體和野生型水稻除草劑劑量與鮮重抑制率的關系，進行鮮重抑制中量（GR50）的計算，并根據的突變體材料的GR50與野生型水稻的GR50比值，計算不同突變體材料的抗性指數（RI），以明確突變體水稻對除草劑的抗性強弱。

2結果與分析

2.1抗性突變體的篩選獲得

華占突變體群體噴施甲咪79b35e2446514cb1067fa0eb099b377e唑煙酸后，植株生長受抑制，14 d后非抗性植株基本死亡，本次篩選共得到11個存活單株，如圖1所示。對存活單株進行移栽和單株收種，用于進一步的突變類型及除草劑抗性鑒定試驗。

2.2抗性突變體OsALS基因序列分析

獲得的11個抗性突變體與野生型OsALS基因序列差異結果如圖2所示。11個突變體單株OsALS基因的突變類型有4種，其中有3個抗性單株的OsALS基因第512堿基由C突變為T，1個抗性單株的OsALS基因第1 879堿基由A突變為T，4個抗性單株的OsALS基因第1 880堿基由G突變為A，3個抗性單株的OsALS基因第1 883堿基由G突變為A。11個突變體對應的氨基酸突變類型分別為Pro171Leu、Ser627Cys、Ser627Asn、Gly628Glu 4種。其中，Ser627Cys為本研究發現的新突變類型。

2.3抗性突變體對甲咪唑煙酸的抗性水平

與野生型相比， 4種華占ALS突變類型均對甲咪唑煙酸表現出明顯的抗性（圖3、圖4、表2）。野生型華占對甲咪唑煙酸的GR50值為18.88 g/hm²，Pro171Leu突變類型對甲咪唑煙酸的GR50值為61.86 g/hm²；Ser627Cys突變類型對甲咪唑煙酸的GR50值為97.49 g/hm²；Ser627Asn突變類型對甲咪唑煙酸的GR50值為164.50 g/hm²；Gly628Glu突變類型對甲咪唑煙酸的GR50值為69.71 g/hm²。4種突變類型中，以Ser627Asn突變類型對甲咪唑煙酸的抗性最好，抗性指數為8.71；其次是Ser627Cys突變類型，抗性指數為5.16；Pro171Leu與Gly628Glu兩種突變類型對甲咪唑煙酸的抗性水平相當，抗性指數分別為3.28和3.69。

Pro171Leu、Ser627Cys、Ser627Asn、Gly628Glu為突變類型；WT為野生型華占。A～K分別表示甲咪唑煙酸劑量（有效成分）為0 g/hm²、14.4 g/hm²、21.6 g/hm²、32.4 g/hm²、48.6 g/hm²、72.6 g/hm²、109.4 g/hm²、164.0 g/hm²、246.0 g/hm²、369.1 g/hm²、553.6 g/hm²。

2.44種抗性突變體對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的交互抗性與野生型相比， 4種華占ALS突變類型均對甲氧咪草煙和甲基二磺隆表現出不同的抗性水平（如圖5、圖6和表3）。野生型華占對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的GR50值分別為8.55 g/hm²和13.18 g/hm²，Pro171Leu突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的GR50值分別為45.93 g/hm²和46.69 g/hm²；Ser627Cys突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的GR50值分別為31.59 g/hm²和56.61 g/hm²； Ser627Asn突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的GR50值分別為175.91 g/hm²和43.78 g/hm²； Gly628Glu突變類型對甲氧咪草煙和甲基二磺隆的GR50值分別為39.41 g/hm²和67.38 g/hm²。4種突變類型中，Ser627Asn突變類型對甲氧咪草煙的抗性最高，抗性指數為20.57；其次是Pro171Leu和Gly628Glu突變類型，抗性指數為5.37和4.61；Ser627Cys突變類型對甲氧咪草煙的抗性水平最低，抗性指數為3.69。甲基二磺隆噴施處理下，Gly628Glu突變類型的抗性最高，抗性指數為5.11，其次為Ser627Cys突變類型，抗性指數為4.29；Pro171Leu與Ser627Asn兩種突變類型對甲基二磺隆的抗性水平相當，抗性指數分別為3.54和3.32。

3討論

ALS抑制劑類除草劑是一種低毒、高效的除草劑，常用于水稻、小麥、玉米等作物中各類雜草的防治。但田間長期使用單一除草劑會導致抗除草劑雜草大量產生，嚴重危害作物的生長發育以及產量。不同類型除草劑的輪換使用對于延緩抗除草劑雜草產生和控制抗除草劑雜草進化具有重要意義。甲氧咪草煙屬于咪唑啉酮類（IMI）除草劑，主要用于大豆田，甲基二磺隆是磺酰脲類（SU）除草劑，主要用于小麥田，這2種除草劑主要用于苗后除草，可以防除多種禾本科以及闊葉類雜草，目前這2種除草劑并未在稻田雜草上登記使用[21-22]。本研究通過檢驗抗除草劑水稻突變體對這2種除草劑的交互抗性水平為這2種除草劑在水稻田上的使用以及抗除草劑水稻育種提供一定的理論依據。

