磁性“一步法”-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中28種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

摘要 基于磁性納米材料建立了磁性“一步法”前處理技術(shù)，結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法，實(shí)現(xiàn)了水產(chǎn)品中28 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的精準(zhǔn)定量分析。針對(duì)水產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)、脂肪和脂肪酸的特點(diǎn)，選擇磁性聚合物（聚二乙烯基苯-吡咯烷酮， Fe3O4-PLS）為凈化劑，通過(guò)疏水作用、氫鍵和π-π鍵等相互協(xié)同作用高效吸附基質(zhì)干擾組分，凈化樣品。優(yōu)化了萃取溶劑類(lèi)型及用量、鹽析與除水劑、Fe3O4-PLS 和C18 用量等實(shí)驗(yàn)條件。在最佳樣品前處理?xiàng)l件下， 28 種有機(jī)磷農(nóng)藥的方法檢出限（MLOD）為0.03～0.85 μg/kg，方法定量限（MLOQ）為0.50～2.00 μg/kg；不同添加濃度水平下目標(biāo)物的平均回收率為60.1%～119.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSDs）為0.8%～19.0%，方法的靈敏度和準(zhǔn)確度高。與QuEChERS 方法對(duì)比，本方法在萃取溶劑、鹽析與除水劑和凈化劑用量以及分析效率等方面均展現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)。采用本方法檢測(cè)不同種類(lèi)水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，結(jié)果表明，本方法具有良好的實(shí)用性，可為水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速分析提供新的方法依據(jù)。

關(guān)鍵詞 Fe3O4-PLS；磁性“一步法”；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；水產(chǎn)品；有機(jī)磷農(nóng)藥

水產(chǎn)品富含人體所需的蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸和維生素等，是人類(lèi)飲食的重要組成部分[1]。然而，水產(chǎn)品在養(yǎng)殖過(guò)程中易受到多種污染物的污染[2-4]。有機(jī)磷農(nóng)藥廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，可通過(guò)地表徑流、地下水滲透、沉降和廢水排放等途徑進(jìn)入水環(huán)境[5-8]；同時(shí)，有機(jī)磷農(nóng)藥也應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的清塘和病蟲(chóng)害防治[9-10]，殘留在水中的有機(jī)磷農(nóng)藥可通過(guò)吸入、皮膚接觸和攝食等途徑污染水產(chǎn)品[3，11]，并通過(guò)食物鏈的生物放大作用在人體內(nèi)積累，對(duì)消費(fèi)者的健康構(gòu)成潛在危害[12-14]。為保障水產(chǎn)品的質(zhì)量安全和消費(fèi)者的健康，亟需建立水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的快速、精準(zhǔn)分析方法。

目前，水產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的分析通常采用有機(jī)溶劑萃取，萃取液經(jīng)固相萃取[15]或分散固相萃取（d-SPE）[11，16]凈化后，結(jié)合色譜和質(zhì)譜實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量分析。其中， d-SPE 方法多以N-丙基乙二胺（Primarysecondary amine， PSA）、十八烷基硅烷（Octadecylsilane， C18）和石墨化炭黑（Graphitized carbon black，GCB）等商品化吸附劑，以及m-ZrO2@Fe3O4、Fe3O4-OPA 和Fe3O4-PLS 等磁性材料[17-18]為凈化劑[19-20]，通過(guò)吸附去除影響目標(biāo)物回收率和準(zhǔn)確度的基質(zhì)干擾物，實(shí)現(xiàn)樣品凈化，改善了SPE 方法容易堵塞柱、耗時(shí)等問(wèn)題，具有操作簡(jiǎn)便、快速和高效等優(yōu)勢(shì)，在污染物殘留分析領(lǐng)域具有較好的應(yīng)用前景。特別是以磁功能材料為凈化劑的d-SPE 方法可避免凈化過(guò)程的離心分離，提升了樣品前處理效率。然而，其萃取過(guò)程仍需要一次高速離心，而離心機(jī)的體積大，處理通量低，限制了批量樣品的分析速度。Qi 等[21]通過(guò)平衡萃取和凈化過(guò)程中樣品量的差異，將萃取和凈化過(guò)程合并為一步，并基于磁功能材料快速分離的特性，構(gòu)建了磁性“一步法”前處理技術(shù)，無(wú)需離心分離，單個(gè)樣品前處理時(shí)間可縮短至5 min以內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了果蔬中多農(nóng)藥殘留的高效分析。然而，磁性“一步法”在水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析方面的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。針對(duì)水產(chǎn)品基質(zhì)復(fù)雜，富含蛋白質(zhì)、脂肪和脂肪酸等特點(diǎn)，篩選對(duì)水產(chǎn)品基質(zhì)組分具有理想吸附性能的磁功能材料對(duì)保障目標(biāo)物的精準(zhǔn)定量分析至關(guān)重要。基于親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮單體制備的磁性聚合物Fe3O4-PLS[17]可通過(guò)疏水作用、氫鍵和π-π鍵等作用力協(xié)同，實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)品中脂肪、蛋白質(zhì)和脂肪酸等基質(zhì)干擾物的吸附去除，從而達(dá)到基質(zhì)凈化和準(zhǔn)確分析目標(biāo)物的目的[22-24]。

