hMSH2和FHIT在宮頸癌中的表達及其相互關系

天津市濱海新區大港醫院（300270）薛春芬

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，該病的發生是個涉及多基因改變、多步驟的累積過程[1]，其分子機制至今仍未完全明確。hMSH2是MMR（mismatch repair）基因的一種，它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。FHIT是目前公認的抑癌基因，其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發生、發展關系密切。本研究檢測了宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中FHIT和hMSH2的表達，旨在探討兩者在宮頸癌發生、發展過程中可能起到的作用及其相關關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院存檔宮頸癌標本20例并采集2010年5月～2012年5月住院治療的15例宮頸癌和10例CIN患者病理標本，標本收集前病人均未經放化療及免疫治療。所有患者均按宮頸癌HE病理切片診斷標準確診和FIGO分期標準分期?；颊吣挲g26～72歲，平均48.91歲。同時，選取2011年因子宮良性病變行子宮全切術的30例正常宮頸上皮和慢性宮頸炎組織作為對照。

1.2 方法 采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶鏈接法（SP法）。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術公司，鼠抗人hMSH2單克隆抗體及SP試劑盒購自天津灝洋生物制品科技有限責任公司。所有標本均經10%甲醛固定，石蠟包埋，3μm厚連續切片?？乖⒉ㄐ迯停豢笷HIT工作濃度1∶600，hMSH2工作濃度1∶100，具體步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 結果判定

1.3.1 FHIT蛋白評定標準 FHIT蛋白的染色定位于細胞漿。①按染色強度評分：無色或淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。②按陽性細胞數所占百分比評分：＜10%為1分；10%～50%為2分；＞50%為3分。將染色強度評分與所測得的陽性細胞百分數評分相乘所得的積作為其最后得分，進行統計學檢驗。1～3分為（-），4～9分為（+）。

1.3.2 hMSH2蛋白評定標準 hMSH2蛋白的染色定位于細胞核上。選取腫瘤細胞壞死較少的5個高倍鏡（×400）視野，計數500個以上的細胞，陽性細胞數大于總計數細胞的20%時記為（+）。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0軟件包對數據進行統計學處理。

2 結果

2.1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中，hMSH2陽性表達9例，陽性表達率為30.0%；在CIN中，hMSH2陽性表達7例，陽性表達率為70.0%；在宮頸癌組織中，hMSH2陽性表達21例，陽性表達率為60.0%。CIN、宮頸癌和正常宮頸組織中，hMSH2陽性率依次降低，差異有顯著性（P＜0.05），后兩者相比差異亦有顯著性（P＜0.05），見附表1。

附表1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

2.2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中，FHIT呈中度至強陽性表達，陽性表達率為100%；在CIN中，FHIT陽性表達率為60.0%；在宮頸癌組織中，FHIT（-）22例，（+）13例，陽性表達率為37.1%。在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中，FHIT陽性率依次降低，差異有顯著性（P＜0.05）；正常宮頸和宮頸癌組織比較，差異有顯著性（P＜0.05），見附表2。

附表2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

2.3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關系在宮頸癌組織中，hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達無相關性；在FHIT蛋白表達陽性組中，hMSH2蛋白陽性表達率為53.8%，而在FHIT蛋白表達陰性組中，hMSH2蛋白陽性表達率為63.6%，二者相比差異無顯著性（r s＝-0.097，P＞0.05），見附表3。

附表3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關系

3 討論

MMR（mismatch repair）基因是生物進化過程中的保守基因，具有修復DNA堿基錯配、增強DNA復制準確性、維持基因組穩定性、降低自發突變的功能。hMSH2是MMR基因的一種，它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。本實驗結果顯示，hMSH2在CIN中表達最高，而在浸潤性宮頸癌及正常宮頸組織中表達依次降低。在CIN病變中，hMSH2的高表達可能的原因是，與正常宮頸鱗狀上皮細胞相比，CIN病變中異常的細胞增生增多[2]。當復制率增高時，微衛星序列（microsatellite sequences，MS）的突變率就增高，微衛星序列的突變有可能成為hMSH2基因的活性輸入信號。相反，當疾病由CIN發展到浸潤性宮頸癌的過程中，hMSH2蛋白表達降低，這很可能是因為機體細胞突變以及hMSH2基因表達的下調。這可在一定程度上反映宮頸癌的惡性程度。

FHIT是由Ohta等于1996年利用定位克隆技術和外顯子捕獲法發現的，定位于3p14.2區域，其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發生、發展關系密切，存在于多種與環境致癌因素密切相關的惡性腫瘤中[3]。本實驗結果顯示，FHIT蛋白在正常宮頸組中均有中至強陽性表達，其異常表達在CIN組中已經存在，推測FHIT蛋白的表達缺失有可能是宮頸癌發生的相對早期的分子生物學事件。FHIT蛋白表達的缺失，有希望成為臨床預測宮頸癌前病變發展為浸潤性宮頸癌的有用的分子生物學標記物。

本研究雖然發現宮頸癌組中hMSH2蛋白的表達和FHIT蛋白的表達都存在較高的異常，但是并未發現兩者之間存在顯著的相關性（rs＝-0.097，P＞0.05）。說明FHIT和hMSH2在促進宮頸癌的發生發展中的作用可能是獨立的，故兩者之間的關系還有待進一步研究。