胎盤11β-HSD的表達差異與雙胎生長不一致的關系

[摘要]"目的"研究胎盤11β-羥基類固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid"dehydrogenase，11β-HSD）的表達差異與雙胎生長不一致的關系。方法"選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對，根據雙胎出生體質量差是否在20%及以上，分為雙胎生長不一致（discordant"twins，DT）組（實驗組）及雙胎生長一致（concordant"twins，CT）組（對照組）。采用qRT-PCR法檢測兩組胎兒胎盤組織中11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA的表達水平及差異。結果"兩組胎兒胎盤組織中11β-HSD1"mRNA的表達水平比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）；CT組A孩與B孩的11β-HSD2"mRNA表達水平比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），而DT組小孩胎盤11β-HSD2"mRNA的表達水平顯著低于DT組大孩的表達水平，差異有統計學意義（Plt;0.05）。結論"胎盤11β-HSD2的表達差異可能與雙絨毛膜雙胎生長不一致的發生有關。

[關鍵詞]"雙胎生長不一致；胎盤；11β-羥基類固醇脫氫酶；表達差異；雙絨毛膜雙胎

[中圖分類號]"R714""""""[文獻標識碼]"A""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.14.011

Relationship"between"the"expression"difference"of"11β-HSD"in"placenta"with"discordant"twins

NI"Li1，"ZHU"Hui2

1.Department"of"Clinical"Pharmacy，"Affiliated"Hospital"of"Jiaxing"University，"Jiaxing"Maternity"and"Child"Health"Care"Hospital"in"Zhejiang"Province，"Jiaxing"314000，"Zhejiang，"China;"2.Department"of"Clinical"Obstetrics，"Affiliated"Hospital"of"Jiaxing"University，"Jiaxing"Maternity"And"Child"Health"Care"Hospital"in"Zhejiang"Province，"Jiaxing"314000，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"study"the"relationship"between"the"expression"difference"of"11β-hydroxysteroid"dehydrogenase"（11β-HSD）"in"placenta"with"discordant"twins."Methods"Twelve"pairs"ofnbsp;discordant"twins"（DT）"group"delivered"in"Jiaxing"Maternal"and"Child"Health"Hospital"from"January"2021"to"December"2022"were"selected"as"the"experimental"group，"and"15"pairs"of"concordant"twins"（CT）"group"were"selected"as"the"control"group."The"mRNA"expression"levels"of"11β-HSD1"and"11β-HSD2"in"fetal"placenta"of"the"two"groups"were"detected"by"qRT-PCR."Results"The"mRNA"expression"of"11β-HSD1"showed"no"significant"difference"between"two"groups"（Pgt;0.05）."The"mRNA"expression"of"11β-HSD2"did"not"statistically"significantly"differ"between"children"A"and"B"in"CT"group"（Pgt;0.05），"while"the"smaller"children"had"a"lower"mRNA"expression"of"11β-HSD2"in"DT"group"（Plt;0.05）."Conclusion"The"difference"of"placental"11β-HSD2"expression"may"be"related"to"the"occurrence"of"twin"growth"discordant.

[Key"words]"Twin"inconsistent"growth;"Placenta;"11β-Hydroxysteroid"dehydrogenase;"Expression"difference;"Dichorionic"twins

雙胎妊娠與單胎妊娠相比，具有更高的新生兒不良結局風險，會顯著增加胎兒早產、生長受限的發生率[1-4]。因生長受限導致雙胎出生體質量差異達到20%或更高時（即雙胎生長不一致），會顯著影響新生兒圍產期結局[3，5-9]。

導致雙胎生長不一致的高危因素有很多，近些年的研究都將重點放在了胎盤功能對胎兒生長發育的影響上[10-14]。11β-羥基類固醇脫氫酶（11β-hydroxysteroid"dehydrogenase，11β-HSD）是一種在胎盤表達，能夠使活性糖皮質激素及其非活性代謝產物相互轉化的酶系，已被確認會影響人類多種疾病的發病，但是目前尚無相關報道表明其對雙胎生長不一致的作用[15]。本研究以雙絨毛膜雙胎為研究對象，通過qRT-PCR法測定胎盤中11β-HSD的表達水平，從而研究其與雙胎生長不一致的關系。