本研究以Fe3O4-PLS 為凈化劑，系統(tǒng)考察了萃取溶劑類(lèi)型和用量、鹽析與除水劑、Fe3O4-PLS 和C18用量等關(guān)鍵因素對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響，得到了水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的最佳樣品前處理?xiàng)l件，并結(jié)合LC-MS/MS 技術(shù)構(gòu)建了水產(chǎn)品中28 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的精準(zhǔn)定量分析方法。采用本方法對(duì)浙江省內(nèi)不同種類(lèi)水產(chǎn)品（魚(yú)、蝦和蟹類(lèi)等）中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，進(jìn)一步驗(yàn)證了本方法在實(shí)際樣品分析中的適用性。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

島津8050 三重四極桿質(zhì)譜儀和Nexera X2 超高效液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；ALC-210.2 電子天平（感量0.01 g，瑞士Mettler Toleco 公司）；BS224S 電子天平（德國(guó)IKA 公司）；Vortex2 渦旋儀（德國(guó)IKA 公司）；Milli-Q Integral 純水儀（美國(guó)Millipore 公司）。

28 種有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，純度均大于98%，購(gòu)于上海農(nóng)藥研究所和農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，詳見(jiàn)電子版文后支持信息表S1。甲醇和乙腈（色譜純，美國(guó)Merck 公司）；甲酸（色譜純，美國(guó)ACS 恩科化學(xué)公司）；乙酸（分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）；C18（50 μm）、PSA（40～60 μm）、NaCl 和無(wú)水MgSO4（分析純，天津博納艾杰爾科技有限公司）；檸檬酸鈉和檸檬酸二鈉鹽倍半水合物（分析純，北京百靈威科技有限公司）；Fe3O4-PLS（粒徑760 nm）為實(shí)驗(yàn)室自制[23]。實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q Integral 純水儀制備的超純水（18.2 MΩ·cm）。

水產(chǎn)品樣品哈氏仿對(duì)蝦、梭子蟹、青蟹、南美白對(duì)蝦、美國(guó)紅魚(yú)、大黃魚(yú)、鯽魚(yú)、鱸魚(yú)、鯉魚(yú)、鯛魚(yú)和鳊魚(yú)等均購(gòu)自浙江省杭州市超市。實(shí)際樣品監(jiān)測(cè)中的18 批次水產(chǎn)品樣品分別采集于浙江省內(nèi)11 個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（詳情見(jiàn)電子版文后支持信息圖S1），采樣點(diǎn)和水產(chǎn)品詳細(xì)信息見(jiàn)電子版文后支持信息表S1。水產(chǎn)品樣品經(jīng)解剖、清洗、去除其頭和尾等不可食用部位后，將肌肉組織切塊，用攪拌器攪拌均勻，于–18 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理方法

