仰口線蟲PCR檢測方法的建立及應用

周璐露,要慧中,劉天緣,張佳琳,馬 麗,任洪英,楊鈺瑩,林 青*

(1.西北農(nóng)林科技大學動物醫(yī)學院,陜西楊凌 712100; 2.爐霍縣農(nóng)牧農(nóng)村和科技局,四川爐霍 626500)

仰口線蟲(Bunostomumspp.)是一種全球范圍內(nèi)反芻動物消化道寄生蟲,潮濕多雨的環(huán)境有利于其生長,具有一定季節(jié)性[1-2],主要寄生于反芻動物的小腸內(nèi),其中,寄生于羊的仰口線蟲種類主要為羊仰口線蟲(B.trigonocephalum),但有時牛仰口線蟲(B.phlebotomum)也可感染羊只[3]。仰口線蟲的幼蟲在宿主體內(nèi)移行時引起的組織炎癥反應會導致宿主出現(xiàn)咳嗽等呼吸系統(tǒng)癥狀,嚴重時,肺臟出現(xiàn)淤血性出血和點狀出血等機械性損傷。成蟲吸食宿主血液,還可分泌毒素,不僅使損傷局部血液不斷流失,引起貧血,還引起宿主中毒,導致幼畜生長發(fā)育緩慢。仰口線蟲利用口囊吸附在宿主小腸壁上,導致小腸多點狀出血,黏膜炎性腫脹,嚴重感染時,宿主發(fā)生稀血病及惡病質(zhì),常因衰竭死亡[4]。

傳統(tǒng)的線蟲形態(tài)學診斷常用方法是光學顯微鏡鏡檢法,其具有操作簡單、結果直觀且成本低廉等特點。仰口線蟲病除了通過特征性的臨床病變以及尸檢時發(fā)現(xiàn)胃腸道中的蟲體來確診外,還可在生前從糞便中檢測出仰口線蟲蟲卵來確診。臨床中常采用檢測每克糞便中的蟲卵數(shù)(eggs per gram of faeces,EPG)對線蟲感染進行定性和定量測定[5]。但受限于鏡檢敏感度,有時也存在漏檢情況。

近年來,各種分子生物學技術發(fā)展迅速,逐漸完善的分子生物學診斷方法也使得其成為寄生蟲病診斷的一種重要手段。……