1""對象與方法

1.1""研究對象

選取2021年1月至2022年12月在嘉興市婦幼保健分娩的雙絨毛膜雙胎27對，根據雙胎胎兒出生體質量差是否在20%及以上，分為雙胎生長不一致（discordant"twins，DT）組（實驗組）及雙胎生長一致（concordant"twins，CT）組（對照組）。收集兩組胎兒基本信息，DT組每對雙胎中體質量較重胎兒為大孩、較輕胎兒為小孩，CT組因每對雙胎體質量接近，故隨機分為A孩、B孩，本研究所有患者均簽署知情同意書，且經筆者醫院倫理學委員會討論審議通過[倫理審批號：2020（醫倫）-1]。納入標準：""""""①在嘉興市婦幼保健分娩；②孕婦病歷書寫資料完整；③雙絨毛膜雙胎妊娠、胎兒無畸形，雙胎出生體質量差20%及以上者；④剖腹產胎兒娩出后收集胎兒胎盤組織，進行qRT-PCR法進行檢測；⑤獲得患者知情同意。排除標準：①患者病歷資料不完整；②非筆者醫院出生；③胎兒先天畸形；④妊娠合并雙胎生長不一致發生高危因素，如妊娠期糖尿病、妊娠期高血壓、妊娠期貧血等。

1.2""資料收集

通過院內電子病歷系統，收集孕婦及新生兒相關資料：①孕婦基本信息：孕婦分娩時的年齡、胎兒娩出時的孕周、孕婦妊娠次數、分娩次數、是否通過輔助生殖技術妊娠、胎兒分娩時間、雙胎性別是否一致。②新生兒基本信息：孕期羊水深度是否有異常、臍動脈SD值是否異常、胎兒有無臍帶繞頸、胎盤形狀是否異常、胎兒的出生體質量等。

1.3""11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA水平測定

剖腹產當天胎兒娩出后，取胎盤組織（母胎面即有臍帶面）2cm×2cm×2cm，生理鹽水或者BPS沖洗后放入EP管中，–80℃冰箱冷凍保存。實驗時，取出組織按照廠家說明使用Trizol試劑制備總RNA，取RNA（1μg）、4μl"5×"PrimeScript"RT"Master"Mix和"RNase-free"水（補足至最終體積20μl）組成混合物；37℃"15min，85℃"5s進行反轉錄，PCR擴增是在ABI"7500序列檢測系統上進行的。設計引物時，采用"Primer"5.0"軟件，合成由上海生工公司進行，內參選擇GAPDH序列：上游：5’-CAAGGCTGTGGG"CAAGGT-3’，下游：5’-GGAAGGCCATGCCAGT"GA-3’；11β-HSD1序列：上游：5’-AAGTTGCAGTG"AGCCGAGATC-3’，下游：5’-TTCCGAGGCAGAGT"CTTGCT-3’；11β-HSD2序列：上游：5’-GGCC"AAGGTTTCCCAGTGA-3’，下游：5’-GAGGGTGT"TTGGGCTCATGA-3’。11β-HSD1、11β-HSD2標準化為內部對照GAPDH的含量（2-??Ct）。每個樣本重復分析3次計算平均表達量。按照TaKaRa"PrimeScript?"RT"Master"Mix（Perfect"Real"Time）（Code"No."RR036Q）說明書要求進行PCR擴增。測定均一式4份。

1.4""統計學方法

采用SPSS26.0統計學軟件對數據進行處理分析，計量資料如果符合正態分布，則以均數±標準差（）表示，行t檢驗；若不符合正態分布則以中位數（四分數間距）[M（P25，P75）]表示，行非參數軼和檢驗（Mann-Whitney"U"test）。計數資料用例數（百分數）[n（%）]表示，行χ2檢驗或Fisher確切概率法。Plt;0.05為差異有統計學意義。

2""結果

2.1""孕婦、胎兒基本情況比較

兩組孕婦一般臨床資料差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表1。兩組胎兒組間一般臨床資料差異無統計學意義（Pgt;0.05），見表2。

2.2""胎兒胎盤11β-HSD1、11β-HSD2"mRNA的表達比較

DT組小孩胎盤11β-HSD2"mRNA的相對表達量（2-??Ct值）與DT組大孩比，其表達水平降低，差異有統計學意義（Plt;0.05）；11β-HSD1"mRNA的相對表達量比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05）。而對CT組胎兒A孩與B孩胎盤11β-HSD1和11β-HSD2"mRNA的相對表達量進行比較，差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。見表3。