磁性“一步法”：稱(chēng)取2.00 g（±0.02 g）上一節(jié)中制得的水產(chǎn)品樣品于50 mL 離心管中，準(zhǔn)確加入1.5 mL 水和3.5 mL 2%乙酸乙腈，渦旋1 min；加入2 g NaCl-MgSO4（1∶4， m/m）、40 mg Fe3O4-PLS 和10 mg C18，渦旋1 min， 然后將其置于長(zhǎng)方體磁鐵側(cè)面， 30 s 即可完全分離；取1 mL 上清液，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)行LC-MS/MS 分析。

QuEChERS 方法參考文獻(xiàn)[25]。準(zhǔn)確稱(chēng)取10.0 g 蝦于50 mL 離心管中，加入10 mL 乙腈，渦旋1 min，隨后加入4 g MgSO4、1 g NaCl、1 g 檸檬酸鈉和0.5 g 檸檬酸二鈉鹽倍半水合物，渦旋1 min， 4000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確移取7 mL 上清液轉(zhuǎn)移到含有400 mg PSA、400 mg C18 和1200 mg 無(wú)水MgSO4 的15 mL離心管中，渦旋1 min， 4000 r/min 離心5 min， 上清液經(jīng)0. 22 μm 濾膜過(guò)濾，進(jìn)行LC-MS/MS 分析。

1.2.2 儀器分析條件

采用Nexera X2 超高效液相色譜儀和島津8050 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行定量分析。采用Luna OmegaC18 色譜柱（100 mm×2.1 mm， 1.6 μm）進(jìn)行分離，柱溫箱溫度為35 ℃；流動(dòng)相A 為0.1%（V/V）甲酸溶液，流動(dòng)相B 為甲醇；梯度洗脫（0～2 min， 20% B；2～12 min， 20%～90% B；12～14 min， 90% B；14～14.2 min， 90%～20% B；14.2～20 min， 20% B）；總運(yùn)行時(shí)間為20 min；流動(dòng)相流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣體積為1 μL。

串聯(lián)質(zhì)譜采用電噴霧離子源（ESI），所有農(nóng)藥均采用正離子模式檢測(cè)。正離子模式下ESI 電壓為4000 V，毛細(xì)管溫度為300 ℃，加熱塊溫度為400 ℃， 脫溶劑管（DL）溫度為250 ℃；干燥氣（氮?dú)猓⒓訜釟猓諝猓┖挽F化氣（氮?dú)猓┑牧魉俜謩e設(shè)置為10、10 和3 L/min；碰撞氣為氬氣。串聯(lián)質(zhì)譜采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple reaction monitoring， MRM）模式，每對(duì)離子的駐留時(shí)間為2 ms。每個(gè)化合物的母離子-子離子對(duì)及相應(yīng)的碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)詳見(jiàn)電子版文后支持信息表S2。

1.2.3 方法驗(yàn)證

配制濃度為0.5、1、2、5、10、25、50、100 和250 μg/L 的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液。通過(guò)繪制分析物的峰面積與濃度的關(guān)系擬合溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，并以基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率的比值評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)。方法檢出限（MLODs）根據(jù)3 倍信噪比和稀釋因子計(jì)算得到，方法定量限（MLOQs）根據(jù)SANTE/11312/2021 定義為滿足目標(biāo)物回收率和精密度要求的最低加標(biāo)水平。經(jīng)前處理后的樣品采用LC-MS/MS 分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品前處理方法的建立

對(duì)萃取溶劑類(lèi)型、鹽析與除水劑、Fe3O4-PLS 和C18 用量等關(guān)鍵因素進(jìn)行了優(yōu)化。選擇哈氏仿對(duì)蝦為代表基質(zhì)，預(yù)先制備混配農(nóng)藥的基質(zhì)樣品，使每種有機(jī)磷農(nóng)藥的添加濃度為100 μg/kg， 經(jīng)前處理后，進(jìn)行LC-MS/MS 分析。以28 種農(nóng)藥的回收率分布情況評(píng)價(jià)總體回收率，以確定最佳的樣品前處理?xiàng)l件。