隨著除草劑的大量應用，研究人員對抗除草劑水稻新品種的創制越發重視。水稻對除草劑產生耐受性的機制主要包括2個方面：靶點抗性（Target-site resistance，TSR）和非靶點抗性（Nontarget-site resistance，NTSR）。目前，抗除草劑水稻新品種的研究主要集中于TSR[23]。本研究利用除草劑對EMS誘變的M2代水稻進行篩選，獲得4種抗除草劑突變類型，并對其相關OsALS基因序列進行克隆分析，鑒定到Pro171Leu、Ser627Cys、Ser627Asn、Gly628Glu 4種ALS突變類型。其中，Pro171Leu、Ser627Asn、Gly628Glu 3種突變類型已有報道，而Ser627Cys為新發現的突變類型[4]。Powles等[12]研究認為水稻對除草劑產生耐受性與ALS活性變化有關，即基因突變導致ALS結構發生變化，從而使得植株與除草劑的結合能力有所改變。由于不同類型的ALS抑制劑與酶的結合位點不同，導致不同突變位點對于不同類型ALS抑制劑類除草劑耐受性具有差異。Ser627Asn突變類型對IMI類除草劑的耐受性更強，而Gly628Glu突變類型對SU類除草劑的耐受性更強[10，24-25]，這與本研究的結果基本一致，但這4種突變類型的ALS活性差異以及突變位點導致的酶結構差異還需進一步進行研究。

目前使水稻產生除草劑抗性的主要手段包括化學誘變、轉基因及基因編輯技術[26-27]。轉基因技術可以賦予作物新性狀，在植物抗逆性研究中廣泛應用。Dong等[28]將熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）中的G2-EPSPS基因轉入水稻中花11中，轉基因水稻對草甘膦的耐受性比野生型提高100倍以上。但由于轉基因作物對人體和環境的安全性還缺乏全面認證，一定程度上限制了轉基因作物的推廣。通過化學誘變得到的水稻突變體，比轉基因水稻更加安全，接受程度更高。目前，一些通過誘變獲得的水稻突變體材料已經得到推廣并用于商業化種植，如ALS突變類型Ser627Asn、Gly628Glu等。這些水稻品種與其他一些商業化非轉基因抗除草劑作物是Clearfield生產系統的基礎[29]。Clearfield生產系統中通過非轉基因抗除草劑作物品種和對應抗性的廣譜除草劑相結合應用，可更加高效地控制田間雜草，防止除草劑殘留對作物造成的傷害，保證水稻的產量和質量。本研究創制的抗除草劑水稻突變體來源于EMS誘變，無外源基因插入，可以為Clearfield生產系統提供新的抗除草劑水稻材料，為水稻生產和雜草管理提供新的種質資源。

4結論

本研究利用化學誘變華占水稻，創建突變體，并用甲咪唑煙酸篩選獲得Pro171Leu 、Ser627Cys、Ser627Asn和Gly628Glu 4種突變類型。除草劑抗性水平試驗結果表明，4種突變類型中以Ser627Asn突變類型對IMI類除草劑甲氧咪草煙的抗性最高，而Gly628Glu突變類型對SU類除草劑甲基二磺隆的抗性最高。本研究結果為培育抗除草劑水稻品種提供新的種質資源，對稻田雜草的高效防治，稻田效益提高具有重要作用。

參考文獻：

[1]孫學海. 稻田雜草綜合防治技術[J]. 現代農業科技，2011 （16）：146，148.

[2]ALLARD J L， KEEFUI K， MORISHIMA Y， et al. The crop protection industry’s view on trends in rice crop establishment in Asia and their impact on weed management techniques[C]//TORIYAMA K. Rice is life：scientific perspectives for the 21st century. Proceedings of the World Rice Research Conference 2004. Manila：IRRI，2004：205-208.

[3]伍龍梅，張悅，劉妍，等. 直播稻研究進展及發展對策分析[J]. 中國農學通報，2023，39（6）：1-5.

[4]吳云雨，肖寧，余玲，等. 我國抗除草劑水稻種質創制研究進展[J]. 植物遺傳資源學報，2021，22（4）：890-899.

