LAMP在下呼吸道感染病原菌快速檢測中的臨床應用

雷星 龍麗

[摘要]?目的?利用環介導等溫擴增檢測（loop?mediated?isothermal?amplification，LAMP）即呼吸道病原菌核酸聯合檢測法（13聯）分析痰標本病原菌的檢出情況，為臨床診療提供病原學循證依據。方法?選取2022年1月至12月銅仁市人民醫院收治的1642例下呼吸道感染患者作為研究對象，采集痰標本/肺泡灌洗液進行LAMP（13聯）檢測，分析呼吸道病原菌檢出情況及其與性別、年齡、季節的關系。結果?13種呼吸道病原菌的總體檢出率男性明顯高于女性（P<0.01）。在不同年齡組中，3～6歲患者流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌的檢出率、6～18歲患者肺炎支原體的檢出率、>60歲患者耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌和肺炎克雷伯菌的檢出率均明顯高于其他組（P<0.05）。在不同季節組中，肺炎鏈球菌和肺炎衣原體好發于春季，肺炎支原體在秋節感染率最高，差異均具有統計學意義（P<0.05）。結論?LAMP可快速檢測出病原菌，為下呼吸道感染的預防及臨床診療提供病原學依據。

[關鍵詞]?下呼吸道感染；常見病原菌；環介導等溫擴增檢測

[中圖分類號]?R743.3??????[文獻標識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.12.014

Clinical?application?of?LAMP?in?rapid?detection?of?pathogens?in?lower?respiratory?tract?infections

LEI?Xing，?LONG?Li

Department?of?Laboratory，?Tongren?City?Peoples?Hospital，?Tongren?554300，?Guizhou，?China

[Abstract]?Objective?Loop?mediated?isothermal?amplification?（LAMP）?was?used?to?detect?the?distribution?of?pathogens?in?sputum?samples，namely?combined?nucleic?acid?detection?of?respiratory?pathogens?（13?pairs），?so?as?to?provide?provide?reference?for?clinical?accurate?diagnosis?and?treatment.?Methods?A?total?of?1642?patients?with?lower?respiratory?tract?infection?admitted?to?Tongren?City?Peoples?Hospital?from?January?to?December?in?2022?were?selected.?Each?patient?collected?sputum?specimens/?bronchoalveolar?for?detection?by?using?LAMP?（13?pairs）.?The?detection?of?pathogenic?bacteria?in?respiratory?tract?and?the?relationship?with?sex，?age?and?season?were?analyzed.?Results?The?overall?detection?rate?of?13?respiratory?pathogens?was?significantly?higher?in?males?than?in?females?（P<0.01）;?In?different?age?groups，?the?detection?rates?of?Haemophilus?influenzae?and?Streptococcus?pneumoniae?in?patients?aged?3-6，?Mycoplasma?pneumoniae?in?patients?aged?6-18，?and?methicillin-resistant?Staphylococcus?aureus，?Streptococcus?maltophilus，?and?Klebsiella?pneumoniae?in?patients?aged?over?60?were?significantly?higher?than?those?in?other?groups?（P<0.05）;?In?different?seasonal?groups，?Streptococcus?pneumoniae?and?Chlamydia?pneumoniae?were?more?prevalent?in?spring，?while?Mycoplasma?pneumoniae?had?the?highest?infection?rate?in?autumn，?and?the?differences?were?statistically?significant?（P<0.05）.?Conclusion?LAMP?can?be?used?to?detect?the?pathogen?rapidly?and?provide?the?basis?for?clinical?diagnosis?and?treatment.

