表達綠色熒光蛋白的坦布蘇病毒的構建與鑒定

章麗嬌,田宇杰,張蘭香,趙冬敏,韓凱凱,黃欣梅,楊 婧,吳鳳瑤,劉青濤,劉宇卓,張小飛,李 銀

(1.江蘇省農業科學院獸醫研究所,江蘇南京 210014;2.獸用生物制品(泰州)國泰技術創新中心,江蘇泰州 225300;3.貴州省農業科學院畜牧獸醫研究所,貴州貴陽 550005;4.山東省日照市五蓮縣動物疫病預防控制中心,山東五蓮 262300)

坦布蘇病毒(Tembusu virus,TMUV)是隸屬于黃病毒科黃病毒屬恩塔亞病毒群的蟲媒病毒,可引起肉鴨出現嚴重的神經癥狀和蛋鴨產蛋量的急劇下降[1]。自2010年首次在我國暴發并大面積傳播后,坦布蘇病毒病已經給我國的水禽養殖業造成了巨大的經濟損失[2]。TMUV基因組為單鏈正股RNA,全長約10 990 bp,包含一個開放性閱讀框及其兩側的5′和3′非編碼區(untranslated region,UTR)。其中閱讀框編碼長度為3 245個氨基酸的多聚蛋白前體,在細胞和病毒蛋白酶的共同作用下裂解為3個結構蛋白(核衣殼蛋白C、前膜蛋白PrM及囊膜蛋白E)和7個非結構蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B及NS5)[3]。

以病毒基因組為載體表達外源基因在藥物遞送、基因治療及疫苗研發等方面具有重要的應用價值。此外,將報告基因插入病毒基因組中構建報告病毒,可應用于高通量抗病毒藥物的篩選、細胞受體的篩選以及評估疫苗或藥物效果時的活體動物體內成像。目前,已經成功構建了黃熱病病毒[4]、脾傳腦炎病毒[5]、寨卡病毒[6-7]等多種黃病毒屬成員多種類型的報告病毒。在坦布蘇病毒上,國內有學者將熒光素酶基因插入到CQW1株基因組5′UTR和C蛋白基因之間[8],將增強型綠色熒光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)插入到 FX2010-180P株NS5蛋白基因與3′UTR之間[9],分別成功拯救出表達熒光素酶或者熒光蛋白的坦布蘇報告病毒。……