[5]李香菊. 我國轉基因耐除草劑作物研發與應用[J]. 現代農藥，2023，22（1）：5-10.

[6]任洪雷. 乙酰乳酸合成酶及ALS基因研究概述[J]. 中國農學通報，2016，32（26）：37-42.

[7]張紅磊，李軍玲，張融雪，等. ALS以及ALS抑制劑類除草劑的研究進展[J]. 植物學研究，2021，10（6）：11.

[8]陳濤，張善磊，趙凌，等. ALS抑制劑類除草劑抗性水稻功能標記的開發與驗證[J]. 中國水稻科學，2018，32（2）：137-145.

[9]GALILI G， AMIR R， FERNIE A R. The regulation of essential amino acid synthesis and accumulation in plants[J]. Annual Review of Plant Biology，2016，67（1）：153-178.

[10]劉長樂，郭月，李芳芳，等. 抗ALS類除草劑作物種質創制與利用研究進展[J]. 植物遺傳資源學報，2022，23（2）：333-345.

[11]CROUGHAN T P. Herbicide Resistant Rice：United States：20080167186[P]. 2008-07-10.

[12]POWLES S B， YU Q. Evolution in action：plants resistant to herbicides[J]. Annual Review of Plant Biology，2010，61：317-347.

[13]SHOBA D， RAVEENDRAN M， MANONMANI S， et al. Development and genetic characterization of a novel herbicide （Imazethapyr） tolerant mutant in rice （Oryza sativa L.）[J]. Rice （New York），2017，10（1）：10.

[14]GEALY D， MITTEN D， RUTGER J. Gene flow between red rice （Oryza sativa） and herbicide-resistant rice （O. sativa）：implications for weed management[J]. Weed Technology，2003，17：627-645.

[15]OKUZAKI A， SHIMIZU T， KAKU K， et al. A novel mutated acetolactate synthase gene conferring specific resistance to pyrimidinyl carboxy herbicides in rice[J]. Plant Molecular Biology，2007，64（1/2）：219-224.

[16]CHEN L， GU G， WANG C， et al. Trp548Met mutation of acetolactate synthase in rice confers resistance to a broad spectrum of ALS-inhibiting herbicides[J]. The Crop Journal，2021，9（4）：750-758.

[17]PIAO Z， WANG W， WEI Y， et al. Characterization of an acetohydroxy acid synthase mutant conferring tolerance to imidazolinone herbicides in rice （Oryza sativa）[J]. Planta，2018，247（3）：693-703.

[18]王芳權，楊杰，范方軍，等. 水稻抗咪唑啉酮類除草劑基因ALS功能標記的開發與應用[J]. 作物學報，2018，44（3）：324-331.

[19]中華人民共和國農業部. 農藥室內生物測定試驗準則-（除草劑）第4 部分活性測定試驗莖葉噴霧法：NY/T 1155.4-2006[S]. 北京：中國農業出版社，2006.

[20]張麗雅，李奇，史珊珊，等. 稻田稗草對五氟磺草胺的抗性機制及其防治藥劑篩選[J]. 中國農業科學，2023，56（14）：2713-2723.

[21]亦冰. 豆類作物除草劑——甲氧咪草煙銨鹽[J]. 世界農藥，2006，28（4）：52，46.

[22]趙波. 甲基二磺隆的前世今生[J]. 農藥市場信息，2020（22）：36.

[23]鄧麗琴，祝朋芳，陳長青. 試論常規育種與分子育種的研究應用[J]. 園藝與種苗，2004，24（5）：280-281.

[24]YU Q， POWLES S B. Resistance to AHAS inhibitor herbicides：current understanding[J]. Pest Management Science，2014，70（9）：1340-1350.

[25]MCCOURT J A， PANG S S， KING-SCOTT J， et al. Herbicide-binding sites revealed in the structure of plant acetohydroxyacid synthase[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2006，103（3）：569-573.

[26]李凌燕，肖冰，張旭冬，等. 轉基因耐除草劑玉米MON87419品系特異性定性PCR檢測方法的建立[J]. 江蘇農業科學，2023，51（1）：50-57.

[27]鄒拓，杜琪，耿雷躍，等. 抗除草劑水稻耐藥性及后代篩選方法的研究[J]. 江蘇農業科學，2022，50（13）：136-140.

[28]DONG Y， JIN X， TANG Q， et al. Development and event-specific detection of transgenic glyphosate-resistant rice expressing the G2-EPSPS gene[J]. Frontiers in Plant Science，2017，8：885.

[29]TAN S， EVANS R R， DAHMER M L， et al. Imidazolinone-tolerant crops：history，current status and future[J]. Pest Management Science，2005，61（3）：246-257.

（責任編輯：石春林）