2.1.1 萃取溶劑類(lèi)型及用量的優(yōu)化

乙腈是水產(chǎn)品污染物殘留分析中兼顧目標(biāo)物萃取效率和蛋白沉淀效率的最相容溶劑[26-27]，通過(guò)向乙腈中加入乙酸等溶劑可進(jìn)一步提高目標(biāo)分析物的萃取效率[28-29]。考察了不同類(lèi)型溶劑（乙腈、0.5%乙酸-乙腈、1%乙酸-乙腈、1.5%乙酸-乙腈和2%乙酸-乙腈）對(duì)28 種有機(jī)磷農(nóng)藥萃取效率的影響。結(jié)果表明（圖1A），當(dāng)萃取溶劑為純乙腈時(shí)， 28 種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率為35.4%～189.0%，僅53.6%的有機(jī)磷農(nóng)藥回收率在70%～120%范圍內(nèi)。隨著乙酸濃度增加，有機(jī)磷農(nóng)藥回收率分布在70%～120%內(nèi)的數(shù)量逐漸增加。當(dāng)乙酸濃度增至2%時(shí)， 28 種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率為65.2%～101.0%，其中， 89.3%的目標(biāo)物回收率分布在70%～120%范圍內(nèi)。因此，選擇2%乙酸-乙腈用于水產(chǎn)品中28 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的萃取。

萃取溶劑用量也會(huì)影響有機(jī)磷農(nóng)藥回收率。探究了不同用量的2%乙酸-乙腈對(duì)28 種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率的影響（見(jiàn)電子版文后支持信息圖S2）。當(dāng)2%乙酸-乙腈用量為3 mL 時(shí)，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率為65.8%～107.0%，其中89.3%的目標(biāo)農(nóng)藥回收率在70%～120%范圍內(nèi)。當(dāng)2%乙酸-乙腈用量為3.5 mL 時(shí)，28 種有機(jī)磷農(nóng)藥的回收率為71.6%～112.0%。然而，隨著乙腈用量的繼續(xù)增加，甲胺磷和氧化樂(lè)果等農(nóng)藥回收率呈下降趨勢(shì)，當(dāng)2%乙酸-乙腈用量為4.0 和4.5 mL 時(shí)，目標(biāo)農(nóng)藥回收率分別為53.2%～118.0%和51.7%～117.0%。綜上，選擇2%乙酸乙腈的用量為3.5 mL。

2.1.2 鹽析和除水劑用量的優(yōu)化

NaCl 和無(wú)水MgSO4（1∶4， m/m）是常用的鹽析與除水劑組合，可促進(jìn)目標(biāo)物在有機(jī)相中的分布，提高目標(biāo)物的回收率[30-31]。考察了不同用量（1、2、3 和4 g）的NaCl 和無(wú)水MgSO4（1∶4， m/m）對(duì)28 種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率的影響，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率見(jiàn)圖1B。當(dāng)鹽析與除水劑用量為1 g 時(shí)， 28 種農(nóng)藥的回收率為65.8%～169.0%，其中，伏殺硫磷的回收率高達(dá)169%；當(dāng)鹽析與除水劑用量增至2 g 時(shí)， 28 種農(nóng)藥的回收率為67.1%～118.0%，符合分析要求；當(dāng)鹽析與除水劑用量為3.0 和4.0 g 時(shí)，目標(biāo)農(nóng)藥回收率為63.0%～133.0%和64.3%～126.0%，伏殺硫磷和甲胺磷等農(nóng)藥回收率偏高（gt;120%）。因此，本研究選擇鹽析與除水劑用量為2.0 g。

