渤海口蝦蛄消化酶活性與酶學(xué)性質(zhì)初步研究

黃義棚 趙宏晶 馬超 袁春營

摘?要：探討了渤海口蝦蛄的消化酶活性及部分酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明：口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均以肝胰腺最高，胃最低；口蝦蛄胃的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最適pH均為6，肝胰腺和腸道淀粉酶和脂肪酶的最適pH均為7，肝胰腺和腸道蛋白酶的最適pH均為8；口蝦蛄肝胰腺淀粉酶最適溫度為30?℃，胃的蛋白酶和淀粉酶及腸道淀粉酶的最適溫度均為35?℃，胃脂肪酶、肝胰腺蛋白酶和脂肪酶及腸道蛋白酶和脂肪酶的最適溫度均為40?℃。

關(guān)鍵詞：渤海；口蝦蛄（Oratosquilla?oratoria）；消化酶；酶學(xué)性質(zhì)

口蝦蛄（Oratosquilla?oratoria）俗稱皮皮蝦，屬于節(jié)肢動物門、軟甲綱、口足目、蝦蛄科、口蝦蛄屬，在中國各沿海均有分布，為中國境內(nèi)分布最廣、產(chǎn)量最大的口足類動物。口蝦蛄肉味鮮美，營養(yǎng)價值和藥用價值較高，深受廣大消費(fèi)者的喜愛。目前對于口蝦蛄的研究主要集中在遺傳生物學(xué)[1-2]、生理生化[3-9]、繁育[10-13]及藥用價值[14-16]等方面，口蝦蛄消化酶的研究報(bào)道較少，為此，我們開展了渤海口蝦蛄消化酶活性與酶學(xué)性質(zhì)初步研究，以期為口蝦蛄營養(yǎng)飼料的研究提供參考依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

口蝦蛄來自于渤海灣天津海域，體長（9.3±12.6）cm，共計(jì)60只。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?樣品處理?解剖口蝦蛄，取出肝胰腺、胃和腸道，去除胃腸道內(nèi)容物，吸干表面水分，分別稱重（20只口蝦蛄為一個樣品），加入9倍體積預(yù)冷的生理鹽水勻漿（冰浴），6?000?r/min、4?℃離心10?min，取上清液作為酶粗提液，-20?℃儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2?組織蛋白質(zhì)濃度測定?肝胰腺、胃和腸道組織中蛋白質(zhì)濃度用北京索萊寶科技有限公司生產(chǎn)的BCA蛋白濃度試劑盒測定。

1.2.3?蛋白酶活性?2%干酪素-0.1?mol/L?磷酸鹽緩沖液（pH值8.0）1?mL、酶粗提液1?mL混勻，置于37?℃水浴中，反應(yīng)15?min后加入30%三氯乙酸0.5?mL（空白在加入三氯乙酸后再加入粗提酶液），8?000?r/min離心4?min，取上清液1?mL，加入0.4?mol/L?Na2CO3?5?mL，稀釋的Folin試劑（與蒸餾水1∶1稀釋）1?mL，混勻，37?℃水浴顯色15?min，680?nm波長測定吸光值。蛋白酶活性用活力單位（U）表示，以1?mg蛋白的酶液每分鐘水解干酪素產(chǎn)生1?μg酪氨酸為1個酶活力單位。

1.2.4?淀粉酶活性?1.0%可溶性淀粉-0.1?mol/L磷酸鹽緩沖液（pH值7.0）1?mL，加入0.1?mL酶粗提液，37?℃水浴反應(yīng)30?min，加入DNS（3，5-二硝基水楊酸）顯色劑1.0?mL，煮沸10?min終止反應(yīng)，540?nm波長測定吸光值。淀粉酶活性用活力單位（U）表示，以1?mg蛋白的酶液每分鐘水解淀粉產(chǎn)生1?mg麥芽糖為1個酶活力單位。

1.2.5?脂肪酶?5?mL?0.025?mol/L磷酸緩沖液（pH?7.5）加入4?mL聚乙烯醇橄欖油乳化液，置37?℃水浴中預(yù)熱10?min，然后加入酶液0.5?mL，37?℃保溫30?min，立即加入95%乙醇15?mL終止反應(yīng)，加入酚酞指示劑3滴，用0.05?mol/L標(biāo)準(zhǔn)NaOH滴定至微紅色，并同時做空白對照。脂肪酶活性用活力單位（U）表示，以1?mg蛋白的酶液每分鐘催化脂肪產(chǎn)生1?μmol脂肪酸為1個酶活力單位。