3""討論

雙胎生長不一致是雙胎妊娠比較常見的一種并發癥，與胎兒圍產期死亡率增加有關[16]。隨著輔助生殖技術的成熟，雙胎生長不一致的發生率日益增長，約為16%[17]。導致雙胎生長不一致的高危因素有許多，包括妊娠期高血壓、糖尿病、輔助生殖技術的使用、孕產史次數多、孕期增重過多、雙胎胎兒性別不同等[18]。本文對孕婦及胎兒相關混雜因素行Fisher確切概率法檢驗后，發現兩組孕婦及胎兒組間一般臨床資料差異無統計學意義。

遺傳差異和胎盤功能障礙是雙絨毛膜雙胎生長受限最常見的原因[19]。胎盤是聯系胎兒與母體之間的重要器官，它在胚胎發育過程中起著營養供給和代謝調節的作用[20]。11β-HSD是一種在胎盤合體滋養層細胞表達的重要酶系，它參與糖皮質激素（皮質醇）的代謝調節，從而影響胎兒的生長發育。11β-HSD有兩個亞型：11β-HSD1、11β-HSD2，可氧化、還原糖皮質激素[21]。有文獻研究了成年男性同卵雙胎臍周皮下脂肪組織11β-HSD1"mRNA的表達量差異，結果顯示，雙胎中體質量較重者11β-HSD1"mRNA的表達水平顯著升高，差異有統計學意義（Plt;0.05）[22]。該文獻未對11β-HSD2的表達量進行比較研究，是因其不在脂肪組織中表達[23]。該結果證明了11β-HSD的表達差異與雙胎體質量差異存在關聯。

根據上述研究結果，本研究在兩組研究對象一般臨床資料無差異的前提下，采用qRT-PCR法檢測了11β-HSD1和11β-HSD2在兩組胎兒胎盤中的表達量。結果顯示11β-HSD1、11β-HSD2在DT組和CT組胎兒胎盤中均有表達。11β-HSD1的表達量在兩組胎兒胎盤中差異無統計學意義（Pgt;0.05）。11β-HSD2在CT組A孩與B孩中的表達差異無統計學意義（Pgt;0.05），但在DT組小孩胎盤中的表達量與DT組大孩相比，明顯降低，差異有統計學意義（Plt;0.05），這表明胎盤11β-HSD2的低表達可能與雙絨毛膜雙胎胎兒生長不一致的發生相關。雙絨毛膜雙胎可以認為是概念上的單胎，因雙胎均有獨立的胎盤跟羊膜囊，只是碰巧生長在一個子宮里。因此，雙絨毛膜雙胎胎兒生長受限模式可以遵循單胎胎兒生長受限的模式。大量文獻研究已證實，單胎胎兒生長受限與胎盤11β-HSD2蛋白的低表達有關[24]。

但是截至目前，對于胎盤11β-HSD的表達差異與雙胎生長不一致的關系的研究還相對有限。本次研究樣本量較少，還需要進一步積累資料來驗證兩者之間的關系。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] 任靜，"張海燕，"陳慧，"等."雙胎妊娠絨毛膜性與妊娠結局的關系[J]."新疆醫科大學學報，"2023，"46（3）："338–341.

[2] 謝育娣，"趙敏."單絨毛膜性與雙絨毛膜性雙胎妊娠結局比較分析[J]."中國婦幼保健，"2023，"38（05）："801–804.

[3] Practice"Bulletin"No."159"Summary："Management"of"preterm"Labor[J]."Obstet"Gynecol，"2016，"127（1）："190–191.

[4] WEINER"E，"BARBER"E，"FELDSTEIN"O，"et"al."The"placental"component"and"neonatal"outcome"in"singleton"vs."twin"pregnancies"complicated"by"gestational"diabetes"mellitus[J]."Placenta，"2018，"63（2）："39–44.

[5] 李姝，"余慕雪，"馮嘉麗，"等."雙胎絨毛膜性、出生胎齡、出生體質量不一致程度與新生兒結局分析[J]."中山大學學報（醫學科學版），"2023，"44（6）："1030–1037.

[6] 黃嘉琦，"魏瑗."雙胎胎兒生長受限診斷與生長曲線研究[J]."中國計劃生育和婦產科，"2023，"15（12）："10–13.