2.1.3 Fe3O4-PLS用量的優(yōu)化

考察了不同用量（10、20、30、40 和50 mg）的凈化材料Fe3O4-PLS 對(duì)28 種有機(jī)磷農(nóng)藥回收率的影響，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率分布見(jiàn)圖2A。不同F(xiàn)e3O4-PLS 用量下，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率均在60.7%～104.0%內(nèi)，符合分析要求。其中，當(dāng)Fe3O4-PLS 用量為40 mg 時(shí)，回收率處于70%～120%的目標(biāo)農(nóng)藥數(shù)量最多，占比高達(dá)92.8%。當(dāng)Fe3O4-PLS 用量增至50 mg，目標(biāo)農(nóng)藥回收率為61.8%～98.2%，其中85.7%的目標(biāo)農(nóng)藥回收率在70%～120%內(nèi)，目標(biāo)物的回收率未得到進(jìn)一步改善。本實(shí)驗(yàn)選擇Fe3O4-PLS 的用量為40 mg。

2.1.4 C18用量的優(yōu)化

C18 常用于脂肪、脂肪酸和甾醇等非極性物質(zhì)的吸附去除[32]。考察了Fe3O4-PLS（40 mg）和不同用量（10、20、30、40 和50 mg）C18 組合凈化對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥回收率的影響。如圖2B 所示，在不同的C18 用量下，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率影響相當(dāng)，符合殘留分析要求。考慮到節(jié)約成本，選擇C18 用量為10 mg。

與單獨(dú)使用Fe3O4-PLS 凈化相比，萃取液經(jīng)40 mg Fe3O4-PLS 和10 mg C18 共同凈化可實(shí)現(xiàn)基質(zhì)干擾物的高效吸附去除，凈化效果較佳，尤其是硫環(huán)磷、殺蟲(chóng)畏、毒死蜱、馬拉硫磷、敵百蟲(chóng)、磷胺、殺撲磷和保棉磷等目標(biāo)物的基質(zhì)效應(yīng)明顯減弱（電子版文后支持信息圖S3）。

2.2 方法驗(yàn)證

2.2.1 線性范圍、方法檢出限及方法定量限

配制濃度為0.5、1、2、5、10、25、50、100 和250 μg/L 的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液。其中，溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液采用甲醇溶液配制而成，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液采用空白基質(zhì)的提取溶液配制。溶液經(jīng)LC-MS/MS分析后，通過(guò)分析物的峰面積（y）與濃度（x，μg/L）的關(guān)系擬合溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，線性方程、基質(zhì)效應(yīng)和MLOD 等參數(shù)見(jiàn)表1。二嗪磷、馬拉硫磷和苯線磷等13 種目標(biāo)農(nóng)藥的線性范圍為0.5～250 μg/L；內(nèi)吸磷、甲胺磷和地蟲(chóng)硫磷等9 種目標(biāo)農(nóng)藥在1～250 μg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；敵百蟲(chóng)、殺撲磷和殺蟲(chóng)畏等6 種目標(biāo)農(nóng)藥在2～250 μg/L 范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。28 種農(nóng)藥的MLODs為0.03～0.85 μg/kg， MLOQs 為0.5～2.0 μg/kg。

2.2.2 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)通過(guò)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率和溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程斜率的比值進(jìn)行評(píng)價(jià)[33]，其中，當(dāng)斜率比為1 時(shí)，表示無(wú)基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)斜率比小于1 時(shí)，呈基質(zhì)抑制效應(yīng)；當(dāng)斜率比大于1 時(shí)，呈基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。同時(shí)，根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)的差異程度，進(jìn)一步對(duì)基質(zhì)/溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液線性的斜率比值進(jìn)行細(xì)化。當(dāng)斜率比在0.8～1.2 之間時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)抑制或增強(qiáng)效果較弱；斜率比在0.5～0.8 或1.2～1.5 范圍內(nèi)，表現(xiàn)為中等基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)斜率比小于0.5 或大于1.5 時(shí)，表示基質(zhì)效應(yīng)增強(qiáng)或抑制效果較為顯著[34]。由表1 可見(jiàn)，28 種目標(biāo)農(nóng)藥的斜率比為0.51～1.26；其中，僅有苯線磷、甲胺磷、乙硫磷和地蟲(chóng)硫磷4 種農(nóng)藥表現(xiàn)出明顯的基質(zhì)效應(yīng)，表明基質(zhì)效應(yīng)對(duì)目標(biāo)物的定量分析影響相對(duì)較小。為了實(shí)現(xiàn)所有分析目標(biāo)物的準(zhǔn)確定量分析，仍采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線進(jìn)行濃度校正。