1.2.6?pH值對口蝦蛄消化酶活性的影響?將酶反應(yīng)體系pH值設(shè)置為5.0、6.0、7.0、8.0、90，測定各消化酶活性。

1.2.7?溫度對口蝦蛄消化酶活性的影響?將酶反應(yīng)體系溫度設(shè)置為25、30、35、40、45?℃，測定各消化酶活性。

1.3?數(shù)據(jù)處理

對于試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示。

2?結(jié)果與分析

2.1?口蝦蛄的消化酶活性

結(jié)果見圖1—圖3。口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性以肝胰腺最高，胃最低，可能與反應(yīng)體系的pH值有關(guān)。

圖1?口蝦蛄的蛋白酶活性

圖2?口蝦蛄的淀粉酶活性

圖3?口蝦蛄的脂肪酶活性

2.2?pH值對口蝦蛄消化酶活性的影響

結(jié)果見圖4—圖6。隨著pH值的升高，口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢，口蝦蛄胃的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最適pH值均為6，肝胰腺和腸道淀粉酶和脂肪酶的最適pH值均為7，肝胰腺和腸道蛋白酶的最適pH值均為8。

圖4?pH值對口蝦蛄蛋白酶活性的影響

圖5?pH值對口蝦蛄淀粉酶活性的影響

圖6?pH值對口蝦蛄脂肪酶活性的影響

2.3?溫度對口蝦蛄消化酶活性的影響

結(jié)果見圖7—圖9。隨著溫度的升高，口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均呈現(xiàn)出先增加后降低的趨勢，肝胰腺淀粉酶最適溫度為30?℃，胃蛋白酶和淀粉酶及腸道淀粉酶的最適溫度均為35?℃，胃脂肪酶、肝胰腺蛋白酶和脂肪酶及腸道蛋白酶和脂肪酶的最適溫度均為40?℃。

圖7?溫度對口蝦蛄蛋白酶活性的影響

圖8?溫度對口蝦蛄淀粉酶活性的影響

圖9?溫度對口蝦蛄脂肪酶活性的影響

3?討論

消化酶對于口蝦蛄飼糧的消化吸收起著重要的作用。口蝦蛄幼體發(fā)育過程中，淀粉酶活力先增大，至假溞狀幼體Ⅴ期達(dá)到峰值后逐漸減小，仔蝦的淀粉酶活力顯著小于假溞狀幼體，隨著幼體的發(fā)育，幼體的胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶活力逐漸增大，除了仔蝦的脂肪酶活力和Ⅺ期假溞狀幼體無明顯差異外，仔蝦期的酶活力顯著高于其他發(fā)育期幼體的酶活力[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均以肝胰腺最高，胃最低，陳曉瑛等[17]也得到類似的結(jié)果。溫度和pH值是影響消化酶活性的重要理化因子，對蝦的不同部位消化酶活性的最適溫度和pH值不同，沈文英等[18]研究后發(fā)現(xiàn)，南美白對蝦胃、肝胰臟、腸道的淀粉酶最適溫度分別為35、30、35?℃，最適?pH值?均為6.2，蛋白酶最適溫度分別為60、55、60?℃，蛋白酶最適?pH值分別為6.5、85、8.0，脂肪酶最適溫度均為37?℃，最適?pH值均為7.7。黃燕華等[19]得到了不一樣的結(jié)果，南美白對蝦胃、肝胰臟、腸道淀粉酶的最適溫度均為30?℃，最適pH值分別為?6.0、7.0、6.5，蛋白酶的最適溫度均為60?℃，最適pH值分別為6.0、8.0、7.5，脂肪酶的最適溫度分別為50、30、40?℃，最適pH值均為70。本研究中口蝦蛄胃、肝胰腺、腸道淀粉酶的最適溫度分別為35、30、35?℃，最適pH值分別為6、7、7，蛋白酶最適溫度分別為35、40、40?℃，最適pH值分別為6、8、8，脂肪酶最適溫度均為40?℃，最適pH值分別為6、7、7。可見，不同物種、同一物種的不同部位、甚至同一物種的相同部位消化酶的酶學(xué)性質(zhì)也會不同。口蝦蛄消化酶的其他酶學(xué)性質(zhì)及酶學(xué)參數(shù)有待進(jìn)一步研究。

4?結(jié)論

本試驗(yàn)條件下，口蝦蛄的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均以肝胰腺最高，胃最低；口蝦蛄胃的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最適pH值均為6，肝胰腺和腸道淀粉酶和脂肪酶的最適pH值均為7，肝胰腺和腸道蛋白酶的最適pH值均為8；口蝦蛄肝胰腺淀粉酶最適溫度為30?℃，胃的蛋白酶和淀粉酶及腸道淀粉酶的最適溫度均為35?℃，胃脂肪酶、肝胰腺蛋白酶和脂肪酶及腸道蛋白酶和脂肪酶的最適溫度均為40?℃。

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