[7] HIERSCH"L，"BARRETT"J，"AVIRAM"A，"et"al."Patterns"of"discordant"growth"and"adverse"neonatal"outcomes"in"twins[J]."Am"J"Obstet"Gynecol，"2021，"225（2）："181–187.

[8] D’ANTONIO"F，"ODIBO"A"O，"PREFUMO"F，"etnbsp;al."Weight"discordance"and"perinatalnbsp;mortality"in"twin"pregnancy："systematic"review"and"Meta-analysis[J]."Ultrasound"Obstet"Gynecol，"2018，"52（1）："11–23.

[9] JAHANFAR"S，"LIM"K，"OVIDEO-JOEKES"E."Birth"weight"discordance"and"adverse"perinatal"outcomes[J]."J"Perinat"Med，"2017，"45（5）："603–611.

[10] 陳曉燕，"朱元方."影響胎兒生長發育不可忽視的多因素管控[J]."中國計劃生育和婦產科，"2023，"15（12）："3–5.

[11] ASHWAL"E，"HIERSCH"L，"BERGER"H，"et"al."Pathologic"basis"for"the"definition"of"discordant"growth"in"dichorionic"twins[J]."Fetal"Diagn"Ther，"2021，"48（4）："279–287.

[12] SCHREY-PETERSEN"S，"BAUMER"S，"LOSSNER"U，"et"al."Adipocyte"fatty"acid-binding"protein"4"is"altered"in"growth"discordant"dichorionic，"but"not"in"monochorionic"twins[J]."J"Endocr"Soc，"2020，"4（4）："1–12.

[13] MORGAN"E"A，"SIDEBOTTOM"A，"VACQUIER"M，"et"al."The"effect"of"placental"location"in"cases"of"placenta"accreta"spectrum[J]."Am"J"Obstet"Gynecol，"2019，"221（4）："351–357.

[14] KALAFAT"E，"THILAGANATHAN"B，"PAPAGEORGHIOU"A，"et"al."Significance"of"placental"cord"insertion"site"in"twin"pregnancy[J]."Ultrasound"Obstet"Gynecol，"2018，"52（3）："378–384.

[15] 吳春麗，"李娟，"王晶，"等."關于11β-類固醇脫氫酶的研究進展[J]."海峽藥學，"2020，"32（4）："177–180.

[16] PARK"Y"H，"KIM"Y"N，"IM"D"H，"et"al."Neonatal"outcomes"between"discordant"monochorionic"and"dichorionic"twins[J]."J"Matern"Fetal"Neonatal"Med，"2021，"34（13）："2080–2088.

[17] 李秋影，"張慧，"陳倩，"等."輔助生殖技術對雙胎出生體質量不一致的影響[J]."中國當代兒科雜志，"2023，"25（12）："1239–1245.

[18] 晏紅."出生體質量不一致雙胎臨床資料分析[D]."貴陽："貴州醫科大學，"2022.

[19] LEWI"L，"DEVLIEGER"R，"DE"CATTE"L，"et"al.nbsp;Growth"discordance[J]."Best"Pract"Res"Clin"Obstet"Gynaecol，"2014，"28（2）："295–303.

[20] 范秀軍，"黃晨，"陳指龍，"等."妊娠期代謝性疾病與胎盤發育[J]."中國實用婦科與產科雜志，"2018，"34（9）："959–963.

[21] 廖建華，"李婉婷，"梁真嬌."妊娠期糖尿病患者胎盤中不同亞型11β-羥類固醇脫氫酶基因的表達水平及其臨床意義[J]."廣西醫學，"2019，"41（16）："2026–2030.

[22] VIHMA"V，"NAUKKARINEN"J，"TURPEINEN"U，"et"al."Metabolism"of"sex"steroids"is"influenced"by"acquired"adiposity-A"study"of"young"adult"male"monozygotic"twin"pairs[J]."J"Steroid"Biochem"Mol"Biol，"2017，"172（2）："98–105.

[23] KUPCZYK"D，"BILSKI"R，"KOZAKIEWICZ"M，"et"al."11Beta-HSD"as"a"new"target"in"pharmacotherapy"of"metabolic"diseases[J]."Int"J"Mol"Sci，"2022，"23（16）："8984–8998.

[24] 時雪婷."孕期母體鎘暴露通過活性糖皮質激素過暴露損害胎盤血管生成的機制探討[D]."合肥："安徽醫科大學，"2021.

（收稿日期：2023–12–22）

（修回日期：2024–03–05）