[Key?words]?Lower?respiratory?tract?infection;?Common?pathogens;?Loop?mediated?isothermal?amplification

下呼吸道感染是由病毒、細菌、支原體、衣原體等病原菌入侵呼吸道引起的臨床常見的感染性疾病，在世界十大疾病死率中排名第4位。盡早啟用有效的干預措施對下呼吸道感染的防治具有重要意義[1]。由于不同病理生理條件下病原菌存在流行病學差異，影響疾病早期的診療，因此快速、高效的檢測手段顯得尤為重要。目前病原菌監測主要采用傳統的細菌分離培養法，該方法用時長、操作復雜，且陽性率低，難以滿足臨床的診療需求[2]。環介導等溫擴增檢測（loop?mediated?isothermal?amplification，LAMP）作為一種新興檢測技術，擴增效率高、反應時間短、特異性強，可快速、準確地檢測出下呼吸道感染病原菌（包括單一和混合的病原菌感染），極大彌補了傳統方法的不足。本研究應用LAMP（13聯）檢測1642例疑似下呼吸道感染患者樣本中13種常見病原體，分析研究其分布特點，為臨床診療提供詢證依據。

1??資料與方法

1.1??一般資料

收集2022年1月至12月在銅仁市人民醫院門診及住院部就診的1642例急性下呼吸道感染患者作為研究對象，其中男1002例，女640例；年齡0～89歲。納入標準：①首發癥狀以發熱，咳嗽、咳黃膿痰為主；②白細胞總數和（或）中性粒細胞比例增高；③胸部影像學提示有下呼吸道感染表現。排除標準：具有非感染原因如心力衰竭、肺水腫等或病毒所致的下呼吸道的影像學表現。本研究經銅仁市人民醫院倫理委員會審批通過（倫理審批號：TSYGJZ2021-5），所有患者均簽署知情同意書。

1.2??方法

1.2.1??痰標本的采集??痰標本的采集需在各病區專業護士的指導下進行，對昏迷或咳痰能力差無法自主咳痰者采用纖支鏡或肺泡灌洗法采集。痰液留取成功后由專業人員涂片染色并在低倍鏡下觀察，以白細胞>25個/LP，鱗狀上皮細胞<10個/LP，或鱗/白比例<1∶2.5為判定標準，若不合格則重新留取。

1.2.2??檢測方法??提取痰標本中的核酸后使用呼吸道病原菌核酸檢測試劑盒（北京博奧晶典生物技術有限公司）及配套軟件、運用LAMP（13聯）進行檢測，以陽性檢出率為統計指標分析呼吸道病原菌的檢出情況及與性別、年齡、季節之間的關系。

1.3??統計學方法

采用SPSS?26.0統計學軟件對數據進行處理分析。計量資料以均數±標準差（）表示，比較采用t檢驗；計數資料以例數（百分率）[n（%）]表示，比較采用c2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2??結果

2.1??病原菌的檢出情況

1642例患者中903例患者的病原菌檢測結果為陽性，病原菌檢出率為54.99%，排名前5位的病原菌分別為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌。其中檢測出1種病原菌的患者534例，占比59.13%；檢測出2種病原菌的患者317例，占比35.11；檢測出3種及以上病原菌的患者52例，占比5.76%；見表1。

2.2??病原菌與性別的關系

1642例患者中男1002例，女640例，男性患者陽性率為58.69%（588/1002），高于女性患者的49.21%（315/640），差異有統計學意義（c2=14.133，P<0.01）；其中男性患者的流感嗜血桿菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌檢出率均高于女性患者，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3??病原菌與年齡的關系

將患者按年齡劃分為0～3歲（n=1028）、3～6歲（n=211）、6～18歲（n=83）、18～60歲（n=162）、>60歲（n=158）5個年齡組，病原菌在上述5個年齡組中的檢出率比較，差異有統計學意義（c2=17.124，P<0.01）；其中流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌以3～6歲最多見，耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌及肺炎克雷伯菌在>60歲的老年人群檢出最多，肺炎支原體感染在6～18歲的青少年中較為突出，差異均有統計學意義（P<0.05），見表3。

2.4??不同季節病原菌檢出情況

以春、夏、秋、冬4個季節分組，患者檢出的陽性率分別為46.75%（88/189）、60.56%（253/418）、51.75%（227/438）、58.82%（351/597），差異有統計學意義（c2=18.714，P<0.01）。除嗜肺軍團菌外，其余12種呼吸道病原菌在4個季節均有檢出，其中肺炎鏈球菌和肺炎衣原體好發于春季，肺炎支原體在秋節檢出率最高，陽性率比較差異有統計學意義（P<0.05），見表4。