2.2.3 回收率和精密度

選取空白蝦樣品基質(zhì)進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，目標(biāo)物添加濃度水平分別為0.5、1、2、5、10、100 和250 μg/kg（n=3），按照1.2.1 節(jié)的方法進(jìn)行檢測(cè)，目標(biāo)農(nóng)藥的回收率見(jiàn)電子版文后支持信息表S3。馬拉硫磷、苯線磷和甲基硫環(huán)磷等13 種目標(biāo)農(nóng)藥在0.5～250 μg/kg 添加水平下的回收率為60.3%～119.0%，RSDs 為0.9%～19.0%。受儀器靈敏度限制，內(nèi)吸磷、蠅毒磷和地蟲(chóng)硫磷等9 種目標(biāo)農(nóng)藥在添加濃度為0.5 μg/kg 時(shí)未檢出，當(dāng)目標(biāo)物添加濃度為1～250 μg/kg 時(shí)，該9 種目標(biāo)農(nóng)藥的回收率為60.1%～118.0%，RSDs 為0.8%～19.0%；敵百蟲(chóng)、殺撲磷和伏殺硫磷等6 種目標(biāo)農(nóng)藥在添加濃度為0.5 和1.0 μg/kg 時(shí)未檢出，當(dāng)添加濃度2～250 μg/kg 時(shí)，回收率為62.9%～117.0%， RSDs 為1.2%～18.0%。綜上，在0.5～250 μg/kg 的添加水平下， 28 種目標(biāo)農(nóng)藥回收率為60.1%～119.0%， RSDs 為0.8%～19.0%，方法的準(zhǔn)確度和精密度符合殘留分析要求。

2.2.4 本方法與QuEChERS方法對(duì)比

將磁性“一步法”與QuEChERS 方法在萃取溶劑、鹽析與除水劑和凈化劑等用量、樣品前處理時(shí)間以及目標(biāo)物回收率等方面進(jìn)行對(duì)比（表2）。選取空白蝦樣品基質(zhì)進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，添加濃度水平為100 μg/kg（n=3）。QuEChERS 方法和本方法的目標(biāo)物回收率分別為60.3%～102.0%和62.4%～94.8%，均滿足農(nóng)藥殘留分析要求。為實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的理想萃取效率， QuEChERS 方法中單個(gè)樣品萃取溶劑的消耗量為10 mL， 本方法中單個(gè)樣品的萃取溶劑用量為5 mL， 僅為QuEChERS 方法的1/2。在鹽析與除水劑用量方面， QuEChERS 方法需消耗7.7 g 鹽析與除水劑，本方法的鹽析與除水劑用量?jī)H為2 g。在樣品凈化過(guò)程中， QuEChERS 方法中凈化劑的用量為400 mg PSA 和400 mg C18，本方法僅需使用40 mg Fe3O4-PLS和10 mg C18 即可實(shí)現(xiàn)樣品的理想凈化。更重要的是， QuEChERS 方法的單個(gè)樣品前處理時(shí)間約為15 min， 而本方法在5 min 之內(nèi)即可完成樣品前處理，大大縮短了樣品前處理時(shí)間，顯著提高了樣品前處理效率。本方法在萃取溶劑、鹽析與除水劑和凈化劑用量以及樣品前處理時(shí)間等方面均展現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)。

2.2.5 不同水產(chǎn)品中的驗(yàn)證研究

為評(píng)價(jià)本方法對(duì)不同水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的適用性，選取10 種不同種類(lèi)的水產(chǎn)品空白樣品（梭子蟹、青蟹、南美白對(duì)蝦、美國(guó)紅魚(yú)、大黃魚(yú)、鯽魚(yú)、鱸魚(yú)、鯉魚(yú)、鯛魚(yú)和鳊魚(yú)）進(jìn)行回收率驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。目標(biāo)農(nóng)藥的添加濃度為100 μg/kg（n=3），不同水產(chǎn)品中目標(biāo)農(nóng)藥的回收率結(jié)果和基質(zhì)效應(yīng)見(jiàn)電子版文后支持信息表S4 和S5。結(jié)果表明，雖然目標(biāo)農(nóng)藥的回收率因水產(chǎn)品種類(lèi)和目標(biāo)農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)的不同而存在差異，但所有水產(chǎn)品中的目標(biāo)農(nóng)藥回收率均在60%～120%范圍內(nèi)， RSD 均小于20%，符合農(nóng)藥殘留分析要求。同時(shí)， 28 種有機(jī)磷農(nóng)藥在不同種類(lèi)的水產(chǎn)品中的基質(zhì)效應(yīng)范圍為0.6～1.4，其中79.3%的有機(jī)磷農(nóng)藥未表現(xiàn)出明顯的基質(zhì)效應(yīng)。因此，本方法在不同種類(lèi)水產(chǎn)品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析方面具有良好的適用性。

2.2.6 實(shí)際樣品分析

采用本方法對(duì)浙江省內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)中18 種水產(chǎn)品中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行分析，目標(biāo)水產(chǎn)品包括白條魚(yú)（2）、鯉魚(yú)（3）、草魚(yú)（2）、鯰魚(yú)（1）、黑魚(yú)（1）、鯽魚(yú)（2）、七星鱸（1）、大嘴黑鱸（1）、美國(guó)紅魚(yú)（1）、大黃魚(yú)（3）和青蟹（1），具體采樣信息見(jiàn)電子版文后支持信息圖S1 和表S2。結(jié)果表明，僅在鯰魚(yú)中檢出毒死蜱，檢出濃度為0.54 μg/kg， 其余27 種有機(jī)磷農(nóng)藥在所有水產(chǎn)品中均未檢出。目前，國(guó)內(nèi)外缺乏水產(chǎn)品中目標(biāo)農(nóng)藥的最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，然而，根據(jù)我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 27632021）和歐盟文件（396/2005）中制定的農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的最大殘留限量（0.01～10 mg/kg），水產(chǎn)品中檢測(cè)到的毒死蜱濃度較低，處在可安全食用范圍內(nèi)。

3 結(jié)論

本研究基于磁性Fe3O4-PLS 為凈化劑，開(kāi)發(fā)了磁性“一步法”前處理技術(shù)，結(jié)合LC-MS/MS，建立了水產(chǎn)品中28 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的精準(zhǔn)定量分析方法。考察了萃取溶劑類(lèi)型、鹽析與除水劑、Fe3O4-PLS 和C18 用量等對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥回收率的影響，獲得最佳前處理?xiàng)l件。28 種有機(jī)磷農(nóng)藥的MLODs 為0.03～0.85 μg/kg， MLOQs 為0.50～2.00 μg/kg。不同添加濃度水平下，目標(biāo)物的回收率在60.1%～119.0%范圍內(nèi)， RSDs 為0.8%～19.0%，符合殘留分析要求。與QuEChERS 方法相比，磁性“一步法”在萃取溶劑、鹽析與除水劑、凈化劑用量等方面展現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢(shì)，尤其在提升樣品前處理效率方面，可將單個(gè)樣品前處理時(shí)間縮短至5 min 內(nèi)。進(jìn)行了磁性“一步法”在不同種類(lèi)水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析的驗(yàn)證研究，結(jié)果表明，本方法在不同種類(lèi)水產(chǎn)品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留分析中具有較好的適用性，可為水產(chǎn)品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留監(jiān)管、隱患排查、毒理效應(yīng)及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等研究提供可靠的技術(shù)支撐。

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