3??討論

1642例痰標本中共檢出陽性標本903例，總陽性率為54.99%，檢測出1種病原菌的患者占比59.13%，2種及以上病原菌的患者占比40.86%；多為6歲以下兒童，可能與患兒年齡偏小、免疫力較差有關[3]。檢出排前5位病原菌分別為流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌，男性患者總體陽性率為58.69%，高于女性患者的49.21%，與段肖麗等[4]研究基本一致；其中男性患者流感嗜血桿菌、耐甲氧西林葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌的檢出率均高于女性患者，差異有統計學意義，與顧錦等[5]報道一致。有研究表明吸煙、飲酒、手衛生管理是男性比女性更容易發生下呼吸道感染的3個重要因素，盡早戒煙、戒酒及正確的洗手方式等可很好地預防下呼吸道感染，尤其是對于老年男性患者[6]。

本研究中，13種呼吸道病原菌在0～3歲、3～6歲、6～18歲、18～60歲及>60歲5個年齡組的檢出情況存在顯著差異，其中流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌以3～6歲的學齡前兒童最多見，這與李巖等[7]研究基本一致。流感嗜血桿菌和肺炎鏈球菌為13種病原菌中檢出最多的2種病原體，3～6歲兒童由于呼吸系統發育相對欠完善、免疫系統發育尚未健全，體質普遍偏弱；加之與同齡兒童間的接觸較多，更容易受呼吸道病原菌的感染，群體間的交叉感染風險也較大。研究發現加強戶外活動鍛煉，每天的運動時間超過3h，均衡飲食及疫苗接種均可減少兒童呼吸道感染的發生[8]。同時盡早查明病原菌，合理使用抗菌藥物對兒童呼吸道感染的治療及減少細菌的耐藥也非常關鍵[6]。耐甲氧西林葡萄球菌、嗜麥芽窄食單胞菌及肺炎克雷伯菌在>60歲的老年人群檢出最多。該類患者的痰標本多來源于呼吸內科、重癥醫學科、神經外科等，患者的基礎疾病多、病情重、住院時間長，醫院獲得性感染機會增加，與2021年全國細菌耐藥監測報告數據基本吻合[9]。

在春、夏、秋、冬四季中，患者的病原菌陽性檢出率分別為46.75%（88/189）、60.56%（253/418）、51.75%（227/438）、58.82%（351/597），差異有統計學意義。除嗜肺軍團菌外，其余12種病原菌在四季均有檢出。其中肺炎鏈球菌好發于春、冬季，在夏季檢出率明顯下降，提示春、冬季尤其要加強對肺炎鏈球菌防控措施，可在春、冬季提前接種肺炎鏈球菌疫苗，及時提供有效的主動免疫，降低發病風險；肺炎支原體在夏、秋季的檢出率較為突出，在冬季檢出率出現回落，春季的檢出率最低，與左麗娜等[10]研究基本一致。鄭素娟等[11]研究發現，肺炎支原體對溫、濕度比較敏感，夏季溫、濕度驟然升高，助長其繁殖和傳播，增加感染機會；加上夏季人們室外活動減少，使病原體更易侵入人體。定時打開門窗自然通風，減少空調的使用，可有效降低室內空氣中微生物的數量；同時佩戴口罩、保持有效安全社交距離（1m以上）也是減少肺炎支原體感染簡單、有效的方法。

綜上所述，通過對2022年銅仁市人民醫院疑似下呼吸道感染患者病原菌數據進行分析，病原菌的分布在性別、年齡、季節方面存在顯著差異，利用LAMP可快速檢測下呼吸道感染的病原菌，為臨床預防及診斷、盡早啟動針對性抗感染治療提供可靠依據，值得深入探討和應用。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

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（收稿日期：2023–06–18）

（修回日期：2024–04–03）